PGD周期中机械法和激光法活检对胚胎发育及妊娠结局的影响
摘要： 目的:比较机械法和激光法进行卵裂球和极体活检对胚胎发育及着床前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)周期妊娠结局的影响.方法:本研究包括20对夫妇的21个PGD周期,其中18个周期分别用机械法或激光法于受精后第3天进行卵裂球活检,并用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)分析检出的卵裂球,于受精后第5或第6天移植信号正常的胚胎;2个周期分别用机械法和激光法在取卵后行极体活检,后行胞浆内单精子注射(introcytoplasmic sperm injection,ICSI).同时将活检取出的极体进行FISH分析,于取卵后第3天移植经FISH检查正常的卵发育而来的胚胎.另外一个周期先用激光法实行了极体活检,由于FISH检查均无信号,后又用激光法对胚胎行卵裂球活检.结果:共活检胚胎145枚,其中109枚用机械法,36枚用激光法.活检后胚胎的继续发育率分别为72.48%和83.33%,囊胚形成率为33.94%和44.44%,临床妊娠率为38.46%和16.67%,着床率为21.43%和8.33%,两种方法无显著差异.对27枚卵行极体活检,其中12枚用机械法,15枚用激光法.活检后2PN受精率分别为58.33%和46.66%,继续发育率为66.67%和60.00%,亦无显著差异.对活检出的极体进行FISH分析,用机械法活检的极体信号阳性率为90.00%,显著高于激光法的28.57%.结论:用机械法和激光法行极体或卵裂球活检对胚胎发育的影响差异无统计学意义.但使用机械法活检卵裂球能获得较高的临床妊娠率和着床率.极体活检时能获得较高的受精率和继续发育率,故推荐使用机械法进行活检.
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血小板参数与子宫内膜增生及子宫内膜癌的关系
目的:评估血小板参数与子宫内膜病理情况之间的相关性,并探讨其在子宫内膜癌(EC)诊断预测中的价值及临床意义.方法:回顾分析2012年1月至2018年1月因异常阴道流血或流液于滨州医学院附属医院妇产科行子宫内膜病理学检查的386例患者的临床资料.根据子宫内膜病理结果将患者分为3组,其中子宫内膜癌组211例、子宫内膜增生组106例、正常子宫内膜组69例,比较刮宫术前获取的血小板计数(PLT)、血小板分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV)及血小板比积(PCT).结果:子宫内膜癌组的PLT、PDW、MPV水平高于正常子宫内膜组,差异有统计学意义(P<0.05).肌层浸润深度≥1/2患者的术前PDW及MPV值高于肌层浸润深度<1/2患者,差异有统计学意义(P<0.05).腹腔冲洗液细胞学阳性患者的PLT及PCT值高于腹腔冲洗液细胞学阴性者,差异有统计学意义(P<0.05).结论:血小板参数可能对子宫内膜癌具有预测价值.术前PLT、PDW及MPV水平在正常子宫内膜、子宫内膜增生及子宫内膜癌中呈增高趋势,且术前PDW、MPV有助于预测子宫内膜癌的进展程度.
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高强度聚焦超声治疗有生育要求子宫腺肌病患者的妊娠结局
目的:探讨有生育要求的子宫腺肌病(AM)患者接受高强度聚焦超声(HI-FU)治疗后的妊娠结局.方法:回顾分析2012年9月至2017年9月在中南大学湘雅三医院接受HIFU治疗的有生育要求的76例AM患者的临床资料.分析患者治疗后症状变化及妊娠结局,并与接受保守手术治疗的研究进行比较.结果:76例患者经HIFU治疗后,56例58次妊娠(妊娠组),中位妊娠时间为治疗后24个月,其中28例(30次)足月分娩,2例早产,20例自然流产,5例人工流产,1例异位妊娠.未妊娠组20例.患者治疗后月经及痛经症状较治疗前均有显著改善(P<0.05).19例不孕症患者经治疗后,15例成功受孕,妊娠率78.9％.有自然流产史的14例患者经治疗后,11例受孕,7例已足月分娩.与国外学者的保守手术临床研究比较,HIFU治疗后的妊娠率及足月分娩率均显著增高,差异有统计学意义(P均<0.05),可选择自然分娩,无严重并发症发生.结论:HIFU用于治疗有生育要求的AM患者,可改善患者的妊娠结局,降低自然流产率,分娩方式可选择自然分娩,同时不增加妊娠及分娩时并发症发生率,是一种有效的治疗方式.
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长链非编码RNA在子痫前期胎盘中的差异表达研究
目的:研究子痫前期(PE)胎盘长链非编码RNA(LncRNAs)的差异表达情况.方法:选取妊娠20周以后诊断为子痫前期的孕妇作为研究组(n=20),同期足月(≥37周)采用剖宫产终止妊娠的孕妇作为对照组(n=24).采用基因芯片技术分析两组胎盘的LncRNAs的差异表达情况,通过q-PCR技术对筛选的LncRNAs进行验证.结果:与正常对照组相比,PE组胎盘差异表达的LncRNAs共174条,其中107条LncRNAs表达上调,67条LncRNAs表达下调.q-PCR验证结果显示,LncRNAs(ENST00000593000和NR002161)在PE胎盘组织中的表达显著高于正常妊娠胎盘组织(P<0.05),ENST00000593000升高3.24倍,NR002161升高2.67倍,且均定位于Y染色体.女婴胎盘组织中均不表达ENST00000593000和NR002161.结论:PE组胎盘LncRNAs表达存在显著改变,Y染色体上LncRNAs的改变是男婴PE发生可能危险因素.
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Fat-1基因过表达抑制宫颈癌Hela细胞生长机制研究
目的:探讨fat-1基因对宫颈癌Hela细胞生长的影响,并研究PI3 K/Akt/mTOR通路是否参与fat-1对Hela细胞生长的调控作用.方法:构建真核表达载体(p-EG-FP-fat-1),并转染人宫颈癌Hela细胞,使其过表达fat-1基因,为fat-1组,以转染空载质粒的Hela细胞为阴性对照组,以未经任何处理的Hela细胞为空白对照组.采用气相色谱法检测fat-1基因对 ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)和 ω-6多不饱和脂肪酸(ω-6PUFA)含量的影响;采用MTT和Hoechst实验检测fat-1基因对细胞增殖和凋亡的影响;采用Tr-answell和细胞划痕实验检测fat-1基因对细胞侵袭和迁移的影响;采用Western blot检测fat-1基因对PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达情况的影响.结果:Fat-1组细胞中fat-1基因表达水平高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01).Fat-1组细胞中 ω-3PUFA含量高于空白对照组和阴性对照组,ω-6PUFA含量和 ω-6PUFA/ω-3PUFA比例均低于空白对照组和阴性对照组(P均<0.01).Fat-1组细胞的增殖、侵袭和迁移能力均低于空白对照组和阴性对照组,Fat-1组细胞凋亡水平高于空白对照组和阴性对照组(P均<0.01).Fat-1组细胞中p-PI3K、p-Akt和p-mTOR表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01).结论:Fat-1基因可通过增加细胞内 ω-3PUFA含量,靶向作用于PI3K/Akt/mTOR通路,抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡.
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自然周期冻融胚胎移植中不同孕酮转化内膜时间临床结局分析
目的:探讨自然周期冻融胚胎移植(FET)中不同孕酮转化内膜时间对临床结局的影响.方法:回顾分析2014年1月至2018年7月于河南省人民医院生殖中心行自然周期冻融胚胎移植共891个周期的临床结局.根据孕酮转化内膜时间不同将其分为2-3组(孕酮转化子宫内膜2天后移植D3胚胎,n=506)、3-3组(孕酮转化子宫内膜3天后移植D3胚胎,n=172)、4-5组(孕酮转化子宫内膜4天后移植囊胚,n=115)和5-5组(孕酮转化子宫内膜5天后移植囊胚,n=98),比较各组基础指标和临床结局相关指标.结果:2-3组和3-3组,4-5组和5-5组患者的一般情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05).2-3组、3-3组、4-5组和5-5组的种植率分别为40.54％(390/962)、43.77％(144/329)、74.19％(115/155)和62.20％(79/127),临床妊娠率分别为57.71％(292/506)、58.72％(101/172)、80.87％(93/115)和70.41％(69/98),异位妊娠率分别为4.45％(13/292)、0(0/101)、0(0/93)和2.90％(2/69),早期流产率分别为9.25％(27/292)、5.94％(6/101)、12.90％(12/93)和4.35％(3/69),持续妊娠率分别为52.37％(265/506)、55.23％(95/172)、70.43％(81/115)和67.35％(66/98).2-3组和3-3组、4-5组和5-5组的种植率、临床妊娠率、异位妊娠率、早期流产率、持续妊娠率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论:自然周期FET中孕酮转化子宫内膜2～3天移植第3天卵裂期胚胎,孕酮转化子宫内膜4～5天移植囊胚均可获得满意的临床结局,临床工作中可以根据医院工作安排及患者的情况进行灵活调整.
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控制性促排卵过程中HCG日孕酮水平对胚胎发育及全胚冷冻周期累积活产的影响研究
目的:探讨辅助生殖技术控制性促排卵过程HCG日孕酮水平对全胚冷冻患者胚胎发育及累积活产的影响.方法:回顾收集2015年1月1日至2017年12月30日于唐都医院妇产科生殖医学中心行全胚冷冻的患者的临床资料,共计6414个首次促排卵周期纳入研究.根据既往文献,将患者按HCG日孕酮水平分为3个浓度组:<0.5ng/ml、0.5～1.5ng/ml和≥1.5ng/ml.采用单因素和多因素回归分析方法探讨HCG日孕酮水平对胚胎发育和累积活产率的影响.结果:患者的总累积活产率为56.27％.HCG日孕酮<0.5ng/ml、0.5～1.5ng/ml和 ≥1.5ng/ml组的卵裂率分别为(93.57±18.40)％、(92.07±19.92)％ 和(90.45±21.76)％,可用胚胎率分别为(0.62±0.25)％、(0.56±0.20)％和(0.53±0.23)％,囊胚形成率分别为(23.83±34.15)％、(28.00±34.03)％ 和(27.16±32.86)％,累积活产率分别为61.86％、56.29％和52.30％;3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).多因素回归分析结果显示,3组的卵裂率、囊胚形成率和累积活产率无统计学差异(P>0.05).0.5～1.5ng/ml、≥1.5ng/ml组与<0.5ng/ml组比较,可用胚胎率显著下降,差异有统计学意义(0.5～1.5ng/ml组:β=-0.04,95％CI为-0.06～-0.02;≥1.5ng/ml组:β=-0.05,95％CI为-0.08～-0.02,P均<0.05).结论:促排卵过程中HCG日孕酮水平升高可降低可用胚胎率,但对全胚冷冻后续累积活产率并未发现明显影响.对于促排卵过程中HCG日孕酮提前升高的患者,全胚冷冻仍是第一选择的移植策略.
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IVF过程中延长HCG暴露时间对PCOS患者临床结局的影响
目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者IVF/ICSI-ET过程中延长HCG暴露对IVF临床结局的影响.方法:回顾分析2015年10月 ～2017年10月于我院生殖医学中心行体外受精/胞浆内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)的PCOS患者199例,共199个周期,根据HCG暴露时间分为两组:35～36h组(对照组,78例)和37～38h组(实验组,121例).比较两组患者的基本情况、获卵、受精、胚胎情况及临床妊娠等.结果:两组患者的一般情况、IVF过程中的Gn天数、Gn量、激素水平、移植日内膜厚度均无统计学差异(P>0.05).两组的卵泡穿刺数无统计学差异,实验组的获卵数、MII卵数、2PN受精数及临床妊娠率均高于对照组,且有统计学差异(P<0.05).实验组的活产率高于对照组,但无统计学差异(P>0.05).结论:适当延长PCOS患者的HCG暴露时间,可促使卵母细胞复合物与卵泡壁充分分离,增加获卵数,促进卵子终成熟、核质同步化,改善卵子及胚胎质量,进一步提高临床妊娠率.
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拮抗剂方案添加GnRH-α黄体支持治疗后妊娠结局研究
目的:探讨拮抗剂方案添加促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-α)行黄体支持对临床结局的影响.方法:回顾分析兰州大学第一医院生殖医学专科医院2017年1月至2017年12月252个拮抗剂方案新鲜周期移植后获临床妊娠的患者的临床资料.根据黄体支持方法不同,将患者分为黄体酮+地屈孕酮组128例,添加GnRH-α 组124例(常规黄体酮+地屈孕酮支持的基础上于取卵后第6天加用1次曲普瑞林0.1mg).比较两组的妊娠率、临床妊娠率、持续妊娠率、早期流产率、异位妊娠率、多胎妊娠率、胚胎种植率、卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生率及活产率.结果:两组患者的平均年龄、不孕年限、基础内分泌情况、移植日子宫内膜厚度、移植胚胎数及移植胚胎级别均无统计学差异(P>0.05).添加GnRH-α 组的妊娠率、临床妊娠率及胚胎种植率均高于黄体酮+地屈孕酮组(P<0.05);两组的早期流产率、持续妊娠率、异位妊娠率、多胎妊娠率、OHSS发生率及活产率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).两组妊娠患者的血HCG、E2、PGN比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:GnRH拮抗剂方案中,添加GnRH-α 黄体支持方案可提高临床妊娠率及胚胎种植率,黄体期添加GnRH-α 可作为黄体支持的新选择.
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TFF3激活PI3K/Akt通路参与宫颈腺癌的发病机制
目的:探讨TFF3通过激活PI3K/Akt信号通路调控宫颈腺癌发生发展的机制.方法:TFF3细胞因子和PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002)或两者共同处理Hela细胞,CCK-8法检测Hela细胞增殖能力,Transwell小室观察细胞迁移能力,流式细胞学方法检测细胞凋亡,Western blot检测PI3K/Akt信号通路关键蛋白Akt及其激活状态蛋白p-Akt的表达.结果:与对照组相比,TFF3处理后Hela细胞的增殖和迁移能力明显提高,细胞凋亡减弱,差异有统计学意义(P<0.05);LY294002处理后Hela细胞的增殖及迁移能力明显降低,细胞凋亡增多,差异有统计学意义(P<0.05);TFF3+LY294002处理后He-la细胞的增殖、迁移能力及细胞凋亡与TFF3和LY294002处理组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).Western blot结果表明,TFF3能激活p-Akt基因表达.结论:TFF3能通过提高p-Akt蛋白表达激活PI3K/Akt信号通路,从而参与调节宫颈腺癌细胞的恶性行为.
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子痫前期患者血清可通过sFlt-1-CAV1途径增加肾小球内皮细胞通透性
目的:探讨子痫前期(PE)血清中可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)对肾小球内皮细胞(HRGECs)通透性的影响机制.方法:收集20例PE与正常孕妇外周血清,ELISA法检测孕妇外周血中sFlt-1含量.利用PE血清及重组sFlt-1(rsFlt-1)蛋白处理HRGECs,细胞接种于transwell小室,体外细胞培养分组:正常孕妇血清处理组(NG组),PE血清处理组(PE组),正常孕妇血清+rsFlt-1处理组,PE+sFlt-1抑制剂处理组,PE血清+CAV1抑制剂处理组.Evens-blue检测HRGECs对大分子蛋白通透性改变;Western blot法检测caveolin-1(CAV1)蛋白表达.结果:PE血清sFlt-1含量明显高于正常对照组;PE血清、rsFlt-1可使HRGECs对大分子蛋白通透性及CAV1蛋白表达增加.sFlt-1抑制剂、CAV1抑制剂可抑制PE血清、rsFlt-1导致的HRGECs对大分子蛋白通透性增加.结论:PE患者血清可通过sFlt-1-CAV1信号通路增加肾小球内皮细胞对大分子蛋白的通透性,CAV1表达异常可能参与蛋白尿的产生.
