大肠杆菌中融合表达人β防御素-3基因的研究

目的 为了在大肠杆菌中融合表达人β防御素-3基因.方法 根据大肠杆菌对精氨酸密码子使用的偏爱性,设计搭桥引物,并通过PCR扩增法合成了人β防御素的全基因序列,克隆进pGEX-4T-2中构建pGEX-4T-2-hBD-3融合表达载体.将表达载体转化E.coli宿主菌DH5α,进行IPTG诱导表达.将菌体反复冻溶使细胞膜穿孔,释放可溶性蛋白. 融合蛋白GST-hBD-3经凝血酶切割.结果 研究得到了重组人防御素蛋白,琼脂孔穴扩散抑菌法检测表明,重组人β防御素3对金黄色葡萄球菌有抗菌活性,抑菌效价为0 .843 U. 结论人β防御素-3基因在大肠杆菌中得到了融合表达.

精原干细胞移植受体鼠模型的建立

目的 通过对4周龄昆明白小鼠腹腔内单次注射白消安来制作精原干细胞移植受体鼠模型.方法 将实验动物分为4组,A、B、C组注射白消安的剂量分别是3 0 mg/kg、40 mg/kg、50 mg/kg体重,D组为对照组.注射后每天记录小鼠的存活情况,注射白消安后的20 d、30 d、40 d称量睾丸重量、测定血常规、制作并观察睾丸组织学切片、统计曲细精管的中空率.结果 A、B、C、D组的死亡率分别是25.00%、31. 58%、80.00%、0.00%,注射白消安后30 d各组小鼠曲细精管中空率分别是45.25%、75.2 5%、1.50%、0.00%,白细胞、红细胞、血小板数量等血常规指标均恢复正常.结论 腹腔内单次注射30 mg/kg或40 mg/kg剂量的白消安,死亡率较低(25 .00%、31.58%),30 d后曲细精管中空率较高(45.25%、75.25%)、血常规指标恢复正常 ,适合做精原干细胞移植受体.

胚胎发育期和冷冻保护剂剂量对Nakagata小鼠胚胎冷冻效果的影响

目的 利用不同剂量的冷冻保护剂,对ICR和Km小鼠不同发育期的胚胎进行冷冻和解冻实验.探讨N akagata小鼠胚胎玻璃化冷冻管方法,使用不同剂量的冷冻保护剂等因素对冷冻效果的影响 . 方法 2细胞期胚胎在KSOM微滴培养液内分别培养到2细胞、4细胞和8细胞期胚胎,分别加入50 μL,100 μL,200 μL的DAP213冷冻保护剂,利用Nakagata方法冷冻,解冻以及观测解冻后培养至囊胚期胚胎的冷冻效果.结果 冷冻保护剂DAP213剂量和ICR,KM小鼠胚胎不同细胞发育期对冷冻效果具有显著的交互影响(P＜ 0.01).相对而言,冷冻保护剂剂量对结果的影响(P＞0.05)低于胚胎细胞发育期对冷冻效果的影响(P＜0.01).结论 冷冻保护剂的剂量和胚胎细胞发育期均会影响冷冻实验的结果.胚胎的细胞发育期对冷冻效果的影响更大.对2细胞期,4 细胞期和8细胞期的胚胎进行冷冻.8细胞期胚胎的冷冻效果好,4细胞期胚胎冷冻效果差.利用Nakagata冷冻管方法建立小鼠胚胎冷冻库,100 μL冷冻保护剂效果较好.不同小鼠的品系也可影响冷冻结果.

MAN2C1基因在病毒感染中的作用

目的 通过观察MAN2C1转基因小鼠对H5N1高致病性禽流感病毒的易感性,以了解此转基因小鼠的免疫应答情况和MAN2C1 基因在病毒感染中的作用.方法 以 H5N1高致病性禽流感病毒滴鼻感染MAN2C1转基因小鼠, HE染色观察小鼠肺组织病理变化;RT-PCR和免疫组织化学方法检测小鼠肺组织H5N1病毒载量;间接ELISA方法检测小鼠血清抗体滴度变化. 结果与对照组小鼠比较,MAN2C1转基因小鼠表现为更为严重的间质性肺炎,肺组织病毒载量增加,外周血中性粒细胞数目降低,淋巴细胞数量增加,血清IgG抗体滴度降低.结论 MAN2C1基因抑制了小鼠的体液免疫.

鹭科和鸬鹚科卵黄抗体的纯化

目的 纯化鹭科具有代表性的夜鹭及鸬鹚科具有代表性的鸬鹚的卵黄抗体IgY.方法 采用了水稀释法和硫酸铵分级沉淀法粗提IgY,再过HiTrap IgY Purification HP柱子进一步纯化.结果 经两步纯化,得到了纯化的鸬鹚和夜鹭的卵黄抗体IgY ,经SDS-PAGE检测为电泳纯,夜鹭和鸬鹚的卵黄抗体的相对分子质量约为180×103.结论 证实了鸬鹚和夜鹭的卵黄抗体IgY的存在及其特性, 为这两种鸟类的卵黄抗体IgY纯化,二级抗体制备提供了参考.

虎血清免疫球蛋白(IgG)的纯化及纯度、活性鉴定

目的 建立高纯度、高活性的虎血清IgG纯化方法.方法 用饱和硫酸铵沉淀虎血清得到IgG粗品;结合Hitrap Protein A亲和层析预装柱及阴离子交换层析法对粗品IgG进一步分离纯化,采用PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法鉴定IgG纯度和免疫活性.结果 80 mL虎血清亲和纯化得到84 mg IgG,阴离子交换层析纯化得到30 mg虎的IgG纯品.结论 建立了简便快速、纯度高、活性好的虎血清IgG的分离纯化方法,为虎血清IgG二级抗体的制备提供了高纯度、活性好的一级抗体免疫原.

改良的硫酸铵沉淀法纯化大雁的卵黄抗体

目的 探索有效的纯化大雁卵黄抗体及高效价二抗的方法.方法 应用了PEG沉淀 ,阴离子交换柱,硫酸铵分级沉淀纯化,免疫制备二抗,免疫电泳和免疫双扩散法及western blotting 进行效价的测定.结果 改良后的硫酸铵沉淀法的纯度远远高于PEG沉淀,相对于离子交换法而言更加简单方便,经济省时.从免疫电泳看已达到了电泳纯,大雁卵黄IgY的相对分子质量为180×103,重链约为66×103,轻链约为24×103.免疫获得的二抗有较强的免疫活性.结论 用改良的硫酸铵沉淀法纯化大雁卵黄抗体,效率和纯度显著提高,值得推广.本实验为大雁卵黄抗体及其二抗的应用奠定了基础,也为雁形目其他种类卵黄抗体的纯化提供了参考.

黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG的纯化及抗血清的制备

目的 纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,制备兔抗金仓鼠和黑线毛足鼠血清IgG的抗血清.方法 用Hitrap Protein G亲和层析纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,经SDS-PAGE电泳鉴定纯度,标准免疫方法免疫兔子制备抗血清.结果 黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG对protein G 有很高的亲合性,用Hitrap Protein G亲和层析纯化, 得到高纯度黑线毛足鼠和金仓鼠IgG,利用纯化的IgG作抗原制备了高效价的抗血清, 免疫双扩散测定效价达1∶32和1∶16.结论 证实黑线毛足鼠和金仓鼠IgG 和Protein G 具有很高的亲和性, Protein G亲和层析是纯化黑线毛足鼠和金仓鼠IgG有效的方法之一,制备了黑线毛足鼠和金仓鼠IgG的抗血清.

三种鸡形目雉科禽类卵黄抗体的纯化及二抗的制备

目的 纯化三种鸡形目雉科的禽类孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY,并且免疫家兔制备抗血清.方法 采用了水稀释法,HiTrap IgY Purification HP 免疫亲和层析法和硫酸铵沉淀法纯化IgY.免疫家兔制备抗血清,免疫双扩散法测定效价.P rotein-A亲和纯化兔抗IgY血清IgG.结果 经亲和纯化和盐析纯化, 得到了孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY,经SDS-PAGE检测为电泳纯, 孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY的相对分子质量约为180×103.免疫后经Protein-A亲和纯化后获得了兔抗IgY的Ig G.结论 证实了孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY的存在及其特性.雉科鸡形目禽类卵黄抗体的纯化方法相似,可以推广到鸡形目其它禽类的卵黄抗体的纯化中, 获得的抗血清可以进一步进行标记和今后抗原的检测.

脑组织特异表达胆囊收缩素转基因小鼠的建立

目的 建立在脑内特异表达胆囊收缩素(CCK)转基因小鼠,研究CCK表达在中枢对饮食行为和代谢的影响.方法 构建PDGF-CCK表达载体,利用显微注射法将目的 片断注射到受精卵的雄原核中,建立CCK转基因小鼠.通过PCR的方法鉴定转基因鼠的基因型.采用Western Blotting方法鉴定CCK在脑内的表达.用试剂盒测定小鼠血脂并进行统计学分析.结果 得到了3个CCK转基因品系,其中2个转基因品系脑内CCK表达量比野生鼠明显增加.高表达 CCK的转基因小鼠在正常饲养的情况下体重低于阴性鼠,但血脂未发现显著差异.结论 脑内高表达CCK可在一定程度上导致小鼠体重减轻.

长爪沙鼠IgG的纯化及抗血清的制备

目的 纯化长爪沙鼠血清IgG,制备兔抗长爪沙鼠IgG抗血清.方法 采用Hitrap Protein G亲和层析预装柱来纯化长爪沙鼠血清IgG;通过SDS-PAGE电泳和Western-Blotti ng免疫印迹法对长爪沙鼠血清IgG进行纯度鉴定,免疫兔子制备抗血清.结果 7 mL长爪沙鼠血清纯化得到11 mg IgG;电泳和免疫印迹测定,IgG纯度大于95%;用纯化的IgG作抗原制备了兔抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32.结论 建立了长爪沙鼠血清IgG的纯化方法,制备了长爪沙鼠IgG抗血清,证实长爪沙鼠血清IgG和Protein G 具有较高的亲和性.

貉血清IgG纯化及抗血清的制备

目的 制备高纯度貉血清IgG 和兔抗貉IgG抗血清,作为建立多种动物抗体检测技术的储备.方法 采用Hitrap Protein A亲和层析及盐析再沉淀法纯化貉血清IgG,通过PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法对IgG作纯度及免疫活性检测;常规免疫法制备兔抗貉IgG血清.结果 貉血清IgG与Protein G虽有较强的结合力,但同时也结合血清中其他杂蛋白;用二步纯化法可从5 mL貉血清中纯化IgG约7 mg,电泳和免疫印迹测定显示,IgG纯度大于95%,常规免疫法制备抗血清免疫双扩散效价达1∶32.结论 建立了可行的貉血清IgG的纯化方法和高效价的兔抗貉血清IgG抗血清,为貉血清 IgG二级抗体酶联物的制备储备了资源.

乌鳢血清免疫球蛋白IgM的分离纯化及其兔抗血清的制备

目的 分离纯化乌鳢血清免疫球蛋白,并制备其兔抗血清.方法 用Protein A亲和层析的方法纯化乌鳢血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度, 测定其重链、轻链的分子量,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价 .结果 纯化了乌鳢血清免疫球蛋白,SDS-PAGE测定其重链和轻链的相对分子质量分别为78×103和27×103左右,免疫双扩散法测定兔抗乌鳢免疫球蛋白抗血清效价为1∶32. 结论成功纯化了乌鳢免疫球蛋白,制备了兔抗乌鳢IgM抗血清,为研究乌鳢的免疫机制、建立乌鳢的血清学检测系统奠定了基础.

超声成像技术分析糜酶转基因小鼠心脏功能

目的 应用小动物高频超声技术对糜酶转基因小鼠的心功能进行分析,以探索糜酶基因对心脏结构和功能的影响.方法 通过VisualSonics(R) Vevo770(R)高分辨率小动物超声系统检测不同年龄的转基因小鼠及对照小鼠包括心壁厚度、主动脉血流速度、左心室内径、左心室容积、每搏输出量、射血分数、短轴缩短率和心输出量等的心脏功能指标的改变进行比较分析.结果 随着小鼠年龄的增大,转基因阳性小鼠心壁厚度和主动脉血流速度逐渐增加,至6月龄时,转基因小鼠的左心室前壁收缩期厚度增加37%,增长率是对照小鼠的1.2 倍(P＜0.05);主动脉血流速度比对照小鼠高29%(P＜0.05);转基因阳性小鼠的左心室内径、左心室容积、每搏输出量、射血分数、短轴缩短率和心输出量等的心脏功能指标表现出和以上变化相一致的表型.结论 转基因小鼠糜酶表达水平升高,引起心脏AngⅡ形成增多,可使心肌细胞的收缩力提高;心肌细胞肥大,心壁增厚;且有随年龄增加的趋势, 可研究建立慢性、老年性肥厚型心脏病模型.

黄鳝IgM的分离纯化及兔抗黄鳝IgM抗血清的制备

目的 分离纯化黄鳝血清免疫球蛋白,制备其兔抗血清,并检测抗血清的特异性.方法 用Protein A亲和层析的方法纯化黄鳝血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价,通过 western blotting 检测抗血清的特异性.结果 纯化了黄鳝血清免疫球蛋白,免疫双扩散法测定兔抗黄鳝免疫球蛋白血清效价为1∶32,western blotting 结果显示抗血清具有很好的特异性.结论 成功纯化了黄鳝免疫球蛋白,制备了兔抗黄鳝IgM抗血清 ,为建立黄鳝的血清学检测系统奠定了基础.

《中国比较医学杂志》读者调查表

人干细胞实验动物嵌合体模型的研究进展

动物模型是疾病研究、发病机制、药物治疗的必要工具,目前一些困扰人类健康的重大疾病如艾滋病、乙型肝炎等因为还没有能反映人类疾病发病机理的理想动物模型.人干细胞是能在体外长期培养的、高度未分化的全能细胞系,亚全能细胞系和分化的干细胞等.如果能将人的干细胞成功移植入实验动物体内形成人源化嵌合体动物, 有希望为艾滋病、肝炎等的研究制备适当的模型.人类干细胞在动物中的移植研究中主要的实验动物是绵羊,小鼠等,本文介绍了人干细胞在动物体内移植的研究进展.

荧光蛋白在肿瘤分子影像研究中的应用

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)是在水母中发现的新型报告分子,该蛋白及其衍生物能在多种生物体内表达并发出荧光,是目前在生物学中研究和开发应用得广泛的蛋白质之一.尤其是在肿瘤的研究中,荧光蛋白的分子影像可为深入揭示肿瘤发生发展的病理过程的机制,以及对其治疗进行实时、动态、细致、无创、靶向性的探测和跟踪提供有效手段.

卵黄抗体的分离提取和纯化方法

卵黄抗体性能稳定,具有较强抵抗热酸、碱的能力,室温下可保持6个月的活性,4 ℃下放置几年活性不减,易于大规模生产等许多优点,卵黄免疫球蛋白的纯化方法和哺乳动物的纯化方法不同,包括有机物沉淀法,有机溶剂抽提法,天然胶法和水稀释法等粗提方法 ;凝胶过滤层析,离子交换层析和亲和层析等精细纯化方法.本文就卵黄抗体的分离和纯化方法的优缺点作一比较.

生长抑素在抑郁症发病中的作用

随着神经生物学领域中神经肽研究的兴起,肽类神经递质-生长抑素成为抑郁症发病机制研究的新热点.本文拟对生长抑素的结构及分布、生长抑素受体类型及分布、生长抑素的作用、生长抑素在抑郁症中含量的变化及其作用机制、中医药对抑郁症动物模型生长抑素的调节作用进行综述.

爬行动物的体液免疫

爬行动物针对颗粒性和可溶性抗原,能够快速、有效的产生抗体.爬行动物血清中的抗体主要包括高分子量的免疫球蛋白(HMW Ig)和不止一种的低分子量免疫球蛋白(LMW Ig),爬行动物中还有在亲代和子代间传递的免疫球蛋白Ig Y.目前爬行动物免疫球蛋白的纯化方法主要有:硫酸铵沉淀法、联合凝胶过滤层析和离子交换层析法、Protein A亲和层析法.研究爬行动物体液免疫对研究动物免疫的进化及对病原控制具有重要意义.

两种果子狸血清IgG纯化方法的比较

目的 探讨一种具有简便快捷、高纯度、活性好的果子狸血清IgG纯化方法.方法 比较Hitrap Protein A 亲和层析和PAGE电泳两种纯化法对果子狸血清IgG的纯化,用PAGE 还原电泳和Western-Blot法对IgG作纯度鉴定.结果 对Hitrap Protein A纯化的果子狸血清IgG, 其活性虽好,但纯度不高;而非还原PAGE电泳所纯化的果子狸血清 IgG不但纯度高(＞95%)、并具有较强的免疫活性.结论 非还原PAGE电泳法纯化果子狸血清IgG,是一种具有高纯度、免疫活性强的纯化方法.

建立和人类密切接触的动物血清学检测体系具有重要的社会意义

近年来新发传染病体已经成为人类健康的主要威胁之一,其中给社会造成巨大损失和对人类健康威胁大的新发传染病有SARS,艾滋病,禽流感等(图1).