中国免疫学杂志
Chinese Journal of Immunology 중국면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中国免疫学会,吉林省医学期刊社
- 影响因子： 0.92
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-484X
- 国内刊号： 22-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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TSLP和NF-κB在子宫腺肌病患者子宫内膜细胞中的表达及意义
目的：探讨TSLP和NF-κB在子宫腺肌病发病机制中的作用。方法：采用免疫组织化学SABC法检测35例子宫腺肌病患者异位、在位内膜及20例子宫肌瘤患者子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞中TSLP和NF-κB p65的表达，并对两者表达量进行相关性分析；采用ELISA双抗体夹心法检测子宫腺肌病患者血清TSLP的水平，子宫肌瘤患者和健康体检者各20例作为对照。结果：子宫腺肌病患者异位、在位子宫内膜腺上皮和间质细胞中TSLP和NF-κB p65均阳性表达，且表达量明显高于对照组（子宫肌瘤组）（ P＜0.01），异位内膜腺上皮和间质细胞中TSLP和NF-κB p65表达量高于在位内膜（ P＜0.01），异位内膜腺上皮和间质细胞中TSLP和NF-κB p65的表达呈正相关，子宫腺肌病患者血清中TSLP的水平高于子宫肌瘤患者（ P＜0.05）和健康体检者（ P＜0.05）。结论：子宫腺肌病患者异位和在位子宫内膜腺上皮和间质细胞TSLP高表达，血清中水平升高，异位内膜TSLP的表达与NF-κB相关。
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《中国免疫学杂志》关于彩图处理的有关说明
《中国免疫学杂志》的来稿均一经采用，来稿所附图片根据具体需要，酌情制作彩图，彩图制作费包含在该稿件的版面费中，一并开具发票，望周知！
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阿拉瑞林免疫影响FSHR表达及FSHR生物信息学分析
目的：探讨阿拉瑞林主动免疫绵羊对垂体和卵巢FSHR表达的作用，分析绵羊FSHR的生物信息学特点。方法：42只5～6月龄母绵羊随机分为6组（n＝7），EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别于0 d和14 d皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg和400μg；EG-Ⅳ和EG-Ⅴ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg，0、7、14、21 d各一次，共4次；对照组在0 d和14 d皮下注射抗原溶媒2.0ml。于70 d（实验结束时）屠宰动物，无菌采集垂体和卵巢。从绵羊垂体中提取FSH，进行PCR扩增、克隆和测序，荧光定量PCR分析，将得到的序列运用生物信息学软件行分析，用Western blot检测卵巢FSHR蛋白表达。结果：实验组垂体FSHR mRNA的2-ΔΔCt均低于对照组， EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ的2-ΔΔCt值逐渐下降；而且EG-Ⅳ低于EG-Ⅰ，EG-Ⅴ低于EG-Ⅱ，即注射阿拉瑞林4次后FSHR mRNA的2-ΔΔCt值分别低于注射2次后的值。各实验组卵巢FSHR蛋白表达量随阿拉瑞林注射剂量的增加而逐渐增加，EG-IV和EG-V卵巢FSHR蛋白显著高于对照组相比（P＜0.01）。 FSHR序列为1091 bp，开放阅读框（0RF）780 bp，位于41～820位点，其半衰期、理论等电点、不稳定指数、疏水性平均值和脂肪指数分别为1.2 h、5.05、47.75、0.836和30.61。结论：阿拉瑞林免疫可抑制垂体FSHR mRNA的表达，但是增加卵巢FSHR蛋白表达；FSHR蛋白为不稳定的疏水性蛋白。
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外源性 HMGB1对SLE外周血单个核细胞自噬影响的研究
目的：探讨重组人高迁移率族蛋白B1（High mobility group box1，HMGB1）刺激伴肾脏损害和不伴肾脏损害的系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞后自噬相关蛋白---微管相关蛋白1轻链3（LC3）的两个亚型LC3Ⅱ／Ⅰ的表达情况，以及重组人HMGB1刺激对SLE患者外周血单个核细胞增殖的影响。方法：Western blot比较1μg／ml 重组人HMGB1蛋白刺激伴肾脏损害与不伴肾脏损害的系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞0、6、24、48 h后自噬相关蛋白LC3Ⅱ／Ⅰ的表达情况。 CCK-8法检测1μg／ml HMGB1刺激72 h对SLE患者外周血单个核细胞增殖的影响。应用SPSS17.0进行数据分析。结果：Western blot结果显示：HMGB1时间依赖性地引起SLE患者外周血单个核细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ／Ⅰ表达上调（ P＜0.05）。伴肾脏损害组与不伴肾脏损害组相比，自噬水平的增加更为明显。1μg／ml HMGB1明显抑制SLE患者PBMC的增殖（ P＜0.001）。结论：HMGB1可以使SLE尤其是伴肾脏损害患者外周血单个核细胞发生细胞自噬，参与SLE甚至狼疮肾炎的发病。提示针对HMGB1的单克隆抗体或细胞自噬调节剂可能成为SLE新的治疗靶点。
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三种血清指标在类风湿关节炎中的诊断意义
目的：评价血清抗瓜氨酸抗体（抗CCP-Ab）、抗角质蛋白抗体（ AKA）及类风湿因子（ RF）这3种指标在RA中的诊断意义。方法：通过对256例RA患者、92例其他自身免疫病患者、50例健康人进行抗CCP-Ab、AKA、RF检测，并对结果进行分析。结果：单指标检测，诊断RA的敏感性由高到低依次为RF、抗CCP-Ab、AKA，特异性由高到低依次为 AKA、抗CCP-Ab、RF，联合检测以抗CCP-Ab和AKA联合检测的诊断效率大。结论：RF、AKA、抗CCP-Ab三种指标在RA诊断方面各有优缺点，AKA、抗CCP-Ab对RF血清阴性的RA的诊断是一个有力补充，按照自己的实验条件选择适当的项目组合，对RA的早期诊断和尽早正规治疗，改善预后有较高的价值。
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外周血单个核细胞介导的HBV宫内垂直传播
目的：探讨HBV感染外周血单个核细胞在介导乙肝病毒母婴传播中的作用。方法：以Ficoll-Hypaque常规分离、纯化孕妇外周血单个核细胞（ PBMCs ）和新生儿脐血单个核细胞（ CBMCs ）， PCR法检测孕妇外周血和新生儿脐血HBV-DNA。结果：HBeAg（＋）孕妇血清和PBMCs内HBV-DNA检出率分别为100.00％（25／25）和72.00％（18／25），其新生儿脐血血清和CBMCs内HBV-DNA检出率分别为60.00％（15／25）和44.00％（11／25），与 HBeAg （-）组相比差异有显著性（ P＜0.05）。 PBMCs内HBV高复制组其新生儿脐血及CBMCs 内HBV-DNA阳检率均较高，与其他组相比，差异有显著性（ P＜0.05）。结论：HBV不仅可通过血清介导HBV宫内垂直传播，还可侵染外周血单个核细胞，并通过外周血单个核细胞→脐血单个核细胞途径介导HBV宫内垂直传播。
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造血微环境免疫状态对IRHS骨髓单个核细胞端粒酶活性的影响及临床意义
目的：观察免疫相关性血细胞减少综合征（ Immune related hematocytopenia syndrome ，IRHS）患者骨髓造血微环境免疫分子表达状态，对骨髓单个核细胞（ BMMNC）端粒酶活性（ TA）的影响，探讨对造血细胞破坏的免疫损伤机制及临床意义。方法：①端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法（ TRAP-PCR-ELISA）检测366例IRHS患者治疗前后BMMNC的TA。②免疫化学染色和免疫荧光染色，观察患者骨髓细胞和造血微环境中HLA-DR、抗人IgG、FcγⅡ受体（ FcγⅡR）、甘露糖受体（ MR）、白细胞介素17A（IL-17A）及受体表达。③FACS技术检测患者外周血淋巴细胞CD3＋CD4＋T细胞、CD3＋CD8＋T细胞、CD3-CD16＋／CD56＋NK细胞和CD19＋B细胞比例。60例健康查体者外周血淋巴细胞亚群作为正常对照，30例缺铁性贫血患者骨髓作为疾病对照。结果：①IRHS患者治疗前端粒酶活性为0.2617±0.0216，高于疾病对照组（0.0616±0.0313， P＜0.01）；其中HLA-B27＋组高于HLA-B27-组（0.3013±0.0206比0.1923±0.0129，P＜0.05），HLA-B27＋IgG升高的重度IRP患者显著高于HLA-B27-IgG升高组（0.4016±0.0172比0.2211±0.0110，P＜0.01）。②HLA-B27＋IgG＋组骨髓免疫细胞和造血微环境呈现细胞免疫活化和体液免疫均紊乱状态，高表达HLA-DR、FcγⅡR、IL-17A、IL-17RA和MR等免疫分子，外周血CD3＋CD4＋T细胞、CD3＋CD8＋T细胞和CD3-CD16＋／CD56＋NK和CD19＋B细胞比例呈不同程度升高，造血破坏呈现多样性。③而HLA-B27-IgG＋组骨髓免疫细胞和造血微环境呈现体液免疫活化优势状态，高表达FcγⅡR，IL-17A等炎性因子不表达或弱表达，外周血仅CD19＋B细胞比例升高，骨髓造血破坏方式主要为抗体依赖性细胞毒性（ ADCC）效应。经糖皮质激素联合环孢素A等药物治疗后，患者血象恢复时BMMC的端粒酶重新失活，TA为0。结论：IRHS骨髓单个核细胞端粒酶活化，与患者骨髓造血微环境免疫状态和病变血细胞病理性损害程度密切相关。病毒感染和细胞免疫活化，多种炎性因子参与IRHS造血免疫损伤，是TA增强的重要因素。
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瘦素对肥胖哮喘儿童Th1／Th2细胞平衡影响的研究
目的：探讨肥胖哮喘儿童血清瘦素水平对Th1／Th2细胞平衡的影响，及其与临床表现的相关性。方法：选择56例中、重度哮喘儿童，根据体重指数（ BMI）将哮喘儿童分为肥胖组和非肥胖组，每组各28例，另外选择28例肥胖健康对照组以及28例正常体重健康对照组儿童；采用酶联免疫吸附测定方法检测外周血瘦素、IFN-γ和IL-4的水平，采用哮喘症状评分法评估哮喘严重程度，分析其与瘦素、IFN-γ、IL-4水平的相关性。结果：哮喘组患儿的急性期血清瘦素、IFN-γ水平均高于临床缓解期、单纯肥胖组与正常体重对照组（ P＜0畅01）；哮喘组临床缓解期与单纯肥胖组及对照组比较，血清瘦素、IFN-γ水平差异均有统计学意义（ P＜0畅05）。肥胖哮喘组的血清IL-4水平低于非肥胖哮喘组（ P＜0畅01）；肥胖哮喘组儿童症状评分高于非肥胖哮喘组（ P＜0畅01）；肥胖哮喘组儿童第1秒时间肺活量占预计值的百分率（ FEV1％）低于非肥胖哮喘组（ P＜0畅01）。肥胖哮喘组瘦素水平与IFN-γ水平正相关（ P＜0畅01），与IL-4水平负相关性（ P＜0畅01）。结论：瘦素与肥胖以及非肥胖儿童的哮喘急性发作均有关；肥胖哮喘儿童体内瘦素水平升高更明显，Th1／Th2细胞平衡向Th1偏移，IFN-γ分泌增加，临床症状更严重。
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肿瘤干细胞标记物在胶质瘤临床应用中的研究
由于患者对治疗的反应不同，且有不同预后，因此寻找胶质瘤中新的预后评估标志物是目前一研究热点［1］。近的研究提示肿瘤生物学抗治疗性与肿瘤干细胞（Cancer stem cells，CSCs）的存在密切相关［2，3］。因此，研究与胶质瘤干细胞存在密切相关的肿瘤标记物标志物，对评估胶质瘤患者预后具有重要意义。 CSC假说提示存在一种肿瘤细胞种群，即肿瘤干细胞，其拥有独特的自我更新能力，能够使肿瘤持续生长。此外，若干研究显示， CSCs除了强大的耐药机制，还具有肿瘤发生潜能［4-6］。现有研究证实了CSCs存在于包括胶质母细胞瘤在内的不同癌症类型［4，7］。本文将介绍目前研究报告中公认的胶质瘤CSC 标志物及其预后价值。我们将总结每个标志物并讨论他们的预后价值。
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生长激素调控免疫细胞功能的研究进展
生长激素（ Growth hormone ，GH）是下丘脑垂体前叶嗜酸细胞分泌的蛋白质激素，其主要生理功能是促进除神经组织以外的所有其他组织的生长；促进机体的合成代谢以及蛋白质的合成；促进脂肪的分解；对胰岛素有拮抗作用；抑制葡萄糖的利用等作用。 GH能刺激骨关节软骨和骨骺软骨生长，因而能使身高增加。早在1930年， Smith ［1］发现切除大鼠的垂体后，胸腺开始萎缩，首次提出了内分泌系统对免疫系统的影响。1977年Besedovsky ［2］提出神经内分泌免疫网络理论之后， GH和免疫系统之间的关系引起了众多学者的关注。现已证实免疫细胞表面存在GH受体，并且免疫细胞也可分泌GH。本文就近年来GH对免疫细胞功能调节作用的研究进展做一综述。
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复发性外阴阴道假丝酵母菌病与阴道免疫
外阴阴道假丝酵母菌（ Vulvovaginal candidiasis，VVC）是由假丝酵母菌引起的外阴阴道炎症，是女性生殖道炎症中常见的疾病之一。复发性外阴阴道假丝酵母菌病（ Recurrent vulvovaginal candidiasis ，RVVC）是指一年内有症状的VVC 发作4次或4次以上者。5个欧洲国家6000人的调查结果显示VVC的发生率为29％～49％，25岁前的妇女有过1次 VVC 者占10％，50岁前曾患过一次VVC的女性为25％，1年发作4次或以上者占9％［1］。 RVVC患者的生存质量下降，在总躯体健康和总精神健康两个方面均下降，具体表现在生理功能、生理职能、总体健康主观感觉、生命活力、情感职能、精神健康主观感觉方面［2］。 VVC为什么会反复发作？哪些因素会诱导其反复发作？其反复发作的机制又是什么？这类患者如何治疗和管理？这些都是困扰临床、引人深思的问题。而其反复发作机制又是焦点问题，RVVC患者机体免疫状态，尤其是阴道黏膜局部免疫状态是引人关注的领域之一。
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Toll样配体的免疫作用及在免疫佐剂中的应用
有效的新型疫苗的研究，不仅依赖于新的疫苗种类和设计策略，还要求疫苗制品中不可缺少的组分--佐剂的发展和创新［1，2］。从初的传统佐剂铝盐佐剂到弗氏佐剂再到目前多种类型的佐剂，佐剂类型正在不断发展。佐剂能通过一系列机制加强抗原提呈能力和疫苗的免疫效果［3］，所以成功的疫苗必须要联合佐剂的使用。
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非神经乙酰胆碱系统及烟碱型乙酰胆碱受体在免疫活性细胞的表达和作用
长期以来，认为是副交感的末端释放乙酰胆碱作用于免疫细胞的乙酰胆碱受体（ Acetylcholine receptor AChRs）。但乙酰胆碱迅速被血液中乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶水解为胆碱和乙酸盐，没有证据表明免疫细胞直接受到的神经支配，胆碱能神经末端不可能释放足够的乙酰胆碱作用到免疫细胞表达的AChRs。尽管很早就在公牛的血液中发现乙酰胆碱（ Acetylcholine ACh ），由于缺乏敏感和有效的检测手段，加之ACh的不稳定性，不能确切证明不同种属的动物血液中存在 ACh。 Kawashima ［1］等使用敏感和特异的放射免疫技术，明确证实ACh存在于一系列哺乳动物，包括人的血液细胞中，且定位于单核淋巴细胞。放射同位素标记研究，在淋巴细胞、胸腺细胞等免疫活性细胞上，存在着烟碱型乙酰胆碱受体（ nicotinic acetylcholine receptors nAChRs）［2］。越来越多的证据表明，血液中免疫细胞释放ACh ，并且表达不同亚型nAChRs。兴奋烟碱受体可以导致免疫活性细胞功能和生化改变。免疫细胞存在非神经乙酰胆碱能系统，并且调节免疫功能。本文综述免疫细胞表达 ACh，乙酰胆碱酯酶（ Acetylcholinesterase AChE ），不同亚型的烟碱型乙酰胆碱受体，以及如何它们在免疫调节方面发挥作用。
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Toll样受体2在器官移植排斥免疫中的作用
随着现代医学的不断发展，在过去的50多年中，器官移植作为脏器功能衰竭终末期的一种治疗方法取得了前所未有的成功。尽管如此，移植相关并发症仍制约了器官移植的进一步发展。其中，移植物排斥是移植后移植物失能的主要原因。虽然初的排斥反应由宿主机体获得性免疫系统中T淋巴细胞引起，但新证据表明先天免疫系统也起着重要作用。 Toll样受体是连接先天性免疫与获得性免疫的桥梁，而Toll样受体2（ TLR2）是目前已克隆的人类TLRs家族中表达范围广、识别病原微生物及其产物种类多的分子。它分布于抗原提呈细胞、炎症细胞、多种组织细胞以及肿瘤细胞等，在细菌、真菌、病毒及其他一些病原体感染中发挥先天性免疫作用，并通过其胞内信号转导而连接获得性免疫。与其他TLR相比，TLR2更有特点：其他TLR需与TLR2形成复合体而发挥作用。近年来， TLR2在器官移植排斥反应中的作用越来越受到关注，它在移植免疫排斥反应中扮演着怎样的角色呢？本文将对此作一综述，旨在探讨其关键作用及可利用的治疗靶点。
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人脐血间充质干细胞生物学特性、分化潜能与临床应用的研究进展
关于干细胞的描述始于19世纪末，随着生命科学的进步，干细胞研究和应用领域得以不断拓宽和深入。所谓干细胞是一类具有无限的或者永生的自我更新能力的细胞，能够产生至少一种类型、高度分化的子代细胞。干细胞按其发生学来源可分为胚胎干细胞和成体干细胞，成体干细胞是指已分化组织中的未分化细胞，包括造血干细胞、间充质干细胞、神经干细胞、皮肤干细胞等。我国对成体干细胞的研究甚多，尤其是对间充质干细胞（ Mesenchymal stem cell，MSCs）的研究。 MSCs主要存在于骨髓、外周血、胎盘、脐带、脐血、成人膝关节的滑膜中，胎儿、成人和老年人的骨骼肌和皮肤结缔组织中也均含有MSCs ［1］。脐血作为干细胞的来源和应用已被广泛接受，近年来，人脐血间充质干细胞（ Umbilical cord blood mesenchymal stem cells ， UBMSCs ）以其来源丰富和生物学特性，成为倍受关注的成体干细胞。
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靶向小鼠TNF-α基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定
目的：构建靶向小鼠TNF-α基因的RNA干扰慢病毒载体，为RNA干扰基因治疗提供基础。方法：设计、合成3组靶向TNF-α基因的特异小干扰RNA （ siRNA）：siRNA1、siRNA2、siRNA3及阴性对照siRNA，体外转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7，用real-time PCR和ELISA法检测其对经脂多糖刺激的RAW264.7细胞表达TNF-α、IL-1β、IL-6的影响。筛选出特异且抑制性高的siRNA，根据其序列设计合成寡核苷酸链，构建表达短发卡RNA（ shRNA）的重组慢病毒质粒并测序，经鉴定质粒与包装质粒共转染293 T细胞生产慢病毒颗粒，计算病毒颗粒滴度。结果：①siRNA1、siRNA2、siRNA3组的TNF-αmRNA相对表达量分别为0.24±0.01、0.16±0.02、0.19±0.01，与阴性对照0.95±0.02相比差别均具有统计学意义（ F＝531.3， P＜0.001）；与阴性对照相比，mRNA表达抑制率分别为74.26％、83.09％、79.93％。siRNA1、siRNA2、siRNA3及阴性对照组的IL-1βmRNA或IL-6 mRNA相对表达量之间差别无统计学意义（F＝0.981，P＝0.9807＞0.05；F＝0.739，P＝0.5867＞0.05）。②siRNA1、siRNA2、siRNA3的TNF-α蛋白表达分别为（23.95±1.21）、（17.27±1.46）、（19.07±1.57） ng／ml 与阴性对照的（35.37±2.93）ng／ml相比，差别均具有统计学意义（F＝18.1，P＝0.0006＜0.001）；与阴性对照相比，TNF-α蛋白表达抑制率分别为32.29％、51.16％、46.08％。③以siRNA2序列设计、合成寡核苷酸链，构建重组慢病毒穿梭质粒，其PCR产物电泳结果为343 bp，空载体PCR产物306 bp；DNA测序显示pGCSIL-GFP-shRNA测序反应中断，但已显示部分插入序列。④转染后的293 T细胞，生长良好，荧光表达强，慢病毒滴度为2×106 TU／μl。结论：靶向小鼠TNF-α基因RNAi慢病毒载体构建成功。
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本刊诚聘特约审稿人
《中国免疫学杂志》是中国免疫学会会刊，主要报道我国免疫学研究的各项国家科研课题，是全面反映中国免疫学整体水平的主流媒体。为了进一步加快审稿速度，缩短稿件刊用周期，特诚聘特约审稿人数名，组建审稿专家队伍，详情请登陆本刊网站，Web site：www．immune99．com；www．中国免疫学．中国。
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大籽蒿花粉过敏原的分离、鉴定与纯化
目的：对我国蒿属花粉中常见的大籽蒿花粉进行分离、鉴定与纯化。方法：提取大籽蒿花粉粗浸液，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离蛋白质组分，并用凝胶成像系统测定各组分的相对分子质量（Mr）；免疫印迹（Western blot）鉴定花粉主要过敏原；通过DEAE-Cellulose DE-52离子交换层析（ Ion exchange chromatography ，IEC）对大籽蒿花粉过敏原进行纯化和免疫印迹鉴定。结果：分离后得到20多种蛋白组分，其中分子量（ Mr）为62、57、38、29、25、14 kD 6个条带蛋白含量丰富，其中Mr为62 kD和16 kD的蛋白条带与确诊的蒿属花粉过敏患者血清特异性IgE结合率高（均＞50％），为其主要过敏原，离子交换层析纯化后可得到Mr为62、16 kD的过敏原。结论：大籽蒿花粉的主要过敏原为Mr 62 kD和16 kD的蛋白组分，离子交换层析技术可以对Mr为62 kD、16 kD的主要过敏原成分进行纯化。
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MPB64在杆状病毒系统中的表达纯化及免疫原性鉴定
目的：在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达结核分枝杆菌蛋白MPB64，并鉴定其免疫原性。方法：目的基因MPB64连接到pFastBac载体，获得pFastBac-MPB64质粒转化DH10 Bac感受态，通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中，得到Bacmid-MPB64穿梭载体，脂质体包被后转染Sf 9细胞收获P1代病毒，重复转染Sf 9细胞三次获得高滴度的P4代病毒，收集细胞上清通过Q Sepharose FF和Ni亲和层析柱两步层析纯化得到目的蛋白MPB64。纯化的蛋白免疫BALB／c小鼠并检测血清中抗体滴度，ELISA检测MPB64蛋白刺激脾脏细胞产生IFN-γ的浓度，MTT法检测目的蛋白对免疫后小鼠脾脏细胞的增殖作用。结果：MPB64在昆虫细胞中成功表达，纯化后蛋白纯度达90％以上，蛋白产量为35 mg／L，纯化蛋白能有效刺激BALB／c小鼠产生抗体，提高小鼠脾脏细胞培养基中IFN-γ的含量，目的蛋白在0.2～100μg／ml之间对脾脏细胞有明显的促增殖作用。结论：成功在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达了具有免疫原性的MPB64蛋白，为生产结核病疫苗奠定了基础。
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CD40信号联合细胞因子体外制备过继免疫治疗细胞的实验研究
目的：探索一种新的过继免疫治疗细胞体外培养的方法。方法：从正常人外周血分离单个核细胞（ PBMCs ），经过CD40激发型单抗5C11、细胞因子IFN-α、IL-7、IL-2（CD40激发组）诱导并扩增，光镜下观察其细胞形态及计数，进行动态增殖观察，并在第9天收集细胞，对其淋巴细胞亚群、NKT细胞和调节性T细胞（ Treg）的比例进行分析，同时与常规CIK细胞（ CD3激发组）进行比较性分析。结果：两组培养细胞中CD4＋／CD8＋细胞的比例无明显差异；但CD3激发组中的Treg数量和比例远高于CD40激发组，而CD3＋CD56＋的NKT细胞低于CD40激发组，同时，CD40激发组出现了一群单核-NK-DC（ Mo-NK-DC）样细胞。结论：本实验所建立的新型过继免疫治疗细胞培养方法能提高具有肿瘤杀伤能力的NKT细胞的比例，同时显著减少Treg的数量，有望为肿瘤细胞过继免疫治疗开拓新的方案。
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孕妇血清妊娠相关蛋白A鲁米诺氧通道免疫测定方法的建立
目的：建立孕妇外周血妊娠相关蛋白A的鲁米诺氧通道免疫测定方法。方法：采用1株鼠抗人PAPP-A单克隆抗体用于生物素标记，兔抗人PAPP-A多克隆抗体包被受体微球，与包被有链霉亲和素的供体微粒共同构成检测试剂，优化检测条件并评价检测性能。结果：本方法的批内及批间精密度为5.91％～7.94％和6.14％～9.69％；分析灵敏度2.8 mU／L，功能灵敏度4.6 mU／L，在2.8～8000 mU／L范围内线性良好；回收率为96.7％～100.3％，通过干扰性实验分析溶血、黄疸和脂血的干扰率均＜10％；当PAPP-A浓度高达8000 mU／L时，无Hook效应；本文所建立方法检测50份临床标本，结果与时间分辨荧光分析法的结果相关系数为0.989。结论：本研究建立的方法能够用于孕妇血清PAPP-A的定量测定，检测性能符合临床诊断试剂的要求。
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CD59促进LAT介导的T细胞活化
目的：研究CD59分子在LAT（ Linker for activated T cells ）介导的T系淋巴细胞活化中所起的作用。方法：构建LAT-GFP融合蛋白，以逆转录病毒为载体转染Jurkat细胞，建立稳定转染细胞株（ Jurkat-GFP）。分别使用CD59抗体刺激和pSUPER-siCD59干扰质粒（ GFP标记）沉默Jurkat-GFP细胞。免疫荧光观察CD59和LAT分子在细胞膜的表达和定位；MTT比色法检测细胞增殖率的变化；Western blot检测LAT活化信号转导通路中相关蛋白分子磷酸化水平。结果：荧光显微镜下可见Jurkat-GFP细胞绿色荧光表达于细胞膜，转染干扰质粒后细胞膜和细胞质均有绿色荧光表达。激光共聚焦显微镜下可见CD59抗体刺激前CD59和LAT分子均匀分布于细胞膜，且转染干扰质粒的Jurkat-GFP细胞CD59表达量下降。 CD59抗体刺激后CD59分子和LAT分子点状聚集共定位于细胞膜。 MTT结果表明相对于正常Jurkat-GFP细胞，抗体活化后细胞增殖速率明显升高（P＞0.05），而电转干扰质粒后细胞生长减慢。 Western blot 结果表明，CD59抗体刺激后细胞ZAP-70、LCK、PLC-r总蛋白表达无明显差异（ P＞0.05），而磷酸化蛋白表达显著增高（ P＜0.05）。结论：抗体活化后细胞膜上CD59和LAT分子聚集并共定位于细胞膜，且细胞信号转导通路下游分子磷酸化水平增高，进一步证实CD59分子经抗体活化后可促进LAT介导的T细胞信号转导。
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不同类型音乐对老年大鼠脑组织海马区神经细胞凋亡的影响
目的：探讨不同类型音乐对老年大鼠脑组织海马区Caspase-3和Livin表达水平的影响。方法：取健康老年雄性Wistar大鼠40只，随机分为：空白对照组、莫扎特音乐组、梁祝音乐组和摇滚音乐组，每组各10只；每天上午水迷宫训练同时音乐干预2 h，下午单纯音乐干预2 h，连续7天，第8天处死大鼠取血液及脑组织，采用ELISA检测大鼠血清及脑组织中Caspase-3和Livin蛋白含量的变化水平；采用免疫组织化学法检测大鼠脑组织海马区中Caspase-3和Livin蛋白表达水平；采用实时-PCR检测大鼠脑组织中Caspase-3和Livin的基因变化水平。结果：与对照组比较，莫扎特音乐组、梁祝音乐组大鼠血清及脑组织中Caspase-3蛋白含量、蛋白表达和基因水平均降低有统计学意义（P＜0.01），Livin蛋白含量、蛋白表达和基因水平均升高有统计学意义（P＜0.01），莫扎特音乐组略好于梁祝音乐组差异无统计学意义（P＞0.05）；而摇滚音乐组大鼠血清及脑组织中Caspase-3和Livin蛋白含量、蛋白表达和基因水平均无差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论：莫扎特音乐组和梁祝音乐组能通过降低血清及脑组织中Caspase-3水平、提高Livin水平，抑制机体脑神经细胞的凋亡，从而起到神经保护作用；而摇滚音乐组在本研究中效果不明显。
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抗IL-1β和TNF-αIgY抗体治疗豚鼠过敏性支气管哮喘的机制
目的：探讨抗IL-1β和TNF-αIgY抗体雾化吸入治疗豚鼠过敏性支气管哮喘的机制。方法：Hartly豚鼠随机分为雾化吸入生理盐水的正常对照组（C组），以及雾化吸入卵清白蛋白（OVA）建立过敏性哮喘模型的哮喘模型组（M组）、1.0％抗IL-1β和TNF-αIgY模型豚鼠治疗组（ Z1组）和布地奈德混悬液模型豚鼠治疗组（ Z2组）。各组豚鼠末次治疗结束后2、4、8、24 h心脏穿刺取血；收集支气管肺泡灌洗液（ BALF）。美蓝及伊红染色计数血液嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、嗜碱性粒细胞。 ELISA法测定血浆和BALF中IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β1、IgE的含量。结果：Z1组嗜酸性粒细胞在2～8 h低于M组。 Z1组血浆IL-1β（4、24 h）、IL-16（2、4、24 h）、TGF-β1（4～24 h）、IgE（24 h）较M组显著降低（P＜0.05），而在BALF中IL-1β和TNF-α（2～8 h），IL-4、IL-6、IL-8和IL-13（4～24 h），IL-16（8 h）、TGF-β1和IgE （4～8 h）显著降低于M组，尤其是IL-1β和TNF-α在2 h就开始显著降低（ P＜0.05）。 IL-1β及TNF-α与IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TGF-β1、IgE等呈正相关（ P＜0.05）。结论：抗IL-1β和TNF-αIgY雾化吸入减轻OVA诱导的豚鼠过敏性哮喘炎症可能是通过降低多种过敏性炎症因子浓度而实现。
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T细胞亚群偏移与雌激素缺乏骨丢失相关性实验研究
目的：观察雌激素缺乏骨丢过程中T细胞亚群（ Th1／Th2／Th17／Treg ）变化，探讨其在雌激素缺乏骨丢失中的作用，为临床治疗提供新的靶点与途径。方法：30只BALB／c小鼠随机分为正常组、假手术组及卵巢切除组，各10只。 ELISA法检测血清雌二醇（E2）水平，双能X线骨密度仪检测股骨骨密度（BMD），流式细胞仪胞内外双染色法检测脾脏单个核细胞Th1／Th2／Th17／Treg亚群比例。结果：与正常小鼠及假手术小鼠比较，卵巢切除小鼠E2、BMD显著降低（P＜0.05），Th1、Th17亚群比例明显升高（P＜0.05），Th2、Treg亚群比例明显降低（P＜0.05），Th1／Th2比值及Th17／Treg升高（P＜0.05）；BMD与E2水平、Th2、Treg亚群比例呈显著正相关（ P＜0.05），与Th1、Th17亚群比例呈显著负相关（ P＜0.05）。结论：T细胞亚群偏移参与了雌激素缺乏导致的骨丢失，逆转T细胞亚群失衡可能成为防治雌激素缺乏骨丢失的有效靶点与途径。
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mIL-21-hIgGFc融合蛋白在293 E细胞中的表达纯化及其对CD8＋T细胞表型的影响
目的：在293 E细胞中表达小鼠IL-21-hIgGFc融合蛋白，并检测该蛋白对CD8＋T细胞表型的影响。方法：运用RT-PCR方法从BALB／c小鼠脾脏淋巴细胞扩增出 IL-21基因，插入到 PTT3-hIgGFc 载体上，获得重组质粒 PTT3-mIL-21-hIgGFc；用磷酸钙瞬时转染293E细胞，48 h和72 h后分别收集培养上清。培养上清经MOLLIPORE LabscaleTM TFF system浓缩后， Protein G琼脂糖柱纯化获得mIL-21-hIgGFc融合蛋白，再用ELISA和SDS-PAGE电泳检测融合蛋白的含量和纯度。mIL-21-hIgGFc刺激P1A小鼠的CD8＋T细胞，72 h后，运用流式细胞术检测其表型改变情况。结果：重组质粒PTT3-mIL-21-hIgGFc经酶切和测序确定载体构建成功，ELISA检测表明293E细胞上清中含有787 ng／ml，SDS-PAGE结果显示得到了较纯的融合蛋白，纯化后获得500μg融合蛋白mIL-21-hIgGFc。融合蛋白mIL-21-hIgGFc 处理P1A小鼠CD8＋T细胞后，CD44low CD62Lhi CD8＋T细胞明显增多。结论：我们成功构建了PTT3-mIL21-hIgGFc重组质粒，在293E细胞中表达并纯化出mIL21-hIgGFc融合蛋白。 mIL21-hIgGFc能促进CD8＋T细胞向CD44lowCD62Lhi CD8＋记忆干细胞表型分化，这对于肿瘤过继免疫治疗方案的改进具有重要的参考意义。
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Jagged1活化Notch通路促进RAW 264.7向破骨分化但抑制增殖
目的：探讨Jagged1通过活化Notch通路对RAW 264畅7细胞向破骨分化及增殖的影响。方法：将RAW 264畅7细胞分三组培养：对照组（细胞培养基＋鼠RANKL 50 ng／L）、Jagged1组（细胞培养基＋鼠RANKL ＋Jagged1重组蛋白）、γ-分泌酶抑制剂（ DAPT）组（细胞培养基＋鼠RANKL ＋Jagged1重组蛋白＋DAPT），实时荧光定量PCR检测各组破骨细胞标志基因组织蛋白酶K（Cathepsin K，CK）、抗酒石酸性磷酸酶（Tartrate-resistant acid phosphatase， TRAP）、降钙素受体（Calcitionin receptor， CTR）及Notch靶基因HES-1、HEY-1 mRNA的表达，TRAP染色鉴定破骨细胞，扫描电镜检测破骨细胞溶骨功能。免疫荧光检测NICD的表达变化，CCK-8检测RAW 264畅7细胞增殖。结果：Jagged1组TRAP、CK、CTR 及HES-1、HEY-1 mRNA 的表达、TRAP＋细胞数较对照组及DAPT组明显升高（P＜0畅05），而DAPT组与对照组均无明显变化；细胞免疫荧光显示Jagged1组NICD除表达于细胞膜、细胞质外，细胞核也有较高表达，对照组及DAPT组细胞核中NICD无明显表达；细胞培养48 h，Jagged1组细增殖较对照组及DAPT组出现明显抑制。结论：Jagged1通过活化Notch通路促进RAW 264畅7向破骨细胞分化、抑制其增殖。
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“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠血清IL-12和IL-18表达水平的影响及其作用机制
目的：观察“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力（ EAMG）大鼠血清中IL-12、IL-18表达水平的影响，分析针灸治疗重症肌无力（MG）的作用机制。方法：采用乙酰胆碱受体α1（AchRα1）129～145多肽片段免疫接种雌性Lewis大鼠，建立EAMG模型。随机选取建模成功的EAMG大鼠30只，分为针灸治疗组10只、药物对照组10只及模型对照组10只，并将同期购进未建模的10只大鼠设为空白对照组。针灸治疗组大鼠予以“温阳补气”针法治疗，30 min／次，1次／d，7 d为1疗程，疗程间休息1 d，连续治疗2个疗程；药物对照组予以溴吡斯的明灌胃治疗，18.5 mg／（ kg· d），连续治疗15 d；其余2组不予任何特殊处置，仅作对照观察。治疗后抽取大鼠尾根静脉血，采用ELISA法测定大鼠血清中IL-12和IL-18的表达水平。结果：经治疗后，针灸治疗组、药物对照组与模型对照组比较，两组EAMG大鼠血清的IL-12和IL-18表达水平，均明显降低（ P＜0.05或P＜0.01）；针灸治疗组和药物对照组的组间比较显示，两组EAMG大鼠血清的IL-12和IL-18表达水平无显著性差异（ P＞0.05）。结论：“温阳补气”针法可以降低EAMG大鼠血清IL-12和IL-18的表达水平，从而达到治疗MG的作用，且其治疗效果与溴吡斯的明相近。
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特异性TCRαβ基因转染T细胞促进抗肿瘤免疫的研究
目的：研究肝癌特异性TCR基因TCRVα12畅2-Vβ7畅1转染T细胞后，促进T细胞识别肿瘤抗原，活化抗肿瘤免疫反应的效果。方法：构建重组腺病毒Ad5F35-TRAV-TRBV，以之感染T细胞并优化佳感染条件。钙黄绿素染色法检测T细胞对不同肿瘤靶细胞株的杀伤活性。 Annexin V-PI双染法检测靶细胞凋亡比例。流式细胞术检测T细胞表面FasL表达比例。 ELISA法检测T细胞作用于靶细胞后IFN-γ与IL-2分泌水平。结果：成功将TCRVα12畅2-Vβ7畅1基因片段构建入嵌合型腺病毒载体，获得重组腺病毒 Ad5 F35-TRAV-TRBV。感染复数为100时，重组腺病毒有高转染效率。感染3天后， TCRVα12 Vβ7阳性细胞比例超过25％。特异性TCR基因转染有效促进T细胞杀伤AFP阳性肝癌细胞，特异性裂解率显著提高（ P＜0畅001）。特异性TCR基因转染有效促进T细胞诱导靶细胞凋亡（ P＜0畅001）。同时，T细胞表面FasL表达比例上升（ P＜0畅001）。 TCR基因转染T细胞作用于AFP抗原阳性靶细胞后IFN-γ分泌显著提高（P＜0畅001）。结论：重组腺病毒Ad5F35-TRAV-TRBV成功介导肿瘤特异性TCR基因转染T细胞。 TCR基因转染可有效促进T细胞识别抗原阳性肿瘤细胞，并发挥抗肿瘤免疫效应。
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工程师课程教学模式在免疫学双语教学活动中的实践
免疫学是研究生命科学基本问题和预防治疗疾病的重要学科，它的飞速发展不仅为疾病的诊治预防提供了新的视觉和方法，而且也是生物高新技术产业化的基础，推动了一大批的生物制品生产和应用，例如：疫苗、抗原抗体检测试剂、抗体药物、细胞因子等。免疫学是我院生物工程专业和食品科学与工程专业的主干课程之一，该课程的改革和建设得到学院和学校的大力支持，2005年课程开始采用中英文双语教学，其中英文占比例大约为1∶1。2007年法国贡比涅技术大学（The University of Technology of Compi ègne）法籍教授Bertrand Favreau 全职受聘于我院并加入我们免疫学课程教学，推行以英文为主体，辅以中文释义的教学，其中中文∶英文授课的课时比例大约为1∶9。Favreau B.博士曾经在法国多所院校工作过，有丰富的教学经验，并且也和法国企业有长期的合作关系。这次他直接留在我院工作了5年，带来了法国的工程师优质教育培养体系，使得我们能够进行深度的国际合作，在一个较高的层次上了解国际工程师的要求和市场需求。我们对整个课程教学做了非常大的变动，建设的主体指导精神是结合生物工程专业的国际需求和企业标准培养工程人才，强化培养学生的工程能力和创新能力，这一点也和后来2011年教育部推广的“卓越工程师教育培养计划”相符。从学生就业情况和反馈意见来看，该教学模式有效地平衡了医学基础教育和生物工程实践要求，促进了工科学生素质和才能的普遍提高，具有更强的劳动力市场适应性。现将有关经验总结如下，与大家共同探讨。
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 03 04 05 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
