中国免疫学杂志
Chinese Journal of Immunology 중국면역학잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中国免疫学会,吉林省医学期刊社
- 影响因子: 0.92
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1000-484X
- 国内刊号: 22-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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瘦素预处理的MSC体外调节SLE患者淋巴细胞亚群的初步研究
目的:前期研究证实系统性红斑狼疮(SLE)患者血清异常升高的瘦素可加剧间充质干细胞(MSC)衰老,本研究旨在探讨瘦素预处理MSC对淋巴细胞亚群免疫调节的变化情况.方法:分离脐带MSC,并收集SLE患者外周血单个核细胞(PBMC),分为三组:PBMC组,MSC+PBMC,瘦素(100 ng/ml)预处理MSC 3 d+PBMC,1:10共培养3 d,收集悬浮细胞.流式细胞仪检测淋巴细胞亚群:CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞、CD4+IL-17+Th17细胞、CD4+CXCR5+PD-1+滤泡辅助T(Tfh)细胞、CD19+B细胞,并检测CD3+T细胞、CD19+B细胞表面CD25、CD69平均荧光强度(MFI).结果:与对照组相比,瘦素预处理的MSC对Treg细胞上调作用受损[(8.53±2.33)% vs(6.79±2.14)%,P<0.01],对Th17细胞下调亦受影响[(1.28±0.70)% vs (1.64±0.55)%,P<0.01],Tfh细胞比例有增加的趋势,但差异无统计学意义[(1.48±1.36) % vs (2.08±1.52)%,P=0.051].与MSC组比较,瘦素预处理组T细胞活化分子CD25、CD69表达增加.而在B淋巴细胞活化指标,瘦素预处理后CD25 MFI较前有升高[(19.16±3.62) vs (21.05±2.36),P<0.05],但对CD69影响则无统计学差异.结论:瘦素体外作用于MSC,不仅使加剧其细胞衰老,亦损伤其对T、B淋巴细胞的免疫调节能力.
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血浆前蛋白转化酶枯草溶菌素9与钙化性主动脉瓣疾病的关联机制
目的:探讨血浆前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)与钙化性主动脉瓣疾病(CAVD)的相关性.方法:经心脏彩超筛选CAVD患者120例及阴性对照组患者40例,通过CT定量评分系统分4组:AVC 1、2、3和4级,并通过软件计算主动脉瓣钙化积分.检测血浆总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、载脂蛋白A1(Apo A1)及载脂蛋白B(Apo B)、脂蛋白(a){LP(a)}和高敏C反应蛋白(hsCRP)水平以及PCSK9水平.结果:4组患者LDL-C、Apo B 和Lp(a) 水平差异有显著性(P<0.05),AVC2-4级患者明显高于AVC1级,而TG、HDL-C、apo A1和hsCRP组间差异无统计学意义.AVC3级和AVC 4级的TC水平高于AVC1组(P<0.05).同时,AVC2-4组血浆PCSK9水平高于AVC1组 (P<0.05).将所有人群的主动脉瓣钙化积分与TC(r=0.248,P=0.026),LDL-C (r=0.222,P=0.048),Lp(a) (r=0.276,P=0.013),Apo A1(r=0.245,P=0.012),Apo B(r=0.212,P=0.019)和PCSK9(r=0.309,P=0.005)均存在明显相关性,Apo A1,Apo B呈正相关.结论:CAVD患者PCSK9水平明显高于对照组,PCSK9与CAVD的发生存在相关性.
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血浆miRNA-200b及miRNA-21在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义
目的:探讨血浆微小核糖核酸-200b(miRNA-200b)及微小核糖核酸-21(miRNA-21)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达及其临床意义.方法:采用RT-PCR检测162例EOC患者、120例上皮性卵巢良性肿瘤患者(良性组)和108例健康女性(对照组)血浆miRNA-200b、miRNA-21及CA125表达水平,分析miRNA-200b及miRNA-21表达水平与EOC临床病理特征的关系.应用ROC曲线评价miRNA-200b、miRNA-21及CA125对EOC诊断的灵敏度和特异度,多元Logistic回归模型分析三项指标与EOC的关系.Pearson相关分析EOC患者血浆miRNA-200b与miRNA-21、CA125的相关性.结果:EOC组血浆miRNA-200b、miRNA-21及CA125表达水平均明显高于良性组和对照组[miRNA-200b(2-ΔΔCt):3.52 ±1.03 vs 1.26 ±0.37和1.15±0.34;miRNA-21(2-ΔΔCt):2.32±0.45 vs 1.18±0.32和1.04±0.28;CA125(U/ml):78.64±30.57 vs 26.27±11.36和21.53± 9.45,均 P<0.01].血浆 miRNA-200b、miRNA-21、CA125及三项联合诊断 EOC 的 AUC(95% CI)分别为0.896(0.834 ~0.958)、0.792(0.731~0.847)、0.908(0.841 ~0.973)、0.947(0.883 ~0.995),其佳截值分别为2.08、1.46、52.84 U/ml.Logistic回归分析显示,血浆miRNA-200b、miRNA-21及CA125水平升高是EOC发生的独立危险因素[OR(95% CI)=2.518 (1.563~3.547),OR(95% CI)=1.724(1.103~2.528),OR(95% CI)=2.316(1.347 ~3.419)].EOC患者血浆miRNA-200b与CA125的相关性好(r=0.702,P<0.01).结论:血浆miRNA-200b及miRNA-21可作为早期诊断EOC的分子标志物,其诊断效能与CA125相当,三项联合应用有望提高EOC早期诊断的准确性.
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IL-21/BCL-6/Blimp-1在囊性包虫病中的表达特点研究
目的:研究IL-21/BCL-6/Blimp-1在囊性包虫病患者体内的表达,和参与包虫病发病的作用机制.方法:收集27例新疆医科大学第一附属医院住院肝包虫病患者及同期30名健康体检者的外周静脉血.用ELISA方法检测血浆IL-21水平,确诊的CE患者用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测患者外周血单个核细胞中IL-21/BCL-6/Blimp-1 mRNA的表达量.同时,在包虫病患者组中追踪17例治愈者,测定其在治疗前、治疗后IL-21/BCL-6/Blimp-1的表达量.结果:(1)实时荧光定量PCR结果显示,与健康对照组相比,囊性包虫病患者外周单个核细胞中IL-21/BCL-6 mRNA水平明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05).但Blimp-1升高不明显.在包虫病治疗前治愈后的结果对比中可观察到IL-21/BCL-6/Blimp-1 mRNA的表达下调,差异均具有统计学意义(P<0.05).(2)ELISA方法结果显示,CE患者外周血清中IL-21水平与健康对照组相比显著升高并在治愈之后基本回至正常水平,差异具有统计学意义(P<0.05).IL-21与BCL-6呈正相关(r=0.733,P<0.01);IL-21与Blimp-1无相关性(P=0.179);Blimp-1与BCL-6无相关性(P=0.157).结论:在人感染细粒棘球蚴的病程发展中,BCL-6、Blimp-1可能通过调节IL-21的表达,促进人体免疫系统抵抗寄生虫感染.IL-21、BCL-6、Blimp-1在手术有效治疗后明显下降,表明这三种因子参与了包虫病发展的免疫机制.
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根尖牙乳头间充质干细胞移植对胶原诱导性关节炎的影响
目的:探讨根尖牙乳头间充质干细胞(SCAP)移植对胶原诱导性关节炎(CIA)的影响.方法:用Ⅱ型胶原蛋白免疫20只DBA/1J品系小鼠诱导CIA,然后小鼠被随机平分为2组(SCAP治疗组及阳性对照组),于初次免疫后的第21天分别静脉注射人SCAP及PBS,另有6只正常DBA/1J小鼠作为阴性对照组.ELISA检测TNF-α及抗CⅡ抗体水平,通过关节炎指数评分组织病理学分析及显微CT分析来评估关节炎的严重程度.流式细胞分析比较各组脾脏CD4+Th细胞亚群的水平.结果:一次性静脉输入SCAP能明显降低实验性关节炎的严重程度,恢复Th亚群的平衡.结论:SCAP移植治疗能诱导调节性T细胞水平,从而获得免疫耐受,缓解CIA炎症.
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下调miR-21抑制PI3K/AKT信号通路对白血病细胞增殖凋亡的影响
目的:探讨 miR-21对白血病 K562细胞增殖凋亡的影响及对 PI3K/AKT信号通路的调控作用.方法:将K562细胞分为对照组、miR-21 NC组和miR-21干扰组,对照组不做处理,后两组采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000转染miR-21 inhibitor和miR-21 negative control.转染48 h后,利用实时荧光定量(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-21 mRNA的表达情况,采用MTT比色法检测miR-21对细胞增殖率的影响,流式细胞仪检测miR-21对细胞周期和凋亡率的影响,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测miR-21对各组细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、AKT和p-AKT表达的影响.结果:miR-21干扰组中细胞的miR-21 mRNA表达水平和细胞的存活率较对照组和miR-21 NC组均明显降低;与对照组和miR-21 NC组比较,流式细胞仪检测miR-3干扰组中G0/G1期所占细胞比例明显升高,S期细胞所占比例明显下降,细胞的凋亡率明显升高.Western blot检测p-AKT的表达水平较对照组和miR-21 NC组明显下降,但PI3K和AKT蛋白的表达水平变化不大.结论:下调miR-21能够抑制白血病K562细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可以与抑制PI3K/AKT信号通路有关.
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胸腺重建的研究进展
作为T细胞发育的主要器官,胸腺在产生强大的适应性免疫应答及应对来自病原体和肿瘤的威胁时发挥主要作用.随着对胸腺作用的深入了解,人们逐渐意识到胸腺对急性和慢性损伤均很敏感.胸腺在许多有害因素的作用下会迅速衰退,同时也会随着年龄的增长而衰退.胸腺恢复和重建能使其功能恢复至一定水平.胸腺上皮祖细胞过继免疫、输注IL-2及血管生长因子、调整c-Met信号通路等均可促进胸腺恢复及T细胞再生.
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pMHC多聚体技术研究进展
抗原肽结合的主要组织相容性复合物(pMHC)通过形成多聚体可有效提高结合到位于T细胞表面上的T细胞受体(TCR)的亲合力.自从20年前pMHC四聚体首次被用于抗原特异性T细胞检测以来,pMHC四聚体已成为免疫分析中重要的检测工具之一.近年来pMHC多聚体在四聚体的基础上又取得了较大进展,更高价的pMHC多聚体被研制出来以提高免疫检测的灵敏度;可逆化的pMHC多聚体由于可以从T细胞表面解离而避免了对T细胞的功能损伤,也被发展用于抗原特异的T细胞分离.pMHC多聚体作为一类分子工具在抗原特异的T细胞分析和免疫治疗中具有重要作用,对它的充分了解和有效运用能帮助我们更好地进行科学和临床应用.
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活化T细胞核因子与肿瘤生物学行为的研究进展
NFAT蛋白的相关信号传导通路对于细胞功能的调节起到十分重要的作用,如对细胞的增殖、分化、侵袭、转移、血管形成和肿瘤微环境的调节,同时,其在胚胎发育、器官发生、免疫反应及炎症反应中均扮演着重要角色.虽然NFAT家族已被证明在肿瘤的发生发展中有重要的调节功能,但由于其家族中不同亚型在不同细胞中起的作用不同,故进一步了解NFAT家族在肿瘤演变过程中的作用机制,将有利于确定靶向NFAT的肿瘤治疗新策略
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外泌体及其对调节性T细胞作用的研究进展
调节性T细胞(regulatory T cell,Treg cell)是T细胞中一类具有免疫抑制功能的T细胞亚型,其中关键的亚型是胸腺起源并表达CD4、CD25以及转录因子FOXP3+的CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞(CD4+CD25+FOXP3+Treg cell).调节性T细胞对维持体内免疫稳态极其重要,与多种重大疾病如恶性肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病、过敏性疾病、移植排斥的发生发展密切相关.外泌体(Exosome)是一种可由多种细胞分泌的微型盘状囊泡,通过其囊内包裹的蛋白质、mRNA、微小RNA(microRNA)等物质,在细胞间通信,特别是非接触性的细胞远程调控发挥作用.目前研究发现:外泌体对调节性T细胞的诱导发育,增殖及发挥免疫抑制能力具有一定的影响,深入了解两者之间的联系有利于为将来治疗恶性肿瘤、自身免疫性等疾病提供创新性线索.
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IL-36在炎性疾病中的研究进展
白介素36(IL-36)是IL-1家族成员,由3个生物学功能相似的分子IL-36α、IL-36β和IL-36γ组成.IL-36在体内需通过与特异性受体IL-36R结合而发挥促炎症作用,而IL-36Ra是其受体拮抗剂.IL-36在体内犹如一个辅助者,参与树突状细胞与T细胞的激活、成熟、极化、抗原提呈和刺激促炎因子产生等功能.它作为一种新发现的促炎因子,在银屑病、炎性肠病、关节炎、系统性红斑狼疮、肺部疾病等多种炎性疾病中发挥着重要作用.
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干扰素刺激基因及临床意义研究进展
干扰素(Interferon,IFN)作用于靶细胞表面受体后,通过一系列信号传导激活干扰素刺激基因(Interferon stimulated genes,ISGs)的表达.干扰素刺激基因及其表达产物具有抗病毒、免疫调控等多种生物学功能,是干扰素发挥功能的重要效应分子,同时具有潜在的临床意义.众多国内外研究发现ISGs对Ⅰ型干扰素临床抗病毒效果具有预测意义,同时可能成为某些自身免疫疾病临床诊断的新靶标以及作为一些肿瘤治疗药物新靶点等潜在应用价值.本文将从干扰素刺激基因的诱导产生、抗病毒等生物学功能以及潜在临床意义方面展开综述.
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稳定敲低NLRP3基因的小鼠巨噬细胞系的建立与鉴定
目的:建立NLRP3炎性体缺损的小鼠巨噬细胞模型.方法:构建靶向NLRP3基因的带GFP和Neo标记的shRNA表达载体,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后用G418抗性标记筛选稳定转染的细胞克隆,并利用GFP标记通过流式细胞仪进一步纯化,得到的细胞命名为RAWNKD.利用定量PCR检测RAWNKD细胞及其在LPS和ATP联合刺激下NLRP3基因的稳定抑制效果.结果:RAWNKD细胞GFP标记的阳性率在80%以上,NLRP3基因的抑制率超过90%,即使用LPS和ATP联合刺激NLRP3基因mRNA增加也不明显.结论:成功建立了NLRP3基因稳定敲低的小鼠巨噬细胞系,这种NLRP3炎性体缺损的巨噬细胞是探究NLRP3炎性体活化途径及其介导的炎症信号转导的有力工具.
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脯氨酰异构酶1沉默抑制缺氧/复氧H9c2心肌细胞凋亡
目的:肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)在心血管疾病发病过程中发挥重要作用,本研究检测RNA干扰沉默Pin1对缺氧/复氧诱导的大鼠胚胎心肌细胞H9c2凋亡的影响及机制.方法:体外培养大鼠H9c2细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,模拟体内缺血再灌注损伤;RT-qPCR和Western blot法检测Pin1的表达;将细胞分为空白对照组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧组+转染Pin1 siRNA组、缺氧/复氧组+转染scramble siRNA组;MTT法测H9c2细胞存活率;用流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;用Western blot法检测H9c2细胞Bax和Bcl-2蛋白表达;生化法检测Caspase-3的活性水平.结果:Pin1在缺氧/复氧H9c2细胞中呈现高表达;转染Pin1 siRNA后,Pin1的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与缺氧/复氧组比较,Pin1 siRNA组的细胞存活率增加,凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax升高,Caspase-3活性降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:Pin1下调可减少缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡,可能是通过上调Bcl-2,下调Bax蛋白表达,降低Caspase-3活性而发挥作用.
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抗B7-H4-scFv/PE38KDEL重组免疫毒素的表达和功能性检测
目的:构建基于抗B7-H4单链抗体(scFv)的重组毒素anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,检测毒素蛋白的抗肿瘤作用.方法:通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术将anti-B7-H4-scFv基因和毒素PE38KDEL基因进行连接,重组基因克隆到原核表达载体 pET28a(+)中表达,蛋白经变复性和镍柱亲和层析(Ni-NTA)纯化后进行Western blot 鉴定;间接ELISA 和流式分析技术进行特异性鉴定.利用MTT法和皮下移植瘤模型实验,检测毒素对体外、内肿瘤细胞的抑制作用,并对肿瘤组织进行HE染色和免疫组化分析.结果:酶联后得到重组表达载体pET28a-anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,纯化后的毒素蛋白对肿瘤细胞具有一定杀伤力,并且在肿瘤模型实验中能抑制体内肿瘤的生长.结论:成功构建了基于抗B7-H4单链抗体的重组毒素表达体系,经鉴定重组毒素蛋白有良好的生物学功能活性和抗肿瘤活性.
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高原低氧环境对小鼠巨噬细胞杀伤活性及分泌IL-6、TNF-α的影响
目的:通过建立高原低氧环境的小鼠模型,研究低氧条件对机体固有免疫细胞巨噬细胞(Mφ)吞噬杀伤功能的影响.方法:分别将小鼠暴露于海拔4200 m、2200 m和400 m的不同环境30 d后:① 流式细胞仪检测小鼠腹腔Mφ对FITC标记的金黄色葡萄球菌的吞噬能力;②双乙酰基二氯荧光素(DCFH-DA)荧光探针法检测Mφ的呼吸爆发功能;③ELISA法检测小鼠Mφ培养上清中NO稳定氧化代谢产物亚硝酸盐(NO2-)的水平;④ELISA法检测小鼠Mφ培养上清中的IL-6、TNF-α的释放水平.结果:低氧暴露30 d后,海拔4200 m和2200 m的低氧状态下,小鼠腹腔Mφ的吞噬能力、呼吸爆发水平、NO的释放水平明显低于平原对照组(P<0.05),培养细胞上清中的IL-6、TNF-α的浓度明显升高(P<0.05).结论:低氧暴露30 d可降低Mφ的吞噬能力和氧依赖杀伤功能,升高IL-6、TNF-α的分泌水平,进而影响机体Mφ的固有免疫应答能力.
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溶酶体靶向的汉坦病毒包膜糖蛋白DNA疫苗的体液免疫评价和攻毒保护效果
目的:构建嵌合溶酶体相关膜蛋白(LAMP)的汉坦病毒糖基化蛋白DNA疫苗并对其免疫进行评价.方法:利用前期实验构建的重组质粒pVAX-Gn、pVAX-Gc、pVAX-LAMP/Gn和pVAX-LAMP/Gc以及inactivated疫苗免疫BALB/c小鼠,分别通过间接 ELISA 和中和试验检测免疫小鼠血清中的特异性抗体和中和抗体;攻毒实验检测小鼠体内的保护效力.结果:间接ELISA结果显示,pVAX-LAMP/Gc组特异性抗体滴度高,依次为pVAX-Gc、pVAX-LAMP/Gn、pVAX-Gn与inactivated疫苗组;中和结果显示,LAMP组均优于相应传统DNA疫苗组,且抗体效价均优于Inactived vaccine组;攻毒实验显示,DNA疫苗和inactivated疫苗组小鼠体内无汉坦病毒特异性抗原检出.结论:LAMP分子的嵌合DNA疫苗可诱导更高水平的抗体,在小鼠体内有较好的保护效力,这一靶向策略有望成为提高DNA疫苗效价的有效方式.
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沙眼衣原体pORF5蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路抑制细胞凋亡
目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5蛋白对细胞凋亡的影响,并进一步分析其分子机制,为阐明Ct致病机制提供实验依据.方法:pGEX-6p/pORF5重组质粒转化XL1-blue大肠杆菌,IPTG诱导表达GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B纯化及蛋白酶切除GST标签后得到pORF5蛋白.用不同浓度的pORF5蛋白刺激HeLa细胞,Western blot 检测不同时间Bax和Bcl-2的表达水平以及PI3K/Akt磷酸化水平,Hoechst 33342及流式细胞技术分析细胞凋亡情况;HeLa细胞经PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002预处理1 h后,再用pORF5蛋白刺激24 h,测定细胞凋亡率,并进一步分析凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平及PI3K/Akt磷酸化水平.结果:凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化与pORF5蛋白浓度呈现一定的浓度和时间依赖性,当pORF5蛋白浓度达10 μg/ml时,Bax表达下调,Bcl-2的表达上调,当升高至15 μg/ml时,Bax和Bcl-2的表达量变化明显;15 μg/ml的pORF5蛋白刺激HeLa细胞24 h,Bax和Bcl-2表达变化明显;流式细胞检测结果显示:pORF5蛋白刺激组较TNF-α处理组和未处理组细胞凋亡率分别降低了27.3%(P<0.01)和8.4%(P<0.05);Akt在pORF5蛋白刺激15 min后发生磷酸化,30 min后磷酸化水平达到峰值,用PI3K抑制剂LY294002预处理Hela细胞后,发现Akt的磷酸化显著减少,Bax蛋白表达明显上调,Bcl-2表达明显下调;LY294002处理组细胞凋亡率相比于对照组增加了13.0% (P<0.01).结论:pORF5蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路调节Bcl-2和Bax蛋白的表达抑制细胞凋亡.
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miR-194在增龄性胸腺萎缩中的表达及靶基因研究
目的:检测增龄性胸腺萎缩过程中miR-194与PTPN12的表达水平变化,并分析二者相互作用,阐明其中的分子调节机制.方法:选用C57BL/6小鼠,分为4组:1月龄组、6月龄组、10月龄组和19月龄组,每组6只,雌雄各半.麻醉后取出胸腺组织,用CD45抗体与LS柱吸附洗脱,筛选出胸腺上皮细胞.实时荧光定量PCR与Western blot方法检测随年龄增长,胸腺上皮细胞中miR-194与PTPN12基因的表达变化趋势.体外实验共转染miR-194与PTPN12荧光素酶报告载体到HEK293细胞内,分别于24、48 h后检测自发荧光值.结果:随月龄增长,miR-194表达出现下调趋势(P<0.05),而PTPN12基因表达出现上调趋势(P<0.05),且二者呈负相关性(P<0.05).体外荧光素酶报告基因结果显示,miR-194与PTPN12基因3' UTR区域发生直接作用,并在48 h结合效率高.结论:PTPN12是miR-194靶基因之一,参与了增龄性胸腺萎缩过程,是调节胸腺上皮细胞功能的重要因子.
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FoxO1基因对Jurkat细胞FoxO1-KLF2-S1P1通路的调节作用
目的:通过构建FoxO1表达和干扰慢病毒载体,建立细胞内FoxO1-KLF2-S1P1信号通路调控研究模型,观察FoxO1过表达、干扰表达在Jurkat细胞内对其下游分子表达及功能的影响.方法:构建FoxO1表达和干扰表达慢病毒载体,分别感染Jurkat细胞,采用荧光定量PCR、Western blot和流式细胞术检测S1P1、CD62L、CCR7、CD69 mRNA水平和蛋白分子的表达.结果:FoxO1过表达组于感染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1和CD62L mRNA水平显著增高(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p和KLF2胞浆蛋白水平增高,S1P1+细胞和CD62L+细胞比率增高(P<0.05),CCR7+细胞和CD69+细胞未见显著改变(P>0.05).FoxO1干扰组于转染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1和CD62L mRNA水平降低(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p和KLF2胞浆蛋白水平低于对照组,S1P1+细胞百分比增多(P<0.05),但S1P1+细胞和CD62L+细胞在72 h时减少(P<0.05).结论:FoxO1表达和干扰慢病毒载体转染Jurkat细胞并调节KLF2、S1P1和CD62L等分子的表达,为开展细胞内FoxO1-KLF2-S1P1信号通路调控和细胞相关功能的研究打下了基础.
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黄芪多糖抑制小鼠EAE及调控BV-2神经小胶质细胞活化的实验研究
目的:研究黄芪多糖(APS)对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)的治疗作用以及对参与EAE发病机制的神经小胶质细胞活化的调控作用及其可能的作用机制.方法:动物实验:MOG35-55诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型,予APS给药干预,通过5级临床症状评分观察APS对小鼠EAE的治疗作用.细胞实验:MTT法检测脂多糖(LPS)对于BV-2神经小胶质细胞的增殖抑制作用,筛选合适的LPS刺激浓度活化神经小胶质细胞,构建BV-2神经小胶质细胞活化的模型;倒置显微镜观察BV-2神经小胶质细胞形态学的改变;ELISA法检测BV-2神经小胶质细胞IFN-γ、TNF-α的分泌水平变化;观察不同浓度的APS对BV-2神经小胶质细胞活化的调控作用;APS干预后,Western blot、Real-time PCR方法分别检测BV-2神经小胶质细胞PD-L1蛋白和mRNA表达水平的变化.结果:APS能够有效治疗小鼠EAE的临床症状,成功建立了体外BV-2神经小胶质细胞活化模型,一定浓度的APS能够抑制BV-2神经小胶质细胞的活化,提高活化的BV-2细胞的生存活性,降低IFN-γ、TNF-α的分泌水平,促进活化的BV-2神经小胶质细胞PD-L1基因及蛋白表达上调.结论:APS对小鼠EAE具有明显的治疗作用,其发挥作用的机制可能是APS能够有效抑制神经小胶质细胞的活化,降低炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α的分泌,对神经小胶质细胞有抗炎保护作用,PD-1/PD-L1通路可能是APS发挥抗炎作用的重要途径.
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IL-17D调控肺脏NK细胞募集及黄芪的促进作用
目的:探讨IL-17D调控肺脏NK细胞的募集机制及中药黄芪的促进作用.方法:采用尾静脉注射B16黑色素瘤细胞建立小鼠肺肿瘤转移模型,分别经IL-17D或黄芪处理后,应用流式细胞术和RT-PCR法检测各组小鼠肺脏IL-17D表达状态及其NK细胞含量的变化.结果:小鼠肺转移瘤模型中IL-17D表达水平及其肺脏NK细胞含量急剧下降,经IL-17D处理后可明显上调肺脏NK细胞含量、降低肺脏肿瘤克隆形成.同时,CXCL9、IL-15等与NK募集和功能相关的细胞因子表达明显上调.中药黄芪可促进肺脏IL-17D表达水平,同时上调肺脏NK细胞含量,抑制肺脏肿瘤克隆的形成.结论:IL-17D可调控NK细胞的肺脏募集;中药黄芪可通过上调IL-17D的表达,从而增强NK的肺脏募集能力,促进肺脏抗肿瘤免疫效应.
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黄芪多糖对糖尿病肾病肾小管上皮细胞凋亡、转分化及ROS含量的影响研究
目的:探讨黄芪多糖对糖尿病肾病肾小管上皮细胞凋亡、转分化及ROS含量的影响.方法:HK-2细胞分为低糖组、高糖组和黄芪多糖+高糖组,处理细胞48 h后,CCK-8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡及ROS含量;Western blot检测E-cadherin、α-SMA、STAT1、STAT3、p-STAT1、p-STAT3蛋白表达.结果:高糖组细胞存活率显著低于低糖组(P<0.01),细胞凋亡率、ROS含量及E-cadherin、α-SMA、p-STAT1、p-STAT3蛋白表达均显著高于低糖组(P<0.01),高糖+黄芪多糖组细胞存活率显著高于高糖组,细胞凋亡率、ROS含量及E-cadherin、α-SMA、p-STAT1、p-STAT3蛋白表达均显著低于高糖组(P<0.01).结论:黄芪多糖可促进高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖,抑制细胞凋亡及转分化,其机制与下调JAK/STAT信号通路有关.
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HUVEC疫苗联合化疗抗EMT-6乳腺癌转移实验研究
目的:探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)疫苗与低剂量化疗药多西紫杉醇(DOC)联合能否产生协同抗乳腺癌转移作用.方法:BALB/c小鼠随机分成生理盐水组、HUVEC疫苗组、DOC组及HUVEC疫苗与DOC联用组(HUVEC-DOC)四组,尾静脉注射小鼠EMT-6乳腺癌细胞建立人工肺转移模型,评价不同治疗方案抗肿瘤转移作用.采用脾淋巴细胞增殖实验、细胞毒性T淋巴细胞杀伤实验及IFN-γ含量测定实验检测给药后各组小鼠细胞免疫应答水平.结果:相较于HUVEC疫苗及DOC单药组,HUVEC-DOC联合治疗组肺脏肿瘤转移灶数目明显减少(P<0.05);相较于各单药组,HUVEC-DOC组小鼠的脾淋巴细胞增殖能力和CTL杀伤能力均显著增强(P<0.05);ELISA检测小鼠脾淋巴细胞上清中IFN-γ实验结果显示联合治疗组INF-γ的含量明显高于其他三组(P<0.05).结论:HUVEC疫苗与低剂量的DOC联用具有协同抗乳腺癌作用,该作用与增强的HUVEC特异性细胞免疫应答有关.
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RNAi结肠癌HOXB7基因表达对癌细胞增殖及凋亡的机制研究
目的:探讨抑制HOXB7基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响.方法:通过LipofectamineTM2000脂质体介导法将合成的阴性对照siRNA(阴性对照组)及HOXB7-siRNA(HOXB7转染组)转染人结肠癌SW480细胞,未经特殊处理的细胞为空白组.收集转染48 h的细胞,RT-PCR及Western blot分别检测细胞中HOXB7的mRNA及蛋白表达;分别于转染后的24、48、72、96 h,CCK8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测转染后48 h细胞的凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关 X 蛋白(Bax)及 Notch1信号通路 Notch1、Hes1的蛋白表达.结果:HOXB7转染组HOXB7的mRNA及蛋白表达均显著低于空白组(P<0.05);转染24 h后三组细胞的OD值间差异无统计学意义(P>0.05), 48、72、96 h后,与空白组比较,HOXB7转染组OD值均显著降低(P<0.05);与空白组比较,HOXB7转染组细胞凋亡率显著升高,Bcl-2、Notch1、Hes1蛋白显著下调表达,Bax蛋白显著上调表达(P<0.05).结论:RNAi结肠癌HOXB7基因表达可通过抑制Notch1信号通路降低癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.
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PI3K/Akt/mTOR信号通路介导的N822K突变对c-KIT抑制剂诱导的AML细胞凋亡的影响
目的:研究c-KIT N822K突变对c-KIT抑制剂诱导AML细胞凋亡的影响,并初步探讨相关的分子机制.方法:以c-KIT N822K突变的Kasumi-1细胞为实验组,以HL-60、NB4细胞为非c-KIT N822K突变的对照组,分别用0、0.04、0.16、0.64 μmol/L的c-KIT抑制剂舒尼替尼处理这三株AML细胞24 h后收集细胞,采用Western blot检测凋亡相关蛋白和PI3K/Akt/mTOR通路蛋白水平,比较各组细胞相关信号通路蛋白的变化.结果:随着舒尼替尼浓度的增加,HL-60及NB4细胞中Bax及CytoC、Caspase-9、Actived-Caspase-3、PARP蛋白剪切体等促凋亡相关蛋白表达均上调(P<0.05),抗凋亡蛋白 Bcl-2表达均下调(P<0.01),在具有N822K突变的Kasumi-1细胞中这一变化趋势则明显减弱;Kasumi-1细胞中c-myc蛋白及PI3K、Akt、4EBP1、mTOR等PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的磷酸化水平均出现剂量依赖性下调(P<0.05),而HL-60细胞和NB4细胞则无此变化.结论:N822K突变引起的c-KIT结构性激活可影响c-KIT抑制剂舒尼替尼对Kasumi-1细胞的凋亡诱导作用,其机制可能与PI3K/Akt/mTOR通路抑制有关.
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微课程在免疫学技术教学中的应用初探
快速发展的信息技术丰富着传统教学,针对特定主题的"微课程"作为一种新型教学资源,体现了信息技术和传统教学的良好结合.它不仅能更形象生动地展示教学内容,激发学生的学习兴趣;还可以将难以用传统方法展示的耗时较长的实验浓缩为5~10 min的微视频,拓展了课程内容,也为学生自学提供方便.本文以面向中医药大学研究生的免疫学技术微课程"蛋白质印迹实验"为例,介绍了微课程的优势,制作心得,教学效果和思考,为实验性课程的信息化教育改革提供新的思路.
年 | 期数 |
2019 | 01 03 04 05 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
1999 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |