腺苷二步法生产三磷酸腺苷研究
摘要： 目的对三磷酸腺苷生产工艺进行改进。方法采用二步法利用糖和磷酸盐诱导酵母产生足够量的胞外酵解酶和生产1，6-二磷酸果糖，通过离心去除酵母菌体后，添加底物腺苷，使其转化为三磷酸腺苷。结果二步法杂质少，转化率高，可大幅降低生产成本。结论此法对三磷酸腺苷等的生产工艺改进具有一定的参考作用。
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重组毕赤酵母胸腺肽α1-人血清白蛋白基因工程菌高密度发酵及分离纯化
目的 研究重组毕赤酵母胸腺肽α1-人血清白蛋白(Tα1-HSA)基因工程菌在30 L发酵罐中高密度发酵表达Tα1-HSA融合蛋白的发酵工艺及产物的分离纯化方法.方法 采用两步发酵法进行重组毕赤酵母Tα1-HSA基因工程菌的高密度发酵.发酵液经超滤浓缩,阴离子交换色谱,亲和色谱,凝胶过滤色谱等步骤进行分离纯化.结果 发酵结束后,菌体细胞湿重达到350 g/L,发酵液中蛋白产量达到2.0 g/L.发酵液经分离纯化后获得了纯度较高的重组Tα1-HSA融合蛋白,HPLC分析纯度达97.5％.结论 重组毕赤酵母Tα1-HSA基因工程菌高密度发酵的成功及分离纯化方法的建立为Tα1-HSA的进一步研究和开发奠定了基础.
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丹皮酚对急性哮喘模型小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素表达的影响
目的 观察丹皮酚对急性哮喘小鼠模型气道炎症以及对胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)表达的影响.方法 BALB/c小鼠48只随机分成正常对照组、哮喘模型组、丹皮酚组、布地奈德组,每组12只.卵蛋白致敏,气道激发,丹皮酚组给予丹皮酚100 mg/kg灌胃,1次/d,末次激发24 h后,检测各组小鼠气道反应性.HE染色观察气道炎症变化;采用ELISA观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-13和血清总IgE的表达,real-time PCR观察TSLP的表达,Western-blot观察TSLP蛋白表达.结果 哮喘组小鼠气道炎症和气道高反应性明显加重,丹皮酚能够显著抑制慢性哮喘小鼠模型的气道炎症和气道高反应性,哮喘BALF中Th2细胞因子IL-4、IL-13和血清总IgE含量显著降低.丹皮酚治疗后哮喘小鼠肺组织高表达的TSLP的mRNA和蛋白水平显著降低.结论 丹皮酚能够抑制哮喘小鼠模型的气道炎症和气道高反应性,其机制可能通过抑制TSLP的的表达而实现.
关键词： 丹皮酚 哮喘 胸腺基质淋巴细胞生成素 -
免疫球蛋白IgG对H2O2所致内皮细胞损伤的抑制作用及其机制
目的 探讨免疫球蛋白IgG对H2O2诱导的内皮细胞的黏附分子和趋化因子的表达及作用机制.方法 IgG和H2O2加入内皮细胞中孵育2h,应用RT-PCR以及实时定量RT-PCR检测黏附因子(ICAM-1、VCAM-1、E-selectin)及趋化因子(MCP-1、CXCL-1、MIP-2)的mRNA及蛋白表达;进一步应用Western blot检测IgG对H2O2诱导的p38、ERK1/2和JNK1/2的磷酸化情况.结果 H2O2可显著诱导黏附分子(ICAM-1、VCAM-1和E-selectin)、趋化因子(MCP-1、CXCL-1、MIP-2)的表达,而IgG对H2O2诱导的这些因子的表达有抑制作用;且IgG可抑制H2O2诱导的p38、JNK1/2和ERK1/2的磷酸化.结论 IgG对H2O2诱导的内皮细胞黏附分子及趋化因子表达的抑制作用可能通过抑制p38、JNK1/2、ERK1/2的信号通路实现,这可能是IgG调节内皮细胞炎症的机制之一.
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生物信息资源在耻垢分枝杆菌EmbB多克隆抗体制备中的应用
目的 建立通过生物信息学手段制备耻垢分枝杆菌(M.smegamatis)EmbB (Sm EmbB)多克隆抗体的方法.方法 应用生物信息资源在Sm EmbB的N端寻找一段18个氨基酸的特异短肽,合成后将其与白喉类毒素分子相连,以所形成的复合物免疫动物制备抗Sm EmbB的多克隆抗体.结果 Western blot结果显示获得的抗体可特异地作用于Sm EmbB.结论 通过生物信息学手段制备多克隆抗体方法的建立解决了对蛋白质功能研究中缺乏抗体的困扰,为特殊蛋白质的抗体制备提供了借鉴.
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高效液相色谱法测定麝香风湿片中乌头碱的含量
目的 建立麝香风湿片中乌头碱含量的高效液相色谱测定方法.方法 采用Agilent C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:甲醇-0.05％磷酸溶液(含0.04％三乙胺)(68:32);流速0.8 mL/min;检测波长:235 nm;柱温:30℃;进样量:10 μL.结果 乌头碱在0.200 6 ～ 20.06 μg/mL浓度范围与峰面积呈良好线性关系,r=0.999 9,低检测限约为2 ng,平均回收率为97.7％.结论 此方法具有快速、简便、灵敏、准确等特点,适合于麝香风湿片中乌头碱的含量测定.
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大黄素对糖尿病大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1表达的影响
目的 探讨大黄素对糖尿病大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病对照组、糖尿病大黄素治疗组,经大黄素治疗糖尿病大鼠2,4和8周后,分别观察大鼠血肌酐及24 h尿蛋白定量,以及肾脏MCP-1表达的变化.结果 与正常对照组相比,糖尿病大鼠的24 h尿蛋白以及肾组织MCP-1表达显著增加,经大黄素治疗后上述指标在一定程度上有所减轻.结论 糖尿病时MCP-1表达增加,大黄素可能通过抑制糖尿病大鼠肾脏MCP-1表达而达到延缓糖尿病肾病的进展.
关键词： 大黄素 糖尿病 单核细胞趋化蛋白-1 肾组织 -
Wnt通路对胰岛素样生长因子-1抑制小鼠毛细胞凋亡的作用
目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)抑制小鼠毛细胞凋亡作用的调控机制.方法 体外培养新生小鼠耳蜗基底膜.在分别含有正常对照培养波(A组)、0.5 mmol/L庆大霉素(GM)(B组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF (C组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF+5μg/mL wif(D组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF+ 10 μg/mLwif(E组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF+ 15μg/mL wif(F组)的成分中培养24 h后收集细胞及固定.应用TUNEL法观察各组耳蜗毛细胞的凋亡情况.应用Western blot及Real-time PCR法观察Caspase-3的表达情况.结果 B组耳蜗毛细胞经刺激后,细胞凋亡数量及Caspase-3 mRNA和蛋白表达较A组明显上升(P＜0.01),C组耳蜗毛细胞经IGF刺激后,细胞凋亡数量及Caspase-3mRNA和蛋白表达较B组明显下降(P＜0.01),应用Wnt阻断剂(wif)后D、E及F组细胞凋亡数量及Caspase-3 mRNA和蛋白表达较C组升高,其中F组升高显著(P＜0.01).结论 IGF可能通过激活Wnt通路抑制毛细胞凋亡.
关键词： 胰岛素样生长因子-1 Caspase-3 毛细胞 凋亡 -
油酰乙醇胺对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响
目的 研究油酰乙醇胺(OEA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用以及对p38信号通路的影响.方法 分离大鼠胸主动脉,组织贴块法培养VSMCs,AngⅡ刺激VSMCs 建立细胞增殖模型,不同浓度OEA(5,10,20 μmol/L)作用后,用溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)掺入的方法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期变化;Western-bolt法检测对P-p38和p38蛋白表达的影响.结果 与AngⅡ组比较,随着OEA浓度升高,VSMCs的增殖受到抑制、G0/G1比例显著升高,G2/M比例显著降低,且P-p38和p38蛋白的表达量降低并呈浓度依赖关系.结论 OEA对VSMCs的增殖有抑制作用,其机制可能是抑制了p38MAPK信号通路.
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不同居群的新疆虫草发酵液体外抗氧化活性的研究
目的 对不同居群的8种新疆虫草发酵液进行体外抗氧化的研究.方法 采用还原能力测定法,Fenton反应法以及邻苯三酚自氧化法研究新疆虫草发酵液体外抗氧化活性.结果 DH001虫草发酵液的还原力强,吸光度值大,达1.216;BH001虫草发酵液和BE002虫草发酵液清除羟自由基能力大,清除率分别达98.7％和95.4％;8种虫草发酵液清除超氧阴离子自由基活性均较低.结论 新疆虫草发酵液具有一定的抗氧化活性.
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舟山眼镜蛇毒蕈碱样多肽MP的部分理化性质测定
目的 对舟山眼镜蛇毒蕈碱样多肽MP成分进行纯化及部分理化性质测定.方法 采用色谱技术纯化蛇毒MP成分,质谱仪测定其相对分子质量(Mr);Edman降解法分析部分氨基酸序列,与已知成分比对;以卵磷脂为底物测定MP组分的磷脂酶A2活性;采用Bliss法测定MP对小鼠的急性毒性.结果 MP的M,为13 260,其N端16位氨基酸序列为NLYQFKNMIQCTVPSR,与已知蛇毒磷脂酶A2基本一致,并具有较强的磷脂酶A2活性;腹腔注射MP对小鼠的LD50值为14.3 mg/kg.结论 MP为一种眼镜蛇毒磷脂酶A2.
