中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae 중국실험방제학잡지
- 主管单位: 国家中医药管理局
- 主办单位: 中国中医科学院中药研究所 中华中医药学会
- 影响因子: 1.62
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1005-9903
- 国内刊号: 11-3495/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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梓醇对NF-KB活化减轻ox-LDL诱导的内皮细胞损伤的影响
目的:观察梓醇对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导EA.hy926细胞炎症因子的影响,并从核因子-κB(NF-κB)的活化角度探讨其可能的作用机制.方法:将常规培养的EA.hy926细胞随机分为空白组,梓醇组(0.5 mmol·L-1),ox-LDL组(100 mg·L-1),梓醇高、低剂量组(0.5,0.05 mmol·L-1),各药物组先孵育24 h,空白组与ox-LDL组给予空白配养基孵育24 h,孵育后加入100 mg·L-1 0x-LDL继续培养24 h.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)mRNA和蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;Hoechst细胞核染色检测细胞凋亡比率;Western blot和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测NF-κB的活化.结果:与空白组比较,梓醇保护组细胞损伤明显减轻,TNF-α,VCAM-1 mRNA及蛋白表达均显著降低,NF-κB活化明显受抑制,且呈剂量依赖性(P<0.05).结论:梓醇能够有效减轻ox-LDL诱导EA.hy926细胞炎症反应,保护EA.hy926细胞,其机制可能与其抑制NF-κB活化有关.
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和合疏养方治疗实验性大鼠肝纤维化的疗效评价
目的:探讨临床验方和合疏养方治疗四氯化碳(CCl4)致肝损伤大鼠模型肝纤维化的疗效,为临床治疗肝纤维化提供实验依据.方法:采用正交实验,SD大鼠40只,随机分为4个组,分别为正常组,模型组,阳性药物组(联苯双酯,50 mg·kg-1·d-1),合疏养方组(HHSYF,83 g·kg-1·d-1).正常组采用慢性束缚应激+过度运动+饮食失节的方法造模4周后,予蒸馏水ig至8周.模型组及联苯双酯组,HHSYF组采用慢性束缚应激+过度运动+饮食失节的方法同时予jp 30%CCl4花生油溶液造模4周后,模型组予蒸馏水ig至8周;阳性药物组予联苯双酯ig治疗至8周;HHSYF组ig 治疗至8周.检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST),y-谷氨酰转移酶(GGT)活性及肝组织中丙二醛(MDA),羟脯氨酸(HyP)的含量,并采用苏木素-伊红(HE)进行病理组织学观察.结果:与正常组比较,模型组大鼠ALT,AST,GGT活性明显升高,肝组织中MDA,HyP含量明显升高(P<0.01),病理学结果显示模型组肝组织损伤较为明显;与模型组比较,HHSYF组明显降低大鼠ALT,AST,GGT活性,明显降低肝组织中MDA,HyP含量(P<0.01),肝组织损伤明显改善.结论:和合疏养方对于改善肝功能、逆转肝纤维化具有较好的功效.
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玉屏风散加味方对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道3种细菌的影响
目的:观察不同剂量玉屏风散加味方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌的影响,为玉屏风散加味方治疗COPD提供一定的实验依据.方法:Wistar大鼠通过气管滴注脂多糖(LPS)加烟熏的方法建立COPD大鼠模型,模型成功的大鼠随机分为模型组、玉屏风散加味方高、中、低剂量组(4.644,9.288,27.864 g·kg-1·d-1),另设正常组,每组10只.利用高通量测序分析每组3种细菌的含量,苏木素-伊红(HE)观察右肺组织病理学变化.结果:与正常组比较,模型组大鼠气道流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌含量明显升高(P<0.05),右肺组织病理学观察显示模型组大鼠右肺组织慢性炎症细胞增多和少量中性粒细胞浸润;与模型组比较,玉屏风散加味方低、中剂量组的流感嗜血杆菌含量均明显降低(P<0.05),玉屏风散加味方高、中、低剂量组的肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌含量明显降低(P<0.05,P<0.01),大鼠右肺组织病变明显减轻.结论:玉屏风散加味方对COPD大鼠气道流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌含量有明显的降低作用,低剂量组对铜绿假单胞菌的作用更为明显,这可能是其治疗COPD的重要机制之一.
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扶脾柔肝方配方颗粒对肝纤维化大鼠肝组织诱导型一氧化氮合酶表达的影响
目的:观察扶脾柔肝方配方颗粒对肝纤维化大鼠肝组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,并探讨其作用机制.方法:SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、秋水仙碱(0.2 mg·kg-1)组、扶正化瘀(0.415 g·kg-1)组、扶脾柔肝方配方颗粒高、中、低剂量(80,40,20 g·kg-1)组,采用四氯化碳复合乙醇诱导大鼠肝纤维化模型,造模8周成功后,分别给予相应药物jg,每日1次,连续4周,正常组、模型组jg等体积生理盐水.第12周末,检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基酸转移酶(AST),透明质酸(HA);苏木素伊红(HE)染色观察肝组织病理情况;采用实时荧光定量PCR(Realtime PCR)及免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝组织iNOS mRNA和蛋白表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中ALT,AST,HA含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、扶正化瘀组、扶脾柔肝方低、中剂量组血清中的ALT,AST含量均明显降低(P<0.05),高剂量组ALT,AST含量显著降低(P<0.01),秋水仙碱组、扶正化瘀组、扶脾柔肝方中剂量组血清中的HA含量明显降低(P<0.05),扶脾柔肝方高剂量组HA含量显著降低(P<0.01).与模型组比较,各药物干预组肝组织内纤维化程度均有不同程度减轻(P<0.05).与正常组比较,模型组大鼠肝组织iNOS mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,各药物干预组大鼠肝组织iNOS mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),其中以扶脾柔肝方高剂量组明显.结论:扶脾柔肝方配方颗粒下调纤维化肝组织iNOS mRNA和蛋白表达水平,可能是其抗肝纤维化作用机制之一.
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加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞的影响
目的:探讨加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制.方法:不同浓度加味四君子汤含药血清处理Hep-G2细胞后,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;AnnexinV/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡率和周期;hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡形态;免疫印迹法(Western blot)检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达水平.结果:加味四君子汤含药血清呈浓度依赖性抑制肝癌Hep-G2细胞的增殖,诱导Hep-G2细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期.hoechst33342染色后,随着含药血清浓度的增加,Hep-G2细胞核显著呈碎块状致密浓染.同时,加味四君子汤含药血清能够抑制Hep-G2细胞Akt,mTOR,核糖体S6蛋白激酶(S6),真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)的磷酸化,从而上调Bcl-2相关X蛋白(Bax)和下调细胞周期蛋白(CyclinD1),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达.加味四君子汤含药血清与300 nmol·L-1的PI3 K/mTOR双重抑制剂VS-5584联合使用具有协同作用,含药血清能增强PI3K/mTOR双重抑制剂VS-5584对Hep-G2细胞中PI3 K/Akt/mTOR信号通路靶点Akt和mTOR磷酸化的抑制作用.结论:加味四君子汤含药血清能抑制Hep-G2细胞的增殖,诱导其凋亡,阻滞其于G0/G1期,其机制可能通过阻断PI3 K/Akt/mTOR信号通路而实现.
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苷泰胶囊对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用
目的:研究苷泰胶囊对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用,并探讨其相应的作用机制.方法:SD大鼠将连续8周ip CCl4成功诱导的肝纤维化大鼠随机分为模型组,阳性药组秋水仙碱(2 mg·kg-1),苷泰胶囊低、高剂量组(230,460 mg·kg-1),每组12只,另设同批次正常大鼠12只为正常组.除正常组和模型组给予等体积生理盐水外,各组均按给定剂量ig 给药,每日1次,连续4周.给药结束后处死大鼠,取血取肝.采用比色法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性水平;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定透明质酸(HA),层粘蛋白(LN),Ⅳ型胶原(CⅣ)和Ⅲ型前胶原(procollagenⅢ,PCⅢ)的含量;采用碱水解法处理肝组织后测定其羟脯氨酸(HyP)的含量;同时采用苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色法对肝组织染色,并于光学显微镜下观察比较肝脏病理学变化.结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中ALT,AST,HA,LN,CⅣ和PCⅢ的水平明显升高,肝组织中HyP的含量明显升高(P<0.01),病理学结果显示模型组肝脏病理损伤程度较为明显,肝脏中胶原沉积较多;与CCl4模型组比较,苷泰胶囊能显著降低血清中ALT,AST,HA,LN,CⅣ和PCⅢ的水平(P<0.05,P<0.01),同时可使肝组织中HyP的含量明显下降(P <0.05,P<0.01).病理学结果显示苷泰胶囊能明显改善肝脏病理损伤程度,减少肝脏中胶原沉积.结论:苷泰胶囊能够有效地减轻CCl4诱导的大鼠肝纤维化程度.
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蝙蝠葛酚性碱对大鼠肝纤维化的影响及其机制探讨
目的:观察蝙蝠葛酚性碱(PAMD)对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化的影响,并探讨其作用机制.方法:SD大鼠随机分成正常组,模型组,秋水仙碱组(1 mg·kg-1),PAMD高、中、低剂量组(25,12.5,6.25 mg· kg-1).采用40% CCl4(1mL·kg-1) ip诱导肝纤维化模型大鼠.所有大鼠给予等体积药物或生理盐水jg,持续30 d.放射免疫法检测血清透明质酸(HA),层粘连蛋白(LN),Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ型胶原(CⅣ)水平.生化分析法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)水平.酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肝脏中转化生长因子-β1(TGF-β11)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.电子显微镜观察大鼠肝组织镜下形态结构,计算肝和脾脏脏器指数.结果:与正常组比较,模型组大鼠血清HA,LN,PCⅢ,CIV,ALT和AST明显增加(P<0.05),TP和ALB明显降低(P<0.05),肝组织TGF-β1和TNF-α水平明显升高(P<0.05),肝脏病理纤维化大鼠明显加重,肝脏和脾脏脏器指数明显升高(P<0.05);与模型组比较,PAMD高、中剂量组大鼠血清HA,LN,PCⅢ,CIV,ALT和AST明显降低(P<0.05),TP和ALB明显升高(P<0.05),肝组织TGF-β1和TNF-α水平明显降低(P<0.05),肝脏病理纤维化大鼠明显减轻,肝脏和脾脏脏器指数明显降低(P<0.05).结论:PAMD能有效减轻CCl4诱导肝纤维化大鼠的肝脏损伤,降低肝纤维化程度,其机制与抑制肝脏TGF-β1和TNF-α蛋白表达有关.
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芍药汤高效液相色谱指纹图谱的建立
目的:建立芍药汤水煎液的RP-HPLC指纹图谱检测方法.方法:使用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温25℃,流速1.0 mL·min-1,波长230 nm,流动相乙腈-0.05%磷酸水溶液,以芍药苷为参照峰,评价10批芍药汤HPLC指纹图谱.结果:确定了其中13个共有峰,并对其中的3个峰进行指认,分别为芍药苷、黄芩苷、小檗碱,建立了芍药汤水煎液指纹图谱;10批芍药汤HPLC指纹图谱相似度均>0.96.结论:该法灵敏度高、稳定性和准确性良好,体现了芍药汤组分的整体特征,为芍药汤制剂质量标准的建立提供了可靠的科学依据.
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车前子及车前草中毛蕊花糖苷与异毛蕊花糖苷的含量比较
目的:分析比较车前子及车前草中毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷含量差异,为车前质量控制与临床用药提供实验依据.方法:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.1%甲酸水溶液(40:60),同时测定车前子及车前草中毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量,流速0.6 mL·min-,柱温25℃,检测波长330nm.结果:车前子与车前草中毛蕊花糖苷质量分数分别为9.70,0.32 mg·g-1,异毛蕊花糖苷质量分数分别为1.28,1.51 mg·g-1.结论:车前子中毛蕊花糖苷含量高于车前草,异毛蕊花糖苷含量低于车前草,临床应合理用药,并建议车前增加异毛蕊花糖苷为质控指标.
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基于灰色关联-TOPSIS法的干姜质量评价
目的:应用灰色关联-TOPSIS法评价不同批次和不同产地干姜的质量,并进行质量比较.方法:以不同产地和批次干姜中6-姜辣素,8-姜辣素,10-姜辣素,6-姜烯酚,二乙酰基-6-姜辣二醇的含量为评价依据,采用MATLAB编程法构建干姜的灰色关联-TOPSIS法的综合评判模型,并对不同批次和不同产地干姜质量进行评价排序.结果:综合评判模型评价的结果表明四川犍为20131205,广东阳江20140221,广东湛江20140125,安徽亳州20131226的质量较好,与干姜的传统评价结果及道地性相一致,可重复性好.结论:灰色关联-TOPSIS综合评判方法,适宜对多组分多指标的中药材质量进行综合评价,具有推广应用前景.
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基于波长优选的小柴胡颗粒黄芩苷近红外校正模型建立
目的:为提高小柴胡颗粒中黄芩苷近红外校正模型的准确性和预测精度.方法:基于模型的校正均方根误差(RMSEC)、预测均方根误差(RMSEP)、预测平均相对误差(PMRE)和模型对预测集的解释能力(Q2)参数,对比评价竞争自适应重加权法(CARS),蒙特卡洛-无信息变量消除法(MC-UVE),遗传算法(GA),子窗口重排(SPA)算法筛选和全波长变量,采用模群集群分析(MPA)+偏小二乘法(PLS)方法的建模效果.结果:校正模型准确性和预测精度:CARS> MC-UVE> GA>全波长变量> SPA;CARS算法所建立校正模型预测均方根误差为1.700 4,决定系数R2为0.908 7,在α=0.05水平经配对t检验,50个外部验证样品实测值与预测值间无显著差异.结论:CARS算法筛选波长变量有效简化模型,提高模型预测的准确性和精度,适于小柴胡颗粒中黄芩苷含量的快速、无损检测.
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银桑菊固体饮料的HPLC指纹图谱
目的:银桑菊固体饮料的质量标准,建立其HPLC指纹图谱.方法:采用HPLC法对10批银桑菊固体饮料样品进行分析,以Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.4%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长268 nm,流速1.0 mL· min-1,柱温35 ℃,进样量10 μL;利用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2.0版)标定共有峰和相似度评价.结果:建立了银桑菊固体饮料的HPLC指纹图谱,标定了20个共有峰,10批样品的相似度均>0.9,并指认了3个峰分别为绿原酸、甘草苷、木犀草苷.结论:该法操作简便可靠,所建立的HPLC指纹图谱重复性良好,可用于银桑菊固体饮料的质量评价.
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玉竹水溶性成分分离及其糖苷酶抑制活性
目的:研究玉竹中具有降血糖作用的生物碱成分并进行分离鉴定.方法:组合运用多种离子交换树脂色谱对玉竹水提物进行分离纯化,采用NMR和MS等光谱技术鉴定化合物结构;采用PNPG法和DNS法对所分离生物碱成分进行抗α-葡萄糖苷酶和抗α-淀粉酶活性筛选.结果:从玉竹水提物中分离得到8个化合物,其中2个多羟基生物碱,2个酰胺类化合物,3个氨基酸以及甜菜碱.其结构分别鉴定为1-deoxynojirimycin(1),fagomine(2),L-azetidine-2-carboxylic acid(3),l,2(S)-pyrrolidinedicarboxamide(4),(2S)-citrullinamide (5),丝氨酸(6),γ-氨基丁酸(7)和甜菜碱(8).对化合物1,2,4,5,8分别进行了α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性筛选.其中化合物1和2有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性,半数抑制浓度(IC50)分别为0.098,0.272 mol· mL-,作用效果优于阳性药阿卡波糖(IC500.493 mol· mL-).此外,化合物1对α-淀粉酶有抑制活性,IC50为0.681 mol·mL-1,但抑制活性较阿卡波糖(IC500.035 mol·mL-1)弱.结论:化合物1~8均为首次从玉竹中分离得到.化合物1和2有显著的抗α-葡萄糖苷酶活性.因此,多羟基生物碱类成分是玉竹发挥降血糖作用的药效物质基础.
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扶正抗毒丸联合HAART疗法对HIV感染ⅡB期患者氧化应激反应的影响
目的:探讨扶正抗毒丸联合高效抗反转录病毒治疗(HAART)疗法对人类免疫缺陷病毒(HIV)感染ⅡB期患者氧化应激反应的干预作用,并探讨其机制.方法:采用随机数字表法将120例患者随机分为空白组,HAART组,扶正抗毒丸+HAART组,终获得完整数据资料的患者94例,其中空白组30例,HAART组33例,扶正抗毒丸+HAART组31例,疗程均为12个月,观察扶正抗毒丸联合HAART疗法对HIV感染ⅡB期患者活性氧(ROS),核转录因子-κB (NF-κB),T淋巴细胞亚群绝对计数及病毒载量的作用.结果:治疗12个月时,扶正抗毒丸+HAART组患者ROS,NF-κB含量显著低于空白组和HAART组(P<0.05);HAART组、扶正抗毒丸+HAART组与空白组比较,能有效增加病毒载量<100 copy·mL-1的患者例数(P<0.01),减少病毒载量波动例数(P<0.01),两组比较无统计学差异;CD3+T淋巴细胞计数显示,扶正抗毒丸+HAART组与治疗前、空白组和HAART组比较明显增加(P<0.05,P<0.01);HAART组、扶正抗毒丸+HAART组患者CD4+T淋巴细胞计数与治疗前和空白组比较明显增加(P<0.05),扶正抗毒丸+HAART组CD4+T淋巴细胞计数与HAART组比较有增加的趋势.结论:扶正抗毒丸联合HAART疗法能较好的减少HIV感染ⅡB期患者氧化应激反应的发生作用和有效抑制NF-κB含量增加.同时,还能有效增加血浆病毒载量< 100 copy·mL-的患者例数,减少病毒载量波动例数和升高CD3+,CD4+T淋巴细胞计数.
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复方高山红景天口服液联合盐酸氨溴索治疗放射性肺损伤的疗效观察
目的:通过比较复方红景天联合盐酸氨溴索与单纯盐酸氨溴索在治疗放射性肺损伤的应用效果,探讨复方高山红景天口服液联合盐酸氨溴索治疗放射性肺损伤患者的临床疗效.方法:选取2014年8月-2015年8月青海大学附属医院收治的116例放射线肺损伤患者,按随机数字表法分为观察组和对照组,各58例.两组患者均给予口服盐酸氨溴索片治疗,观察组患者在此基础上加以口服复方高山红景天口服液治疗,观察两组患者放疗后,治疗4,8周转化生长因子-β1(TGF-β1),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和Karnofsky (KPS)评分的变化,及治疗前后肺功能情况以及生活质量的变化.结果:观察组患者治疗4,8周后TGF-β1,TNF-α水平均明显低于对照组(P<0.05),观察组患者治疗4,8周的KPS评分明显高于对照组(P<0.05);与治疗后对照组比较,治疗后观察组肺活量(VC),用力肺活量(FvC),1秒用力呼气容积(FEV1)和FEV1/FVC检查结果、功能领域以及总体健康状况评分明显增高,症状领域、单一条目评分明显降低(P<0.05);治疗后观察组总有效率达89.66%;对照组总有效率为60.34%,与对照组治疗后比较,观察组治疗后显效人数及总有效率明显增加,无效人数明显减少(P<0.05).结论:采用复方红景天联合盐酸氨溴索治疗放射性肺损伤可通过有效降低因放射治疗所致的血清TGF-β1,TNF-α水平升高,改善肺功能,进而起到提高临床疗效的作用,同时对患者的生活能力及生活质量的改善有显著的作用.
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腰宁汤联合麝香止痛贴膏治疗寒湿瘀阻型慢性腰肌劳损的临床评价
目的:评价腰宁汤联合麝香止痛贴膏治疗寒湿瘀阻型腰肌劳损的临床疗效,并从血液流变学、炎症反应方面探讨其作用机制.方法:采用分层、区组、随机方法将180例患者分为对照组和观察组,各90例.对照组口服双氯芬酸钠缓释片,100 mg/次,1次/d;和双氯芬酸二乙胺乳胶剂外用;观察组内服腰宁汤,1剂/d,麝香止痛贴膏外用.两组疗程均为2周,并进行4周的随访.第0,7,14和42天进行评价疼痛视觉模拟评分(VAS),进行治疗前后Oswestry功能障碍指数(ODI)和寒湿瘀阻证评分;检测治疗前后肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),血栓素B2(TXB2),6-酮前列腺素Fla(6-KetoPGFla)和血液流变学指标.结果:经Ridit分析,观察组综合临床疗效优于对照组(P<0.05);观察组在第7,14和42天VAS评分均低于对照组(P<0.01);治疗后观察组ODI指数各维度评分和总分均低于对照组(P<0.01);治疗后观察组寒湿瘀阻证评分低于对照组(P<0.01);观察组血液流变学指标,包括全血黏度(高切、低切)、血浆黏度、纤维蛋白原和血小板聚集率的改善均优于对照组(P<0.01);观察组血清TNF-α,IL-6,TXB2水平均低于对照组,6-Keto-PGF1a水平高于对照组(P<0.01).结论:腰宁汤内服联合麝香止痛贴膏外用治疗寒湿瘀阻型慢性腰肌劳损,能减轻疼痛,改善腰部功能,改善微循环障碍,减轻炎症反应,具有明显的临床疗效.
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清利活血解毒汤治疗湿热蕴结型痛风性关节炎的疗效观察
目的:观察清利活血解毒汤治疗湿热蕴结型痛风性关节炎的临床疗效,并探讨其作用机制.方法:将90例湿热蕴结型痛风性关节炎患者随机分为2组,治疗组60例,对照组30例.治疗组给予清利活血解毒汤(早晚各1次,口服)+洛索洛芬钠片(60 mg/天,口服,bid)治疗;对照组给予洛索洛芬钠片(60 mg/天,口服,bid)治疗,连续观察2周.观察服药前后两组中医证候积分、关节疼痛及肿胀症状改善时间,记录血沉(ESR),C-反应蛋白(CRP),尿酸(UA),视觉模拟评分法(VAS)疼痛评分,15 m步行时间疗效指标及血、尿常规,肝肾功安全性指标和其他不良反应.结果:治疗组在中医症状有效率、疼痛肿胀改善时间,VAS评分,UA,CRP,ESR,15 m步行时间上改善均优于对照组(P <0.05,P<0.01),且无明显不良反应.结论:清利活血解毒汤治疗湿热蕴结型痛风性关节炎能较快缓解关节红肿热痛等临床症状,改善关节活动度,同时具有降低尿酸及炎症指标作用.
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益气解毒护心汤治疗邪毒侵心型急性病毒性心肌炎的疗效分析
目的:探讨益气解毒护心汤治疗急性病毒性心肌炎(VMC)邪毒侵心证的疗效以及对血清高迁移率蛋白1(HMGB1)和核转录因子-κB(NF-κB)水平的影响.方法:将152例VMC患者参照随机数字表法分为观察组和对照组,各76例.两组均给予卧床休息等非药物治疗.对照组口服维生素C,200 mg/次,3次/d;辅酶Q10,1片/次,3次/d.观察组在对照组的基础上给予益气解毒护心汤干预,1剂/d,常规水煎煮2次,分早晚内服.疗程均为4周.两组进行治疗前后中医症状评分;检测治疗前后血清肌酸激酶(CK),肌钙蛋白I(cTnI),肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平;检测血清HMGB1和NF-κB水平.结果:观察组总有效率为92.11%,对照组为80.26%,观察组高于对照组(P<0.05).治疗后观察组心悸、心烦胸闷、发热、咽痛评分低于对照组(P<0.01).治疗后观察组CK,cTnI和CK-MB水平均显著低于对照组(P<0.01);观察组在治疗后2,4周患者血清HMGB1和NF-κB水平分别低于对照组同期水平.结论:在西医常规干预的基础上,益气解毒护心汤治疗邪毒侵心型VMC可明显改善中医症状,降低心肌酶指标水平,提高临床疗效,其作用机制可能与下调患者血清HMGB1和NF-κB水平有关.
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七叶一枝花繁育技术研究进展
七叶一枝花作为《中国药典》重楼药材的重要来源,具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊之功效,临床用于抗肿瘤、抗菌、止血、镇痛等.而七叶一枝花为多年生草本植物,繁殖率低,耗时长,从种子萌发到药用需7年以上时间,资源再生慢.由于近几年的过度采挖,七叶一枝花消耗量远超其野生资源生长量,导致市场售价随之飙升,严重威胁药材资源的正常生存和可持续利用.为解决这种资源匮乏和临床需求矛盾,发展人工繁育技术,培育七叶一枝花人工繁育品,已成为保护野生资源、满足临床需要的佳途径.通过检索七叶一枝花繁育技术相关文献,对其内容进行归纳总结,并从繁殖采种及种苗培育两方面对其进行综述,为人工繁育技术提供理论指导,同时结合种苗生长过程中相关性影响的化学成分,探讨其繁育品的种植质量.七叶一枝花人工繁育技术作为培养优质繁育品的第一步至关重要,但其后续品质的检测同等关键,本文展望未来以多学科、多角度对中药七叶一枝花人工繁育品及野生品建立品质评价体系研究,以保障中药材品质质量,为近一步开发利用七叶一枝花资源提供参考.
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半仿生提取法在中药提取中的应用
提取是中药制药工程的关键环节,直接影响着药品的质量,提取新技术的发展是中药制造工业技术升级转型的关键,关系着中药现代化的进程.作为一种新兴的提取技术,半仿生提取利用“灰思维方式”,根据中药大部分药效成分未知的特点和中药物质基础整体特征,采用模拟口服给药经胃肠道吸收和转运的过程,得到有效成分更高的活性混合物.本文总结了半仿生提取技术在中药提取中的应用,并对近年来出现的新技术(微波、超声波及酶法)辅助半仿生法在中药提取中的应用进行总结,结果表明相对于传统提取技术,半仿生提取技术具有明显的优势,应用前景良好.
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丹参临床应用中的潜在功能发掘
目的:发掘和论证丹参业已失传的潜在功能,以利临床应用.方法:通过全面梳理丹参在历代本草学中的流传情况,考察历代本草记载的丹参功用.同时,借助《普济方》数据库管理系统检索古代含丹参复方治疗病证的分布和构成,在归类基础上提炼出丹参古代整体功用,进而与2015版《中国药典》一部比较分析,发现古今功能主治的异同,发掘丹参潜在功能,结合现代药理学研究与临床应用加以论证.结果:古代本草学中丹参功效可概括为13类:活血化瘀、益气养血、宁心安神、凉血消痈、清热泻火、和血调经、安胎、祛风除湿、止痛、理气、平肝息风、止痒和壮骨.古代含丹参复方治疗病证分布和构成显示其广泛应用于治疗中风、痹病、痈疽疮疡、疥癣瘙痒、脚气、虚损等29类疾病,除与《中国药典》记载“活血祛瘀,通经止痛,清心除烦,凉血消痈.用于胸痹心痛,脘腹胁痛,癥瘕积聚,热痹疼痛,心烦不眠,月经不调,痛经经闭,疮疡肿痛”相吻合的功能主治外,丹参还应用于中风、痹病、骨痿、水肿、诸热、咳嗽、胎动不安等病证.现代药理学研究与临床应用显示丹参具有保护脑组织、调节神经递质紊乱、促进成骨细胞分裂和增值、抑菌等作用.结论:通过古今比较,及现代药理学研究与临床应用的佐证,确认平肝息风、止痉、利水消肿、壮骨、祛风除湿、清热泻火(清热解毒)、止咳、安胎为丹参的潜在功能.
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基于化学成分和药理效应分析天麻饮片一体化工艺与传统工艺
目的:比较天麻一体化加工饮片与传统加工饮片在化学成分含量和药理效应方面的差异,阐述天麻饮片一体化加工工艺的合理性.方法:以天麻素和巴利森苷A,B,C,E的含量为指标,比较2种工艺所得产品化学成分含量的差异;以戊四氮致惊厥药理模型考察天麻2种工艺生产饮片的息风止痉药理作用.结果:天麻一体化加工饮片中天麻素和巴利森苷A,B,C,E质量分数分别为0.79%,2.04%,0.91%,0.23%,0.57%,传统加工饮片中则依次为0.39%,1.12%,0.64%,0.15%,0.54%.2种工艺所得饮片均具抗惊厥作用,但一体化加工饮片的抗惊厥作用强于传统分段加工工艺的饮片.结论:与传统分段加工工艺相比,一体化加工工艺降低了天麻的生产成本,提高了生产效率,且所得饮片有效成分含量较高、药理作用较好.
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三步碱沉法制备地榆总皂苷的工艺优选
目的:通过正交试验与三步沉淀法优选地榆总皂苷的提取与纯化工艺条件.方法:采用HPLC-ELSD测定地榆皂苷-Ⅰ的含量,流动相[甲醇-乙腈(1:1)]-水梯度洗脱,蒸发光散射检测器的漂移温度100℃,气体流速3.0 L·min-1.以地榆皂苷-Ⅰ转移率为指标,通过正交试验优选地榆总皂苷的提取工艺;采用三步碱沉法,以鞣质清除率与地榆皂苷-Ⅰ含量为评价指标,通过单因素试验优选纯化工艺.结果:地榆总皂苷佳工艺条件为加8倍量70%乙醇回流提取2次,每次1.5h,提取液加10%氢氧化钠溶液调pH 12 ~ 14,静置12h,离心去沉淀,上清液用10%氢氧化钠溶液调pH 12 ~ 13,静置24 h,离心,沉淀于70℃减压干燥至干,用30倍量无水乙醇回流30 min,减压回收乙醇至有固形物析出,固形物减压干燥12h.地榆总皂苷纯度91.32%.结论:优选的地榆总皂苷提取纯化工艺路线简单、稳定,制备的地榆总皂苷得率、纯度高,适合工业化生产.
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左旋棉酚在模拟人体胃肠道环境及生物样品中的稳定性考察
目的:考察左旋棉酚在不同生理pH及不同生物介质中的体外稳定性,为该药物的制剂开发提供参考.方法:取左旋棉酚分别在不同生理(pH 1.2~8.0)的缓冲液、人工胃肠液、离体生物介质中进行孵育,利用HPLC测定不同介质中左旋棉酚的含量变化,流动相乙腈-0.3%甲酸水溶液(80:20),检测波长234 nm,考察左旋棉酚的降解情况及酶稳定性,建立其降解速率方程.结果:左旋棉酚在pH 1.2盐酸溶液、模拟人工胃液及大鼠离体胃内容物中未出现明显降解,孵育12h后降解率均<10%,左旋棉酚孵育12h后在pH6.8,7.4,8.0磷酸盐缓冲液中的降解率分别为64.7%,78.6%,84.4%,且在离体大鼠小肠、大肠内容物及肝组织匀浆中极不稳定,发生了较大程度降解,8h后分别降解81.3%,96.9%,97.3%.降解特征类似于其在不同生理pH的缓冲液中.结论:左旋棉酚在碱性环境中明显降解而在酸性环境中不易降解;在大鼠胃内容物中较稳定,而在小肠、大肠菌群及肝脏中极易降解.
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正交试验优选甘草制款冬花的炮制减毒工艺
目的:优选甘草制款冬花的炮制减毒工艺,为款冬花的炮制生产工艺提供参考.方法:以总生物碱含量为指标,甘草水煎煮次数、烘制温度及甘草用量(甘草质量/款冬花质量)为考察因素,采用正交试验对甘草制款冬花的减毒工艺进行优选,考察款冬花甘草制品中有效成分含量的变化.结果:款冬花甘草制佳减毒工艺条件为甘草用量10%,水煎煮数3次,烘制温度90℃;甘草制款冬花中总生物碱、款冬酮及醇浸出物质量分数分别为0.080 3 mg·g“,0.161%,26.31%.结论:与生品相比,款冬花甘草制品中总生物碱含量显著减少,款冬酮和醇浸出物含量增加.优选的款冬花甘草制减毒工艺稳定可行,提示甘草汁制款冬花有一定的合理性,具有实际应用意义.
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龙胆苦苷结构修饰工艺优化及产物的理化特性分析
目的:建立龙胆苦苷乙酰化结构修饰的技术工艺并考察其乙酰化产物的理化特性.方法:以反应时间、反应温度、乙酸酐与龙胆苦苷的摩尔比为考察因素,通过正交试验优选龙胆苦苷乙酰化结构修饰的技术工艺,并对显著影响因素进行单因素试验考察;通过表观油/水分配系数、稳定性试验及粉体学基本性质等的考察探讨龙胆苦苷乙酰化产物的理化特性.结果:佳乙酰化工艺为以吡啶为催化剂,乙酸酐为乙酰化剂,乙酸酐-龙胆苦苷(10:1),20℃反应12 h;乙酰化产物得率94.02%.纯化物经紫外光谱、质谱等鉴定为四乙酰化龙胆苦苷,其在水中的表观油/水分配系数(P)的lgP=1.40,P随pH增大而降低;乙酰化龙胆苦苷对高温和酸敏感、对高湿和强光不敏感、流动性欠佳.结论:龙胆苦苷的乙酰化结构修饰工艺稳定可控.其乙酰化产物体内吸收特性优于龙胆苦苷本身,可有效提高后者的生物利用度.
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夏翔教授益气活血法治疗心脑血管疾病的组方规律分析
目的:通过对夏翔教授临床医案的数据挖掘和分析,揭示夏翔教授采用益气活血法治疗心脑血管疾病的组方用药规律,为该病的临床治疗提供治法及用药参考.方法:收集并筛选夏翔教授采用益气活血法治疗心脑血管疾病的初诊医案,录入至中医传承辅助平台(V2.5版本),采用软件自带的集成数据挖掘方法,分析益气活血法与中医疾病、药物、症状之间的关系,然后选择病例数多的2个病种,进一步分析病、治法与中药之间的关联规则.结果:共入选89份处方,其中以头痛病和心悸病为主,各28例,还包括胸痹病17例、眩晕病15例和中风病1例.常见的相关症状依次为心慌、胸闷、头痛、头晕、胸痛、寐欠安、怕冷、乏力、口干、头胀、耳鸣等.89份处方中涉及220味中药,其中以具有益气活血作用的黄芪、丹参、葛根、党参、川芎等为主.头痛病和心悸病支持度分别≥18和≥15的常有中药分别为8味和11味;药对分别有21个和25个;置信度≥95%的药物组合分别有32组和15组;产生的新处方分别有8张和9张.结论:通过中医传承辅助平台在一定程度上揭示了夏翔教授采用益气活血法治疗心脑血管疾病的处方用药经验,有助于提高心脑血管疾病的中医治疗疗效.
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基于分子对接技术探讨复方丹参方多靶点治疗冠心病的作用机制
目的:阐明复方丹参方的效应物质基础和作用机制,为该复方的临床合理用药提供参考.方法:采用传统中药药理数据库(TCMSP),从复方丹参方中筛选出101个候选化合物,以血管紧张素Ⅰ转化酶(ACE),羟甲基戊二酰基辅酶A(HMGR),人热休克蛋白90激酶(HSPg0),过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPAR-γ),凝血酶(thrombin),血管内皮生长因子受体激酶Ⅱ(VEGFR2),雄激素受体(AR)及环氧合酶2(COX-2)共8个冠心病相关靶点为研究对象,采用AutoDock Vina分子对接程序探索以上化学成分和靶点的相互作用.结果:复方丹参方中丹参隐螺内酯作用于6个靶点,16个化合物能作用于2个以上的靶点,另外还有5个化合物能作用于1个靶点.结论:复方丹参方中丹参为君药,三七和冰片分别作为臣药和佐使药,对该复方的作用机制有了更好的理解.
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双黄连制剂中酚酸与黄酮类成分的含量测定及药代动力学分析
目的:建立同时测定大鼠灌服双黄连制剂后血浆中酚酸类(新绿原酸、绿原酸及隐绿原酸)与黄酮类(黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素及千层纸素A)成分的超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS),并研究其药代动力学.方法:血浆样品采用乙酸乙酯-正丁醇(1:1)萃取,流动相0.4%甲酸水溶液-[乙腈-甲醇(4:1)混合液]梯度洗脱,流速0.4 mL· min-1,采用电喷雾离子化,多反应监测离子扫描模式,选用响应较高的正离子模式.结果:建立的同时测定血浆中9种成分的UPLC-MS/MS线性良好(R2 >0.992),精密度RSD均<14.2%,准确度85.49%~114.76%,复方中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖苷、汉黄芩苷、黄芩素的药时曲线下面积AUC0-t与AUC0-∞与单味药提取物相比显著增加,而酚酸和黄酮类成分的消除速率较单味药提取液缓慢.结论:建立的UPLC-MS/MS特异、快速、准确及灵敏,可用于双黄连制剂中9种主要活性成分在大鼠体内的药代动力学研究.
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坚龙胆主要次生代谢产物及分子差异的研究
目的:通过含量测定与DNA条形码分析,探讨坚龙胆主要次生代谢产物及分子的差异.方法:采用HPLC测定不同居群坚龙胆根及根茎、茎、叶、花中主要次生代谢产物龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷及苦龙胆酯苷含量,建立其指纹图谱共有模式,用单因素方差分析对主要次生代谢产物间的差异进行评价;并采用DNA条形码技术对不同居群坚龙胆样品进行ITS2测序.结果:不同居群坚龙胆根及根茎、茎、叶、花中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷及苦龙胆酯苷含量具有极显著差异(P<0.01);同时ITS2序列结果显示不同居群坚龙胆分子差异较小.结论:不同居群坚龙胆主要次生代谢产物有一定差异,但分子间差异较小,亲缘关系较近.
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多壁碳纳米管表面甘草酸分子印迹聚合物的制备及其应用
目的:研制甘草酸为模板的固相萃取柱,并将其应用到药草中高纯度甘草酸的分离富集方面.方法:以丙烯酰胺修饰的碳纳米管为载体,甘草酸为模板,丙烯酰胺为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)为交联剂,N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为致孔剂,采用沉淀聚合技术,在碳纳米管表面成功接枝甘草酸印迹聚合材料.采用红外光谱、扫描电镜和热重分析对印迹材料的性能进行表征.结果:当功能单体为丙烯酰胺,沉淀聚合温度为60℃,致孔剂是DMF,EGDMA与溶剂比例为1:20时,能够在在碳纳米管表面印迹一层稳定、均匀的印迹材料;Scatchard模型表明,多壁碳纳米管-分子印迹聚合物(MWCNTs-MIP)对甘草酸有着不同亲和力的2种结合位点,即高结合位点的平衡常数(Kd)1.17 mmol·L-1,大表观吸附量(Qmax)741.5μg·g-1,低结合点的Kd 3.96 mmol·L-1,Qmax1 668.5 μg·g-,并且MWCNTs-MIP对甘草酸有特异性识别能力.结论:优化条件合成的分子印迹聚合物具有更好的形态结构,对目标分子具有很好的吸附效率,故作为固相萃取材料应用于药草中甘草酸的分离富集方面有一定研究价值.
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紫外光谱结合化学计量学区分不同产地川东獐牙菜
目的:分析鉴别4个产地川东獐牙菜,并建立预测模型,预测产地区分准确性.方法:光谱数据导人UVProbe2.34,比较不同产地相同部位的紫外光谱图,将原始光谱数据以及经过8点平滑、一阶求导和二阶求导后的数据导入SIMCA-P 11.5,进行主成分分析(PCA),比较三维得分图的产地鉴别效果.结果:主成分分析中以叶的原始数据以及8点平滑处理数据鉴别效果佳,主成分累计贡献率均为98.8%,其余预处理方式无法取得较好的鉴别效果可能与主成分数累计值有关(一阶求导为83.9%,二阶求导为47.3%).根部数据能将重庆、湖北的样品和湖南样品分开,但重庆和湖北的样品无法区分.建立偏小二乘判别分析(PLS-DA)模型,检测鉴别模型的可靠性,并为预测更多产地的区分提供依据.将验证集带入训练集建立的模型进行偏小二乘判别分析,能区分产地,证明该模型产地鉴别效果可行.PLS-DA中训练集的预测值和真实值相关系数为0.985,其评估均方差(RMSEE)为0.159,验证集导人训练集后其预测值与真实值的相关系数为0.927,预测均方差(RMSEP)为0.327,RMSEE与RMSEP两者相近,且都<0.500,该模型的预测可靠性高.结论:运用紫外光谱结合主成分分析和偏小二乘判别分析能够较好的鉴别不同产地川东獐牙菜,构建模型预测效果较好,加入未知产地样品也能较好区分.
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基于颜色客观化的陈皮药材鉴别
目的:引入分光测色计,将中药材性状品质这一经验指标数据化,依据获取的中药材颜色信息实现对中药材品种的鉴别,为研究中药鉴定共性技术问题提供一种新的方法及思路.方法:以陈皮为研究对象,在全国范围内收集陈皮药材,采用色度学分析方法获取陈皮颜色特征参数,通过统计分析,建立陈皮品种鉴别的数学预测模型和90%参考值范围.结果:建立了基于L*a*b*色度空间的陈皮药材品种鉴别的数学判别模型,其判别符合率为100%,双侧90%参考值范围分别为陈皮:L* (66.621 5 ~73.916 5),b*(29.3295~52.211 0);广陈皮:L*(53.950 0 ~63.260 0),b*(24.610 0 ~ 30.770 0).结论:实验证明分光测色计获取的颜色信息可实现陈皮药材品种的鉴别,采用色度学分析方法对中药品种鉴别具有一定的可行性.
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菊花、叶、茎抗氧化活性比较
目的:研究菊花、叶和茎的体外抗氧化活性,为菊花、叶、茎资源的充分利用提供科学依据.方法:以绿原酸为对照组(CHA),分为菊花水提物组(JH-S),菊花醇提物组(JH-C),菊叶水提物组(JY-S),菊叶醇提物组(JY-C),菊花茎水提物组(J J-S),菊花茎醇提物组(JJ-C),分别测定提取物的还原能力及对羟基自由基(·0H),二苯代苦味酰基自由基(DPPH·),脂自由基和超氧阴离子(02·)的清除率,研究其体外抗氧化活性.结果:菊花,叶,茎提取物和绿原酸的抗氧化作用与浓度呈正相关.菊花、叶、茎的水、醇提取物(0.20 g·L-1)和绿原酸相比,还原能力分别为2.260,2.270,2.261,2.260,2.261,2.272,2.256均无差异,且各醇提物和水提物之间也无差异;对·OH,O-2·均具较强的清除作用,且水提物的作用均好于其醇提物,尤其抗O2-·作用明显强于绿原酸清除DPPH·,脂自由基方面效果均优于水提物,菊茎醇提取物对DPPH·清除率略高于绿原酸,相同浓度下菊叶清除脂自由基作用胜于菊花.结论:菊花、叶和茎提取物均有较强的抗氧化活性,菊叶抗氧化作用与菊花相当.菊叶和茎作为天然抗氧化剂有较好的开发利用价值.
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丹参种子的生物学特性
目的:研究丹参种子的形态结构、萌发与贮藏特性,为丹参规范化栽培和种子长期贮藏提供参考.方法:形态结构研究采用体视显微镜和石蜡切片法观察种子的外观形态、解剖结构和显微结构并拍照;萌发特性研究考察丹参种子萌发的温度范围、适宜温度以及光照对种子萌发的影响;贮藏特性研究考察不同贮藏含水量和贮藏温度下种子活力的变化,从而确定优化的贮藏含水量和贮藏温度.结果:①丹参种子在15 ~35℃均萌发较好,适萌发温度为20 ~ 30℃;15/25℃,20/30℃的变化温度能有效促进种子萌发,高温下光照可抑制种子萌发;②低温贮藏效果优于室温贮藏;较高或较低的含水量会导致种子活力的快速降低,丹参种子的佳贮藏含水量为5%,贮藏温度为4℃.③丹参果实的果皮由黏液细胞层、薄壁细胞层、单层石细胞、厚壁细胞层组成.吸水后黏液细胞膨胀、破裂,释放出胶状黏液质.结论:丹参种子萌发温度范围广泛,可在大部分地区种植,育苗时可采用变温方法快速促进种子萌发,提高出苗率.含水量和贮藏温度是丹参种子贮藏中需要严格控制的重要指标,适宜贮藏方法为低温干藏.丹参种子迅速而大量吸水的特性与黏液细胞层有关,这种结构虽然有利于种子保持水分、抵抗干旱,但不利于种子贮藏.
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旴江医著《瑞竹堂经验方》探析
目的:《瑞竹堂经验方》系元代少数民族官员沙图穆苏在旴江任建昌太守期间领衔编写.该书由沙氏与当地名医共同考订中医名家方论,搜集旴江民间良方,精心选药及规范药物炮制,并经临床验证而成.但由于主编者的民族特殊性,长期以来该书一直被认为是少数民族著作.本文从作者经历、成书地域及行文过程、用药特色等方面,考评定位其为旴江医著.并从羡补且善补、治痹选良药、驻颜与美容、用法重炮制、传世有名方共5个方面,系统地探析了该书的方药特色.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
2017 | 01 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
2015 | 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |