中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae 중국실험방제학잡지
- 主管单位： 国家中医药管理局
- 主办单位： 中国中医科学院中药研究所 中华中医药学会
- 影响因子： 1.62
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1005-9903
- 国内刊号： 11-3495/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
益气养阴方及其拆方对急性髓系白血病细胞细胞凋亡及Cyt-C,Apaf-1,Smac/Diablo,AIF表达的影响
目的:研究益气养阴方及其拆方后的扶正方、祛邪方对人急性髓系白血病细胞凋亡及细胞色素C(Cytochrome C,Cyt-C),凋亡蛋白酶活化因子(apoptotic protease activating factor 1,Apaf-1),第二个线粒体衍生的半胱天冬蛋白酶激活因子(the second mitochondria-derived activator of caspase/direct IAP-blinding protein with low PI,Smac/Diablo),凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factors,AIF)表达的影响,探讨益气养阴方治疗白血病的可能作用机制.方法:采用NOD/SCID小鼠,以KG-1a细胞株建立人急性髓系白血病模型,随机分为全方组、祛邪组、扶正组和空白组,取NOD/SCID小鼠脾细胞制成细胞悬液,应用流式细胞术检测NOD/SCID小鼠细胞凋亡率;采用免疫组化法检测NOD/SCID小鼠骨髓中线粒体相关凋亡因子Cyt-C,Apaf-1,Smac/Diablo和AIF的表达.结果:用药后,用药组小鼠生存时间较空白组显著延长(P＜0.01),全方组小鼠生存时间较扶正组与祛邪组显著延长(P＜0.01),祛邪组小鼠生存时间较扶正组显著延长(P＜0.01).用药组细胞凋亡率较空白组明显升高(P＜0.01),全方组较扶正组与祛邪组显著升高(P＜0.01),祛邪组较扶正组显著升高(P＜0.01).用药组小鼠骨髓中Cyt-C,Apaf-1,Smac/Diablo,AIF的表达较空白组显著升高(P＜0.05),其中Cyt-C与Apaf-1表达显著升高(P＜0.01);全方组均高于扶正组与祛邪组(P＜0.01);祛邪组较扶正组均升高(P＜0.05),Cyt-C,Apaf-1和Smac/Diablo表达显著升高(P＜0.01).其中对于各指标的影响全方组均优于扶正组与祛邪组,祛邪组均优于扶正组.结论:益气养阴方能够提高NOD/SCID小鼠的细胞凋亡率,上调线粒体相关凋亡因子Cyt-C,Apaf-1,Smac/Diablo,AIF的表达,并诱导其凋亡,抑制白血病细胞增殖,其机制可能与线粒体凋亡通路有关.
-
甘草对芫花抗小鼠肝癌腹水作用的影响
目的:观察不同配比甘草-芫花煎剂对肝癌腹水模型小鼠的干预影响,并探讨其作用机制.方法:取昆明种雄性小鼠135只,随机分为正常组、模型组、芫花单煎组、芫花-甘草(1∶0.25,1∶0.5,1∶1,1∶2,1∶4)组和甘草单煎组.除正常组外,其他组小鼠腹腔均接种肝癌腹水瘤细胞系H22,并分别灌胃给药,正常组和模型组给予等容积生理盐水.12d后分别测量各组小鼠的腹水量、腹围和体重及肝肾指数,蛋白质免疫印迹(Western blot)法测定肾脏组织中水通道蛋白2(AQP2)和肾加压素受体(V2R)的蛋白表达,生化法测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),尿素氮(BUN)和尿肌酐(Cr)的水平.结果:与正常组比较,模型组小鼠的腹水量、腹围、体重、肝指数及血清中ALT,AST,BUN,Cr水平均显著升高(P＜0.01),肾指数显著降低(P＜0.01),AQP2,V2R蛋白的表达显著升高(P＜0.01).与模型组比较,芫花单煎组和芫花-甘草1∶0.5,1∶1和1∶2组均能显著降低小鼠的腹水量和体重(P＜0.05,P＜0.01);芫花单煎组和芫花-甘草1∶1组同时能显著降低小鼠的腹围(P＜0.05,P ＜0.01),降低AQP2,V2R蛋白的表达(P ＜0.05,P＜0.01).与芫花单煎组比较,芫花-甘草1∶1组能显著降低小鼠的腹水量、腹围和体重(P＜0.05,P＜0.01),降低AQP2,V2R的表达(P＜0.05),芫花-甘草1∶4组则使其显著升高(P＜0.05.P＜0.01).结论:不同比例甘草的配伍能增强或抵消芫花抗小鼠肝癌腹水的作用,且相关变化可能与其有效调节了肾组织内的AQP2和V2R蛋白表达有关.
-
复方石斛合剂单次给药对db/db小鼠胰岛素信号的影响
目的:探讨复方石斛合剂单次给药对db/db小鼠胰岛素信号的影响,并探讨相关的作用机制.方法:选取30只14～16周龄雄性db/db小鼠,按空腹血糖及体重随机分成模型组、中药1方组、中药2方组;另10只db/m小鼠为正常组.以复方石斛合剂1方与2方单次给药后,从整体水平观察葡萄糖耐量(OGTT)的变化;单次给药30 min与60 min后,从细胞水平观察肝细胞6-磷酸果糖激酶-1(PFK)与丙酮酸脱氢酶(PDH)活性,胰岛素受体(InsR)与Akt蛋白磷酸化水平的变化.结果:与正常组比较,模型组db/db小鼠OGTT 0,30,60,120 min的血糖水平显著升高,肝细胞PFK与PDH活性显著降低,30 min与60 min InsR与Akt蛋白表达显著降低(P＜0.01);与模型组比较,石斛合剂1方和2方单次给药均能明显降低db/db小鼠OGTT 60,120 min的血糖水平(P＜0.05,P＜0.01),改善葡萄糖耐量;石斛合剂1方和2方单次给药均增加肝细胞PFK与PDH活性,促进InsR Tyr1150/1151与Akt Thr308和Ser473磷酸化水平,呈现药物时间依赖效应(P ＜0.05,P＜0.01).结论:复方石斛合剂1方,2方分别单次给药都能提高db/db小鼠的葡萄糖耐量,增加肝细胞PFK和PDH酶活性,其机制可能与增加InsR Tyr150/1151与Akt Thr308和Ser473磷酸化,改善胰岛素信号的快速转导有关.
-
镇肝熄风汤对帕金森病大鼠易激惹程度和结膜充血及NQO-1,TH的影响
目的:观察镇肝熄风汤对帕金森病肝大鼠易激惹程度和结膜充血的影响及可能机制.方法:将105只Wistar大鼠随机分为正常组,假手术组,模型组,司来吉兰组(0.9 mg·kg-1·d-1),镇肝熄风汤低、中、高剂量组(8,16,32 g·kg-1·d-1),每组15只.采用附子汤ig联合6-羟基多巴胺单侧损毁黑质法复制帕金森病肝阳上亢型病证结合大鼠模型,灌胃4周.蛋白质免疫印迹(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测酪氨酸羟化酶(TH)和醌氧化还原酶-1(NQO-1)蛋白和mRNA表达.结果:与假手术组比较,帕金森病肝阳上亢证模型大鼠易激惹程度和结膜充血显著升高,中脑组织NQO-1蛋白和mRNA表达增加,而TH蛋白表达明显降低(P＜0.05).与帕金森病肝阳上亢证模型组比较,镇肝熄风汤组大鼠易激惹程度和结膜充血显著降低,TH蛋白表达显著增加,NQO-1蛋白和mRNA表达均明显增加(P＜0.05),而司来吉兰组大鼠易激惹程度、结膜充血和中脑组织NQO-1蛋白表达无显著性差异.结论:镇肝熄风汤能显著改善帕金森病肝阳上亢证模型大鼠易激惹程度和结膜充血,其机制可能与上调大鼠中脑组织TH和NQO-1分子表达有关.
-
补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血小板Src,Akt和p38 MAPK蛋白的影响
目的:探讨补阳还五汤预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠体内血小板活化信号通路中酪氨酸激酶(Src),蛋白激酶B(Akt)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白及其磷酸化表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、硫酸氢氯吡格雷组(7.81 mg·kg-1)和补阳还五汤高、中、低剂量组(29.69,14.84,7.42 g·kg-1).连续灌胃ig给药14 d后,大脑中动脉线栓法复制脑缺血再灌注损伤模型,并神经功能缺损评分;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测算脑梗死体积;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测血小板活化信号通路中Src,Akt和p38 MAPK蛋白及其磷酸化表达情况.结果:与模型组比较,补阳还五汤各组及硫酸氢氯吡格雷组能明显降低脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能缺损评分和脑梗死体积比(P＜0.05);补阳还五汤不同剂量明显降低Src,Akt和p38 MAPK磷酸化水平(P＜0.05);硫酸氢氯吡格雷明显降低Src和Akt磷酸化水平(P＜0.05);各组大鼠血小板Src,Akt和p38 MAPK总蛋白表达水平无统计学差异.结论:补阳还五汤预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑组织保护作用,一定程度上是发挥抗血小板活化的作用,且可能与抑制Src家族激酶,PI3K-Akt和p38 MAPK信号通路有关.
-
木瓜三萜对佐剂性关节炎大鼠关节滑膜组织中Akt,NF-κB和促炎因子的表达影响
目的:观察木瓜三萜对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠关节滑膜组织中Akt,核转录因子-κB(NF-κB)和炎症因子表达影响,在此基础上探讨其可能机制.方法:80只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、木瓜总三萜中、高剂量组(50,100 mg·kg-1),除正常组外,其余大鼠右后足跖注射弗氏佐剂造模,木瓜三萜(50,100 mg· kg-1)灌胃(ig)给药,足容积法测量致炎侧足肿胀、进行关节评分;光学显微镜观察关节滑膜病理变化;酶联免疫吸附测定(ELISA法检测大鼠关节滑膜组织中肿瘤坏死因子-α(TN F-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)含量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测关节滑膜组织中蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和人核转录因子-κB p65(NF-κB p65)表达水平.结果:与正常组比较,大鼠致炎后14 d关节肿胀度达峰值,可见模型组关节滑膜组织炎症反应,如滑膜组织增生,炎细胞浸润;关节组织中TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-8含量明显上升,p-Akt和NF-κB p65表达增多(P＜0.01);与模型组比较,木瓜三萜中、高剂量组能显著抑制AA大鼠足爪肿胀、降低多发性关节评分及改善关节滑膜组织病理变化,降低滑膜组织病理评分,降低关节滑膜组织中TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-8含量及p-Akt和NF-κB p65蛋白表达水平(P＜0.05,P＜0.01).结论:木瓜三萜具有显著的抗炎作用,抑制Akt/NF-κB信号通路激活及促炎因子生成可能是其发挥抗炎作用的重要机制之一.
-
当归-红芪超滤膜提取物对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1表达的影响
目的:研究当归-红芪超滤膜提取物对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1),Smad信号通路的调控作用,探讨其对DN大鼠的作用及产生该作用可能的机制.方法:采用一次性大剂量(60 mg· kg-1)腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立DN大鼠模型.将DN大鼠随机分为正常组、模型组、厄贝沙坦组及当归-红芪超滤膜提取物低、中、高剂量组,之后开始灌胃给药,每天1次,8周后测空腹血糖(FBG),尿素氮(BUN),血肌酐(SCr),24h尿蛋白;光镜观察肾组织结构变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠TGF-β1,Smad2/3含量;免疫组化法检测肾组织TGF-β1,Smad2/3蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测肾组织TGF-β1,Smad2/3的mRNA表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,BUN,SCr,24 h尿蛋白水平明显升高,ELISA检测大鼠TGF-β1,Smad2/3含量明显升高,肾组织病理结构异常较为明显,TGF-β1,Smad2/3蛋白量表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,当归-红芪超滤膜提取物各组均不同程度降低了DN大鼠FBG,BUN,SCr,24 h尿蛋白水平(P＜0.05);ELISA检测大鼠TGF-31,Smad2/3含量降低(P＜0.05),肾组织病理结构异常得到改善,TCF-β1,Smad2/3蛋白量表达减少(P ＜0.05,P＜0.01),TGF-β1,Smad2/3 mRNA表达减少(P ＜0.05,P＜0.01).结论:当归-红芪超滤膜提取物可改善DN大鼠肾功能病变,延缓DN慢性病理进展,其机制可能与其抑制TGF-β1/Smad信号通路有关.
-
茵陈蒿汤复方配方颗粒、单味配方颗粒和传统汤剂对四氯化碳致小鼠肝损伤模型的比较
目的:比较茵陈蒿汤复方合煎配方颗粒(合煎),单味分煎配方颗粒(分煎)和传统煎煮汤剂对四氯化碳(CCl4)造成小鼠肝损伤模型的影响.方法:90只小鼠随机分为空白组、模型组、联苯双酯滴丸组、合煎高、中、低剂量组(17.16,8.58,4.29 g·kg-1),分煎高、中剂量组(17.16,8.58 g·kg-1),传统汤剂组(4.29 g·kg-1),共9组.除空白组和模型组每日灌胃蒸馏水,其余7组预防性给药7d.第7天灌胃结束后,除空白组外,其余各组腹腔注射0.05％CCl4,建立急性肝损伤模型.18h后,眼眶取血测定各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总蛋白(TP),白蛋白(ALB)和总胆红素(TBIL)活性.取小鼠肝脏做苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理组织学变化,并取肝脏匀浆测定超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)水平,简单对比3种不同方法制备茵陈蒿汤中主要有效成分的变化.结果:合煎高、中、低剂量,分煎高、中剂量、传统汤剂均能降低CCl4致肝损伤程度.合煎高剂量组效果优于高、中剂量组和传统汤剂组(P＜0.05,P＜0.01).结论:茵陈蒿汤对CCl4致小鼠急性肝损具保护作用,合煎配方颗粒可能由于合煎过程中的各有效成分溶出率不同,效果较单味分煎配方颗粒好;与传统汤剂比较,由于煎煮工艺优化有效成分含量更高,效果更好.其保护肝脏机制可能与清除自由基,抑制脂质过氧化有关.
-
Notch1下调对三叶青黄酮抑制食管癌EC9706细胞迁移和侵袭的影响
目的:观察三叶青黄酮(Tetrastigma Hemsleyani Radix flavone,THRF)对食管癌(esophagus cancer,EC) EC9706细胞增殖、迁移、侵袭能力及Notch1的影响,探讨其抗食管癌的可能作用机制.方法:体外培养EC9706细胞,以不同终质量浓度(0.5～20 g·L-1)三叶青黄酮进行处理,未加三叶青黄酮为空白组,以MW 167处理为MW167组.采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8),检测三叶青黄酮对EC9706细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制浓度(50％ inhibitory concentration,IC50);采用细胞黏附实验,划痕修复实验,transwell小室体外侵袭实验观察EC9706细胞黏附力、迁移、侵袭能力,同时采用免疫细胞化学和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Notch1蛋白和mRNA表达的变化.结果:与空白组比较,三叶青黄酮可明显升高EC9706细胞抑制率(P＜0.05,P＜0.01),三叶青黄酮可明显降低EC9706细胞黏附率、迁移率、侵袭细胞数,Notch1阳性细胞率和mRNA表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:三叶青黄酮能明显抑制EC9706细胞增殖,降低细胞迁移和侵袭能力,与其下调Notch1有关,可能是其抗食管癌的机制之一.
-
灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注损伤相关CYP4A的作用机制
目的:研究灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注损伤相关细胞色素(cytochrome,CYP)4A1,CYP4A3,CYP4A8的作用机制.方法:采用SD雄性大鼠193只,制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,在脑缺血2h,再灌注术后立即尾静脉注射给予灯盏花素注射剂(12,6,3 mg·kg-1),每日1次,连续7d,末次给药后,断头取右脑组织,用实时荧光定量PCR法检测脑组织内的CYP基因CYP4A1,CYP4A3,CYP4A8的表达情况,用酶联反应吸附测定(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)法检测大鼠内皮型—氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)含量.结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑损伤168 h后的死亡率、脑梗死体积、行为学评分显著升高(P＜0.01),大鼠脑组织CYP4A3,CYP4A8显著上调(P＜0.01),eNOS含量显著增加(P＜0.01).与模型组比较,灯盏花素(12,6 mg· kg-1)组可降低的大鼠脑损伤168 h的死亡率、脑梗死体积(P＜0.05),降低24 h后行为学评分(P＜0.01),下调大鼠脑组织CYP4A3,CYP4A8表达和血清eNOS含量(P＜0.05,P＜0.01);灯盏花素(3 mg·kg-1)组对降低大鼠脑损伤168 h后死亡率和脑梗死体积不明显,可明显降低120 h时行为学评分(P＜0.05),显著下调CYP4A3,CYP4A8表达和脑组织eNOS含量(P＜0.o1).结论:大鼠脑缺血再灌注损伤会加重大鼠死亡率、脑梗死体积、行为学评分,上调脑组织CYP4A3,CYP4A8的表达和增加脑组织及血清eNOS的含量.灯盏花素可降低大鼠脑缺血再灌注损伤大鼠死亡率和行为学评分,可能是通过下调脑组织CYP4A3,CYP4A8的表达来改善大鼠脑缺血再灌注损伤.
-
桂枝附子汤对CIA大鼠滑膜组织中MAPK信号通路的影响
目的:探讨桂枝附子汤对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响.方法:将SD大鼠60只随机分为正常组,模型组,桂枝附子汤组(1.5,4.5,13.5 g·kg-1),甲氨喋呤组,共6组;大鼠尾根部皮下注射鸡Ⅱ型胶原(chicken type Ⅱ collagen,CC Ⅱ)乳剂制备CIA模型;自造模后第14天开始,每周观察各给药组的关节炎指数;采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测滑膜组织MAPK信号转导通路中JNK,ERK,p38蛋白及相应磷酸化蛋白p-JNK,p-ERK,p-p38的表达水平.结果:CIA大鼠的足爪肿胀度和关节炎指数第7,14,21,28,35,42天个时间点均高于正常组,在给予桂枝附子汤治疗后在第14天后CIA大鼠的足爪肿胀度和关节炎指数均明显降低.桂枝附子汤能明显改善CIA大鼠滑膜增生和炎性细胞浸润,使得炎性细胞减少.与正常组p-JNK,p-ERK,p-p38比较,CIA组中的p-JNK,p-ERK,p-p38的表达水平显著增强,两组治疗间有显著性变化(P＜0.01);用甲氨蝶呤治疗CIA大鼠,与模型组比较其p-JNK,p-ERK和p-p38表达水平显著降低,两组治疗间有显著性变化(P＜0.01);用桂枝附子汤治疗CIA大鼠,与模型组相比较其p-JNK,p-ERK,p-p38明显降低,并且呈现剂量依赖性关系.结论:桂枝附子汤可抑制CIA大鼠MAPK信号转导通路的活化,从而缓解炎症症状.
-
加味泽泻汤对NAFLD大鼠肝脏炎症信号通路相关蛋白表达的影响
目的:探讨加味泽泻汤对高脂饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型的治疗机制.方法:SPF级大鼠分为空白组、模型组、加味泽泻汤组、多烯磷脂酰胆碱组,大鼠分别以10％或45％高脂纯化饲料喂养12周构建NAFLD模型.加味泽泻汤及多烯磷脂酰胆碱治疗组分别给药4周,空白组及模型组则给予相应体积双蒸水4周.以蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测Toll样受体4(TLR4),髓样分化因子88(MyD88),核转录因子-κB p65(NF-κB p65),p38丝裂原活化蛋白酶(p38MAPK),磷酸化的p38丝裂原活化蛋白酶(p-p38),e-Jun氨基末端激酶(JNK),半胱氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)在大鼠肝脏中的表达.结果:与空白组比较,模型组TLR4,MyD88,NF-κB p65,p-p65,p38 MAPK,p-p38,JNK及Caspase-1蛋白表达明显增高(P＜0.05);而加味泽泻汤组相应蛋白的表达量较模型组均显著下降(P＜0.01).结论:在高脂饮食诱导的大鼠NAFLD模型中,加味泽泻汤通过抑制TLR4/NF-κB,MAPK信号通路相关蛋白的表达,从而抑制肝脏炎症的产生、缓解肝脏的损伤,达到治疗NAFLD的目的.
-
HPLC同时测定桑白皮中4种成分的含量
目的:建立桑白皮中绿原酸、东莨菪内酯、白藜芦醇、桑色素含量测定的方法.方法:采用EclipseSB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.01％磷酸梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,柱温30℃,检测波长285 nm.结果:绿原酸、东莨菪内酯、白藜芦醇和桑色素分别在6.4～76.8 mg·L-1(r =0.999 9),5.15～61.8 mg·L-1(r =0.999 6),1.11～13.32mg·L-1(r =0.999 6),2.76～33.12 mg·L-1(r=0.999 7)线性关系良好,平均加样回收率在98.4％～ 99.4％(RSD≤2％),供试品溶液在12h内稳定,且该方法重复性良好;通过对5批桑白皮药材的测定,结果发现河南(批号140401)样品中绿原酸、东莨菪内酯、桑色素含量均较高,湖北(批号D5090202)样品中白藜芦醇含量相对高.结论:该含量测定方法精密度高,准确度高,适合桑白皮中4种成分的含量测定.
-
GC-MS-AMDIS结合保留指数分析比较花椒与青椒挥发油的组成
目的:研究花椒与青椒挥发油组成成分,评价不同产地、不同基源花椒药材的内在质量差异,以期为花椒药材的质量标准和品质评价等提供科学依据.方法:采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,以气相色谱-质谱联用法(Gc-Ms)和自动质谱退卷积定性系统(AMDIS)结合Kov6ts保留指数(RI)定性两者的挥发油组成成分,并对数据进行分析.结果:GC-MS分析4批次花椒共定性62种化合物,含量由高到低的前5个依次为芳樟醇,乙酸芳樟酯,α-松油醇,(-)-4-萜品醇,柠檬烯.4批次青椒共定性32种化合物,含量由高到底的前5个分别为爱草脑,大根香叶烯D,柠檬烯,芳樟醇、石竹烯.结论:不同基源和不同产地的花椒药材挥发油组分均存在一定的差异,而不同基源之间的差异尤为明显.
-
北豆根药材粉末色泽与有效成分的相关性
目的:研究北豆根药材粉末色泽与4种有效成分及总生物碱含量的相关性.方法:用色差计测量北豆根药材粉末△L*,△a*,△b*和△E*值,采用HPLC法对北豆根中青藤碱、蝙蝠葛苏林碱、蝙蝠葛碱以及粉防己碱4种成分进行含量测定,并用SPSS 15.0统计软件对数据进行相关性分析.结果:明度△L*,总色差△E*均与蝙蝠葛碱含量呈极显著的相关性(P＜0.01);所有色泽指标与青藤碱、蝙蝠葛苏林碱、粉防己碱的含量均不具相关性;但色泽指标△a*,△b*,△E*与蝙蝠葛苏林碱和蝙蝠葛碱含量总和以及4种生物碱含量总和均存在显著正相关(P＜0.05).结论:北豆根粉末橙红色越深、总色差越大,蝙蝠葛苏林碱和蝙蝠葛碱含量总和越大,4种生物碱含量总和越大.
-
加味陈平汤治疗老年社区获得性肺炎患者痰湿阻肺夹瘀证的临床观察
目的:观察加味陈平汤治疗老年社区获得性肺炎患者痰湿阻肺夹瘀证患者的临床疗效及安全性,并探讨其作用机制.方法:采用随机数字表将104例老年社区获得性肺炎痰湿阻肺夹瘀证患者随机分为治疗组、对照组,各52例.治疗组患者采用常规西医治疗联合加味陈平汤,对照组患者采用单纯西医治疗,比较两组患者的临床症状体征评分、中医证候疗效、外周血炎症指标(白细胞计数、中性粒细胞数、快速C反应蛋白、血沉及降钙素原)水平、胸部CT炎症吸收情况及不良反应.结果:治疗组患者在临床症状体征评分、中医证候疗效、外周血炎症指标水平(白细胞计数、中性粒细胞数、快速C反应蛋白、血沉及降钙素原)、胸部CT炎症吸收方面显著优于对照组(P＜0.01).在试验过程中,少数患者出现轻微静脉炎、胃肠道反应和肝功能受损等药物副作用,两组不良反应率差异无统计学意义.结论:在常规西医治疗基础上,服用加味陈平汤治疗老年社区获得性肺炎痰湿阻肺夹瘀证疗效更好,值得临床推广应用.
-
乌头赤石脂汤对老年缺血性心肌病伴心力衰竭患者血清TNF-α,BNP及Hcy水平的影响
目的:探讨乌头赤石脂汤对老年缺血性心肌病伴心力衰竭患者血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),B型钠尿肽(B-type natriuretic peptide,BNP)及同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平的影响.方法:取郑州市中医院治疗的缺血性心肌病心力衰竭老年患者94例,按随机数字表法分为治疗组和对照组,对照组(47例)予以基础治疗,治疗组(47例)在基础治疗上联用乌头赤石脂汤治疗,观察并记录心室重构及心功能、血清指标、生活质量等指标,同时观察临床疗效及不良反应.结果:治疗后对照组治疗有效率(74.47％)低于治疗组(91.49％)(Jp＜0.05);与治疗前比较,两组治疗后心室重构及心功能、血清指标、生活质量均发生变化,治疗组治疗后左心室舒张末内径(left ventricular end diastolic diameter,LVEDD),左室收缩末期内径(left ventricular end systolic diameter,LVESD)指标低于对照组(P＜0.05),左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF),每分钟输出量(output per minute,CO)指标高于对照组(P＜0.05),治疗组治疗后血清BNP,肌钙蛋白Ⅰ(TroponinI,cTnI),高敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP),TNF-α,Hcy水平低于对照组(P＜0.05),治疗组治疗后生活质量改善程度优于对照组(P＜0.05);两组治疗期间无严重不良反应发生.结论:采用乌头赤石脂汤对老年缺血性心肌病伴心力衰竭疗效确切,能降低血清TNF-α,BNP及Hcy水平,提高生活质量.
-
瓦楞子炮制历史沿革及现代研究进展
通过对古代及现代医药文献进行查阅、整理、分析,总结了瓦楞子的炮制历史沿革及现代研究概况.以《历代中药炮制资料辑要》一书为线索,查阅三国至清朝时期本草原著30部,并查阅《中国药典》9部,《全国中药炮制规范》1988年版和地方中药饮片炮制规范22部,对古今文献中所收载的瓦楞子炮制方法加以归纳、总结.瓦楞子炮制历史悠久,历代的炮制方法有生品研碎、火煅、煅醋淬、煅醋煮、煅盐水煮等,目前全国各地主要沿用了煅法.现行的炮制规范中对煅制工艺和火候的表述过于广泛,缺乏定性定量指标和统一的炮制质量标准,而且现行的质控标准主要以碳酸钙的含量作为评价指标,需进一步对炮制工艺进行研究,包括煅制火候、温度、时间、煅淬次数、粉碎粒度等具体工艺参数,并比较不同炮制工艺和炮制方法对其化学成分含量的影响,以发挥瓦楞子的佳药物疗效.另外应进一步对瓦楞子中有机质类成分及某些微量元素进行研究,以增加其质控指标或方法,从根本上全面控制瓦楞子的内在质量.
-
雷公藤减毒研究进展
雷公藤为治疗类风湿性关节炎常用中药,具有清热解毒,祛风除湿,消肿止痛,杀虫止痒的功用,现代药理研究表明其具有抗炎、镇痛、抗肿瘤及免疫调节等作用,临床主要用于治疗免疫性疾病、肾脏性疾病、皮肤性疾病等,对类风湿性关节炎的疗效尤为显著.但严重的毒副作用,尤其是肝肾毒性,限制了其临床应用,成为迫切需要解决的难题,故雷公藤的减毒研究成为近年来的研究热点.本课题组主要研究雷公藤的经皮给药对其减毒增效的作用,但目前雷公藤的应用困境仍然没有得到改善,故对2006年至2016年近10年来雷公藤减毒研究的相关文献进行检索,包括传统的炮制减毒、配伍减毒和现代的制剂减毒、结构修饰减毒、生物技术减毒以及其相互的联合应用等,分析雷公藤的减毒现状和困境,对比现存减毒方式间的差异,为雷公藤减毒增效研究提供思路,促进其合理开发和临床安全应用,也为其他有毒中药的合理应用提供参考.
-
基于肠道菌群的中医健脾方剂作用机制的研究现状与思考
肠道菌群稳态在维持肠道正常生理功能、调节机体免疫以及拮抗病原微生物定植等方面具有重要的生理意义.肠道菌群与中医理论中“脾”的生理功能密切相关,肠道菌群失调和中医脾失健运互为因果.本文从脾虚证与肠道菌群失调的联系、中医健脾方剂调节肠道菌群的研究现状2个方面进行综述,阐明从脾论治有助于恢复肠道菌群的平衡稳态,以期为进一步从微生态学角度研究中医健脾方剂作用机制提供借鉴.关于中药方剂对肠道微生态影响的研究,应密切结合临床实际,充分体现疾病或是证候的临床特点,在建立成熟的证候模型或病证结合模型的基础上,利用宏基因组学、高通量测序等微生态生物学检测方法研究中药制剂对肠道微生态结构及功能的影响,明确单味中药及其有效成分对某一疾病优势肠道细菌及其基因表达的影响,为阐明中药调节肠道微生态的有效物质基础、揭示其作用本质提供依据.
-
载药蒙脱石壳聚糖纳米粒的制备及其生物学性能评价
目的:选择盐酸倍他洛尔为模型药物,制备新型镶嵌蒙脱石载体的离子交换给药系统载药蒙脱石壳聚糖纳米粒(Mt-BH/CS NPs),为新型的眼部混悬剂开发提供参考.方法:采用离子凝胶法制备Mt-BH/CS NPs,利用正交试验优化处方,选取壳聚糖质量浓度,多聚磷酸钠(TPP)浓度、壳聚糖与TPP质量比及盐酸倍他洛尔质量浓度为考察因素,考察Mt-BH/CS NPs的包封率、载药量及体外释放,通过黏附性试验和人永生化角膜上皮细胞的细胞毒性试验考察Mt-BH/CS NPs的生物学性质.结果:佳处方工艺为壳聚糖质量浓度1.5 g·L-1,TPP质量浓度1.2 g·L-1,壳聚糖-TPP(10∶1),盐酸倍他洛尔质量浓度2.0 g·L-1;Mt-BH/CS NPs平均包封率36.13％,平均载药量14.50％,10h累积释放率达82.23％.Mt-BH/CS NPs相对于盐酸倍他洛尔水溶液的人永生化角膜上皮细胞毒性较小;Mt-BH/CS NPs与黏膜混合后Zeta电位下降,表明其对黏膜有一定的黏附性.结论:Mt-BH/CS NPs载药量较高、体外释放缓慢、细胞毒性小、生物黏附性大,可望用于眼部疾病的治疗,以期改善新型给药系统的释放性能并增强与眼部的相互作用,从而提高药物的眼部生物利用度并减少不良反应.
-
活血止痛微乳凝胶剂的体外释放和透皮吸收评价
目的:研究活血止痛微乳凝胶的体外释放和透皮吸收特性,为该制剂的研发提供参考.方法:采用改良Franz扩散池装置,分别以半透膜和离体小鼠皮肤为体外模型,采用UPLC同时测定接收液和皮肤中丹皮酚、丁香酚和水杨酸甲酯的含量,流动相乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0 ～4 min,10％ ～ 90％A),检测波长280 nm,流速0.6 mL· min-1,进样量1 μL.结果:活血止痛微乳凝胶中丹皮酚、丁香酚和水杨酸甲酯在6h内的累积释放率分别为70.35％,59.40％,54.64％,释放速率分别为1.138,11.57,73.54 μg·cm-2·h-1;体外透皮试验6h累积透过率分别为40.34％,36.34％,41.44％,透过速率分别为0.657,7.127,56.04 μg·cm-2·h-1.结论:活血止痛微乳凝胶具有较好的体外释放和透皮性能,体外释放符合Higuchi方程,经皮渗透行为符合零级动力学方程.
-
当归挥发油提取工艺优化及其乳化芳香水成分分析
目的:优选当归挥发油的提取工艺,拟合其提取动力学模型方程,同时测定挥发油及芳香水的化学成分,为当归挥发油的工业化生产提供参考.方法:采用改进的挥发油提取器,应用响应面法对当归挥发油提取参数进行优化,并对其提取速率进行拟合,计算出拟合方程.采用GC-MS测定当归挥发油提取过程中轻油、重油、及其乳化芳香水的成分,找出其产生乳化的化学物质基础.结果:佳提取工艺为提取时间8.55 h,料液比1∶10,浸泡时间1.82 h;挥发油提取率(0.70±0.01)％.优工艺的动力学方程V=0.72(1-e-0 00074t)(R2=0.996 7)和ln(0.72-y)=-0.014 1t-0.349 3(R2=0.998 7).乳化芳香水成分与当归挥发油有较大的区别,尤其在当归乳化芳香水中,4-乙烯基-2-甲氧基苯酚的相对质量分数为当归挥发油的38.6倍.结论:应用响应面法优选当归挥发油提取工艺的方法可行,2种提取动力学方程可拟合其提取工艺过程,当归挥发油及其芳香水的某些成分存在较大差异.
-
关黄柏炒炭前后饮片化学成分的变化规律分析
目的:探究关黄柏炒炭前后饮片化学成分的变化规律,为关黄柏和关黄柏炭饮片的质量标准制定提供依据.方法:采用HPLC测定,流动相乙腈-0.4 mol·L-1氯化铵水溶液梯度洗脱,柱温35℃,流速1.0 mL·min-1,检测波长215 nm.分析关黄柏炒炭前后饮片化学成分组成及含量的变化,对其中7种主要化学成分进行定量分析.结果:10批关黄柏饮片中,木兰花碱、盐酸黄柏碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、黄柏内酯、黄柏酮的质量分数分别为2.468 ～ 6.783,1.947～4.197,0.209～0.506,3.049-4.557,5.869 ～13.168,5.141～7.337,1.798～4.975 mg·g-1.关黄柏炒炭后,除个别企业样品外,各化学成分含量均有减少,其中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀等生物碱类成分几乎殆尽;黄柏酮、黄柏内酯等小极性成分保存较多,9批关黄柏炭饮片中,黄柏内酯、黄柏酮的质量分数分别为3.164 ～6.483,0.281～1.614 mg·g-1.结论:关黄柏饮片炒炭后,外观性状和内在成分变化明显,关黄柏饮片的质量标准难以应用于关黄柏炭.所购关黄柏炭饮片也因此难以做到炒炭程度统一,应根据关黄柏炒炭后的成分变化规律控制炒炭程度,进一步规范关黄柏和关黄柏炭饮片的质量标准.
-
马钱子碱固体脂质纳米粒的细胞毒性及细胞摄取试验
目的:研究马钱子碱固体脂质纳米粒(brucine-loaded solid lipid nanoparticles,B-SLN)对HepG2的细胞毒性和细胞摄取情况.方法:采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测B-SLN对HepG2细胞的毒性,利用荧光显微镜定性观察细胞摄取情况,运用流式细胞仪定量检测不同条件下的细胞摄取情况.结果:马钱子碱组和B-SLN组对HepG2细胞增殖具有抑制作用,且抑制率随时间延长和药物质量浓度增加而上升.马钱子碱组48,72 h的半抑制浓度(IC50)分别为208.5,78.5 mg·L-1,B-SLN组48,72 h的IC50分别为563.3,114.9 mg·L-1;药物质量浓度在125～500 mg·L-1时,随药物质量浓度的增加,细胞摄取量由50.2％增加到71.2％;温度在4℃和37℃条件下,细胞摄取量由43％增加到55.2％;摄取时间在30～240 min时,随孵育时间的增加,细胞摄取量由9.7％增加到56.4％.结论:SLN给药系统能显著提高马钱子碱对抗癌细胞的活性,且B-SLN具有增加药物被细胞摄取的能力.
-
小儿温里止泻贴的提取和成型工艺优选
目的:优选小儿温里止泻贴超临界CO2提取工艺及基质配方,为该制剂的后续研究与开发提供参考.方法:选用L9(3 4)正交试验设计,以桂皮醛提取量为指标,考察萃取温度、压力、时间及CO2流量对小儿温里止泻贴超临界CO2流体萃取工艺的影响.以初粘性、剥离强度及内聚力为综合评价指标,通过响应面法考察聚乙烯醇、聚丙烯酸钠、甘油及羧甲基纤维素钠的用量,确定佳基质配方.通过均匀度试验考察小儿温里止泻流浸膏与空白基质相容后的均匀度.结果:小儿温里止泻贴的佳提取工艺为温度45℃,压力50 MPa,时间2.5h,流量20 kg·h-1;桂皮醛提取量1.688 mg·g-1.空白基质的佳配方为聚乙烯醇-聚丙烯酸钠-甘油-羧甲基纤维素钠(0.6∶2.5∶1.0∶1.0).该配方具有较好的初粘性、剥离强度、内聚力,均匀度为15,符合《中国药典》2015年版的规定.结论:优选的小儿温里止泻贴超临界CO2流体萃取工艺稳定可行;优选的小儿温里止泻贴基质配方简单、稳定,可推广于大生产应用.
-
不同种源射干遗传多样性与质量分析
目的:对射干遗传多样性和药材质量进行综合评价,为射干种质资源的合理利用和药材优良品种的选育提供理论依据.方法:采用ISSR分子标记法分析射干9个种源的遗传多样性,并采用HPLC法测定各种源次野鸢尾黄素的含量.结果:9个种源射干次野鸢尾黄素的质量分数为0.12％～0.36％;多态位点比率PPB为55.42％～90.36％;种源间遗传分化系数GST与基因流Nm分别为0.204 1,1.951 5.结论:射干次生代谢产物的含量与遗传多样性相关性不大,而是易受生长环境的影响,在品种选育过程中应对种质选取、栽培环境和栽培方法等进行综合考察.
-
乌头叶面微生物菌群变化特征及其与乌头霜霉病相关性
目的:以四川江油栽培乌头为研究对象,探索乌头叶面微生物菌群动态变化特征及其与乌头霜霉病的相关性.方法:收集不同病害等级的乌头霜霉病叶片,摇床震荡与超声结合的方法提取乌头叶面微生物,稀释平板计数法测定乌头叶面细菌,真菌数量.结果:乌头霜霉病发病情况与环境温度相关,患病乌头叶面细菌,真菌数量相较于健康乌头都有所增加,且叶面其他真菌数量随着病害程度的逐渐加重而呈现出较有规律的逐渐增加趋势.结论:乌头霜霉病在其生长期的3月末至5月末发病迅速,且日平均气温15 ～20℃比较适宜乌头霜霉病病原菌的生长繁殖.乌头叶面真菌数量的变化与乌头霜霉病病害程度呈正相关.
-
中药白头翁本草考证与中国白头翁属植物分类
中药白头翁用药历史悠久,早在《神农本草经》中就有记载,别名有奈何草、胡王使者、老翁花等.东汉时期,张仲景就在《伤寒杂病论》写到:“热利下重者,白头翁汤主之.”古代本草传承和记载不尽相同,只是有“近根处有白茸”或“近头部有白茸”等简单描述.通过对白头翁的本草学研究,查阅和分析历代本草文献,考证其基原及产地、功效等,并对中国白头翁属植物标本的整理、比较,结合对中国白头翁属分类研究,考证中药白头翁原植物基原,为白头翁的进一步开发利用提供依据.通过对古代本草文献考证分析,只能确定为毛茛科白头翁属Pulsatilla植物,无法确定为白头翁P.chinensis.中药白头翁全国各地用药差异很大,仅仅通过性状特征等无法鉴别其种类,药材市场上混淆品、伪品很多,严重影响人们用药安全.随着近代分子生药学DNA条形码技术的发展,它具有准确、简便、快速的特点,为鉴定植物的种类及发现新物种提供了新方法,为鉴别植物药材真伪提供了可靠依据.白头翁属间植物种类繁多,药材鉴别亦更加困难,DNA条形码技术可以解决这一问题.大量实验表明:白头翁属植物(如朝鲜白头翁、兴安白头翁等)化学成分及指标性成分与白头翁相似,是否能作为正品使用,需要结合制剂、药理等分析技术,从而更好的利用它们的药用价值.
-
基于网络药理学的“金银花-连翘”药对作用机制分析
目的:探讨“金银花-连翘”药对的功效物质基础和配伍机制.方法:从中药系统药理学分析平台(TCMSP)中寻找与金银花及连翘相关的所有化学成分,并寻找与其相关的潜在靶点,采用网络药理学的方法对金银花-连翘的功效物质和配伍机制进行研究.结果:通过口服利用度(0B),类药性(DL)条件筛选得出16个候选活性分子,相应靶点64个,相关疾病166种.其中度值较高的候选化合物分子分别是荷包牡丹碱(37),松脂素单甲基醚(30)等;度值较高的靶点蛋白为SLC6A3,DPP4,AR,NOS2,PTGS2等;度值较高的相关疾病依次是非特异性癌症、阿尔茨海默症、乳癌、痛症、心血管病、炎症等.结论:本研究结果初步验证了金银花-连翘药对的基本药理作用及其机制,并为进一步深入揭示其作用机制奠定了良好基础.
-
六味地黄汤中药成分-靶标-疾病网络分析及效应机制预测
目的:运用网络药理学技术预测六味地黄汤的化学成分、药物靶标以及可能治疗的疾病,探讨其配伍及对多种疾病“异病同治”的分子机制.方法:采用TCMSP数据库的口服生物利用度(0B)和类药性指数(DL),筛选六味地黄汤的活性成分和相关疾病,从Drugbank数据库获得药物靶标,用Cytoscape软件构建中药成分-靶标-疾病网络,并进行网络拓扑分析及靶标功能和信号通路分析.结果:在六味地黄汤507种化合物中符合OB≥30％,DL≥0.18有42种,其相关靶标有221个,并富集出九大类56种疾病,以肿瘤、心血管系统疾病以及呼吸系统疾病的网络相关度大.六味地黄汤、三补和三泻的配伍都能调节细胞凋亡、代谢、增殖、以及血管平滑肌收缩;六味地黄汤还有调控蛋白的合成修饰和分泌作用;三补能够调控离子跨膜转运、血压以及前列腺素、视黄酸的代谢等;三泻则侧重于对细胞的信号传导以及细胞的生物合成作用的影响.结论:本研究筛选出六味地黄汤活性成分42种,预测靶标221个及疾病56个,其三补三泻的配伍使药物作用产生了1+1>2的效应机制.六味地黄汤对多种疾病“异病同治”具有多靶标、多功能以及多通路的调节机制.
-
基于系统药理学方法筛选抗急性髓系白血病的中药活性分子
目的:筛选抗急性髓系白血病(AML)中药活性分子.方法:搜集治疗急白草药及化合物,通过系统药理学方法预测药物成药性质,潜在靶点以及潜在巯基消耗特性.选择口服生物利用度、类药性和巯基消耗活性较高的紫草素作为验证分子.构建潜在活性化合物-靶点、靶点-疾病网络,通过拓扑学特性筛选关键靶点及潜在活性分子.利用谷胱甘肽(glutathione,GSH)试剂盒及邻苯二甲醛(OPA)荧光法检测加入紫草素后还原型GSH含量变化.数字表达谱芯片检测紫草素100 μg·L-1处理HL-60细胞48 h后基因表达.结果:在治疗AML的40味草药的4 024个化合物中,经过口服生物利用度(0B),类药性(drug-likeness,DL)及巯基消耗特性筛选获得72个分子,后通过与AML相关靶点联系筛选出10个潜在活性化合物.实验验证紫草素消耗细胞及化学体系内GSH,预测靶点能够调控基因芯片的差异基因(100 μg·L-1,48 h).结论:本方法可用于研究中药的物质基础,有助于挖掘治疗AML中药活性分子,为抗AML药物研究提供借鉴.
-
基于网络药理学的“桔梗-甘草”药对作用机制分析
目的:探讨桔梗-甘草药对的功效物质基础和配伍机制.方法:从中药系统药理学分析平台(TCMSP)中寻找与这两味中药相关的所有化学成分.选择口服利用度(0B)≥50％,类药性(DL)≥0.18作为化合物分子的筛选条件.通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)寻找与候选化合物相关的潜在靶点,进而构建药物靶点相互作用的网络图和靶点疾病相互作用网络图.结果:通过OB,DL条件筛选,得出43个候选活性分子,相应靶点有98个,相关疾病有224种.其度值前三的候选化合物分子分别是柚皮素(48),芒柄花黄素(41),shinpterocarpin(36);度值前三的靶点蛋白为PTGS2(32),PPA R-γ(21),ERS1 (18);度值较高的相关疾病依次是非特异性癌症、炎症、痛症、乳癌、阿尔茨海默症等.结论:研究结果初步验证了该药对的基本药理学作用和相关机制,并为进一步深入探讨作用机制奠定了良好基础.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2017 | 01 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2015 | 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
