中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae 중국실험방제학잡지
- 主管单位： 国家中医药管理局
- 主办单位： 中国中医科学院中药研究所 中华中医药学会
- 影响因子： 1.62
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1005-9903
- 国内刊号： 11-3495/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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辣蓼对大肠埃希菌性腹泻小鼠肠黏膜的修复作用
目的:研究辣蓼对大肠埃希菌性腹泻小鼠的干预作用,并探讨其可能的作用机制.方法:选取160只昆明种小鼠随机分为正常组,模型组,小檗碱组,辣蓼低、中、高剂量组.除正常组外,其余各组采用腹腔注射致病性大肠埃希菌建立小鼠腹泻模型.辣蓼低、中、高剂量组分别灌胃2.5,5,7.5 g·kg-1辣蓼水提液,小檗碱组给予盐酸小檗碱0.025 g·kg-,正常组及模型组以等体积生理盐水,每天给药2次.分别于成模后的第1,2,4,6天各组随机抽取5只动物,取十二指肠,光镜下观察病理形态学变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定肠组织中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肠组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR),Smad3及Smad7 mRNA表达水平.结果:病理学观察发现辣蓼干预后可以明显减轻腹泻小鼠十二指肠黏膜损伤;ELISA结果表明,与正常组比较,模型组小鼠肠黏膜TNF-α和IL-1β的含量明显增多(P＜0.01);与模型组比较,辣蓼中、高剂量组能降低小鼠肠黏膜TNF-α和IL-1β的含量(P ＜0.05,P＜0.01).Real-time PCR结果表明,与正常组比较,模型组TGF-β1,EGFR表达量均明显升高(P ＜0.05,P＜0.01),Smad7 mRNA表达量明显降低(P＜0.05,P＜0.01),药物干预后,与模型组比较,各给药组可不同程度调节肠组织中TGF-β1,EGFR,Smad3及Smad7 mRNA表达量(P＜0.05),且呈现一定的剂量依赖关系.结论:辣蓼对大肠埃希菌性腹泻有良好的治疗作用,其作用机制可能与减少肠组织炎症因子释放、改善肠道黏膜屏障、干预TGF-β/Smads信号转导有关.
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辣椒碱对乳腺癌MCF-7细胞增殖及p21和FBI-1表达的影响
目的:观察辣椒碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及可能的分子机制.方法:设立辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)检测辣椒碱(50,100,150,200,250,300 μmol· L-1)处理MCF-7细胞24,48,72 h后的细胞活性;克隆形成实验检测辣椒碱(100,150,200 μmol·L-1)处理MCF-7细胞18 h再更换为完全培养基继续培养14 d后的克隆形成能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)处理MCF-7细胞24 h后细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21(p21)和人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子-1(FBI-1) mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(100,150,200 μmol·L-1)处理MCF-7细胞24 h后细胞中p21和FBI-1蛋白的表达水平.结果:与空白组比较,辣椒碱(50,100,150,200,250,300 μmol· L-1)在体外对MCF-7细胞活性具有明显的抑制作用(P ＜0.05,P＜0.01),并且这种抑制作用呈浓度和时间依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(100,150,200 μmol·L-1)均能显著抑制MCF-7细胞的克隆形成能力(P＜0.01);与空白组比较,辣椒碱(100,150,200 μmol·L-1)能显著上调MCF-7细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.01),下调FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.01).结论:辣椒碱干预在体外对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其上调细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平,下调细胞中FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平有关.
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体内外染色体畸变实验检测朱砂的遗传毒性
目的:用仓鼠的骨髓细胞与CHL细胞经行体内外染色体畸变实验评价朱砂的遗传毒性.方法:体内染色体畸变实验用毛足属仓鼠给予朱砂混悬液(2.0,4.0,8.0 g·kg-1)连续灌胃5d,处死前2h腹腔注射秋水仙素.处死后取骨髓细胞制备染色体.油镜下观察每只动物骨髓细胞的有丝分裂指数和100个中期分裂相细胞的畸变类型.CHL细胞染色体畸变实验用朱砂浸出液终质量浓度为6.3,12.5,25.0 g·L-1作用于CHL细胞,培养24,48 h,终止培养前4h加入秋水仙素.收获细胞,制备染色体,油镜下观察CHL细胞的200个中期分裂相细胞的畸变类型.结果:①与空白组比较,朱砂浸出液12.5,25.0 g·L-1给药组的CHL细胞染色体畸变率均升高(P＜0.05,P＜0.01),且有明显的量效关系.②仓鼠体内实验与朱砂血清给药CHL细胞的畸变率无显著性差异.结论:①在本实验中朱砂浸出液在12.5 g·L-1以上时能致体外CHL细胞染色体畸变,而朱砂混悬液在8.0 g·kg-1下仓鼠体内染色体畸变实验未出现阳性结果.②仓鼠体内染色体畸变实验可作为研究中药新药遗传毒性评价实验方法之一.
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三黄泻心汤活血化瘀优势方抗动脉粥样硬化的作用机制
目的:研究三黄泻心汤活血化瘀优势方对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响并探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制.方法:采用体外培养的HUVECs,分为空白组,ox-LDL损伤组(模型组),三黄泻心汤活血化瘀优势方15.63,31.25,62.50 mg· L-1组;用200 mg·L-1 ox-LDL孵育24 h,造成HUVECs损伤模型;细胞存活率采用噻唑蓝(MTT)比色法测定,放射免疫法检测细胞上清液中内皮素(ET-1),6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α),血栓烷素B2(TXB2)含量,半自动生化分析仪检测抗氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO)水平.采用试剂盒荧光定量法检测活性氧(ROS)含量,检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1),血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)水平酶联免疫吸附测定.细胞凋亡率及线粒体膜电位变化采用流式细胞术,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine aspartate-specific protease-3,Caspase-3),Caspase-9表达.结果:与空白组比较,模型组HUVECs存活率降低;MDA,MCP-1,ICAM-1,VCAM-1的水平升高,SOD和NO含量降低,ROS的分泌增加,细胞凋亡率升高,Bax,Caspase-3和Caspase-9的表达量增加,Bcl-2的表达量减少(P＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,不同质量浓度的三黄泻心汤活血化瘀优势方使HUVECs存活率明显上升,显著降低MDA,MCP-1,ICAM-1,VCAM-1的水平;提高SOD和NO含量,且减少ROS的分泌,降低细胞凋亡率,降低Bax,Caspase-3和Caspase-9的表达量,增加Bcl-2的表达量(P＜0.05,P＜0.01).结论:在ox-LDL诱导损伤的HUVECs模型上,三黄泻心汤活血化瘀优势方具有抑制细胞凋亡,减轻炎性反应和抗氧化的作用,可能与抗动脉粥样硬化有密切关系.
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人参皂苷Rg5通过miR-125b/STARD13/NEU1信号通路对胃癌BGC-823细胞侵袭迁移的影响
目的:研究人参皂苷Rg5对胃癌BGC-823细胞侵袭迁移的影响,并通过微小RNA-125b(microRNA-125b,miR-125b)/类固醇敏感性调节蛋白相关脂类转运体结构域13(StAR-related lipid transfer domain protein 13,STARD13)/唾液酸酶l(neuraminidase 1,NEU1)信号通路探讨人参皂苷Rg5抑制胃癌侵袭迁移的作用机制.方法:人参皂苷Rg5(12.5,25,50 μmo1·L-1)处理BGC-823细胞后,采用transwell小室实验检测人参皂苷Rg5对BGC-823细胞侵袭、迁移能力的影响,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-125b,STARD13,NEU1 mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Westem blot)检测STARD13,NEU1蛋白的表达.结果:人参皂苷Rg5(25,50 μmol· L-1)可有效抑制BGC-823细胞的侵袭、迁移.miR-125b,STARD13,NEU1 mRNA的表达,与空白组比较,人参皂苷Rg512.5 μmol· L-1组的miR-125b相对表达水平降低,STARD13,NEU1 mRNA相对表达水平升高,但无统计学差异;人参皂苷Rgs(25,50 μmobL-1)组miR-125b相对表达水平降低,STARD13,NEU1 mRNA相对表达水平增高(P＜0.01).STARD13,NEU1蛋白的表达,与空白组比较,人参皂苷Rg5(12.5,25 μmol·L-1)组的STARD13蛋白相对表达水平升高,人参皂苷Rg5(12.5 μmol·L-1)组的NEU1蛋白相对表达水平升高,但差异无统计学意义;人参皂苷Rg5(50 μmol·L-1)组的STARD13蛋白相对表达水平升高(P＜0.05),人参皂苷Rg5(25,50 μmol· L-1)组NEU1蛋白相对表达水平升高(P＜0.01).结论:人参皂苷Rg5可能通过降低miR-125b的表达,上调miR-125b靶基因STARD13,NEU1的表达,抑制胃癌BGC-823细胞的侵袭、迁移.
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糖胃安煎剂对糖尿病胃肠病变大鼠Cajal间质细胞和P物质的影响
目的:研究糖胃安煎剂对糖尿病胃肠病变大鼠胃排空的影响,并探讨其作用机制.方法:2～3月龄Wistar雄性大鼠50只,10只大鼠作为正常组,另外40只腹腔注射50 mg· kg-链脲佐菌素(STZ)复制1型糖尿病动物模型,尾静脉随机血糖≥16.9 mmol·L-者为糖尿病大鼠模型建立,随机分为糖尿病模型组,糖胃安煎剂高、中、低剂量(15,10,5 g·kg-1)组,每组10只,正常组和糖尿病模型组给予等量蒸馏水灌胃.8周后取材,采用放射性核素单光子发射断层显像技术(SPECT)测定胃排空,免疫组织化学技术观察胃肌间层Cajal间质细胞变化,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测下丘脑P物质蛋白表达.结果:与正常组比较,糖尿病模型组大鼠的胃排空显著降低,胃肌间层阳性Cajal间质细胞显著降低,下丘脑P物质蛋白表达降低(P＜0.01).与糖尿病模型组比较,糖胃安煎剂高、中剂量组的胃排空率升高,Cajal间质细胞升高,下丘脑P物质蛋白表达均升高(P ＜0.05,P＜0.01);糖胃安煎剂低剂量组的胃排空率,Cajal间质细胞,下丘脑P物质蛋白表达有升高趋势,但无统计学意义.结论:糖尿病胃肠病变大鼠胃排空降低,胃肌间层Cajal间质细胞减少,下丘脑P物质表达降低,糖胃安煎剂可能通过增加大鼠胃肌间层Cajal间质细胞,提高下丘脑P物质水平,促进糖尿病胃肠病变大鼠胃排空,改善胃肠动力和功能.
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贵州苗族药吉祥草化学成分的分离鉴定
目的:研究贵州苗药吉祥草(Reineckia camea)中的化学成分,以期能为吉祥草药理活性的阐明以及吉祥草药材的进一步开发利用提供科学依据.方法:取吉祥草全草药材20 kg,用80％乙醇加热回流提取3次,提取时间分别为2,2,1h,将3次提取液合并,滤过,减压浓缩成浸膏.浸膏加适量的蒸馏水溶解后,依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇多次萃取,各部分萃取液经减压浓缩,干燥,得石油醚部位浸膏28 g,乙酸乙酯部位浸膏305 g,正丁醇部位浸膏812 g.对乙酸乙酯和正丁醇部位浸膏,利用硅胶柱,大孔树脂,小孔树脂(MCI)柱,0DS中压柱,LH-20型羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)及Pre-HPLC等分离手段进行分离纯化,并通过理化性质,HR-ESI-MS,核磁波谱及文献数据进行结构鉴定.结果:从吉祥草的乙酸乙酯和正丁醇部位分离得到13个化合物,分别为2α,3β-dihydroxy-5α-pregn-16-en-20-one(1),(25R)-26-hydroxycholesterol(2),薯蓣皂苷元(3),β-谷甾醇(4),β-胡萝卜苷(5),异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷(6),杜鹃素(7),木犀草素(8),1,2,8-trihdroxy-5,6-dimethoxyxanthone(9),獐牙菜苦苷(10),二(2-乙基己基)邻苯二甲酸酯(11),交链孢酚单甲醚(12),N-反式阿魏酸酪酰胺(13).结论:化合物1,2,6～10,12,13均为首次从吉祥草中分离得到.
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不同果形栀子指纹图谱
目的:比较不同果形栀子药材的HPLC和IR指纹图谱,分析其差异.方法:将48批不同果形栀子药材进行产地加工,建立HPLC及IR指纹图谱,并采用相似度评价,主成分及聚类分析对福建、河南、江西六、七棱栀子进行分析.结果:HPLC指纹图谱,标定了22个共有峰,48批样品中六棱栀子相似度在0.789 ～0.896,七棱栀子的相似度在0.598 ～0.103,六、七棱栀子果实相似性较差,所含成分差异较大;运用主成分及聚类分析,将六,七棱栀子分为两大类,福建六棱与河南六棱栀子归为一类,河南七棱与江西七棱栀子归为一类;不同产地相同果形归为一类.IR指纹图谱运用聚类分析,当类间距离为1.35时,栀子药材被分为两大类,六棱栀子归为一类,七棱归为一类;当类间距离为0.875时,河南六棱与河南六棱栀子归为一类;当类间距离为0.756时,福建七棱与江西七棱栀子归为一类.结论:该研究表明不同果形栀子所含化学成分差异较大,采用中药指纹图谱分析,能全面综合评价不同果形栀子药材,为不同果形栀子药材在中医药临床应用中提供参考.
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快速溶剂萃取GC-MS分析不同枣的挥发性成分
目的:建立枣中挥发性成分分析方法,鉴定其化学成分.方法:采用快速溶剂萃取(ASE)-气质联用(GC-MS)法分析不同枣中挥发性成分,利用峰面积归一化法测定各成分的相对百分含量.比较ASE和索式提取(SE)2种提取方法对大枣枣果中挥发性成分提取效果的差异,同时考察ASE法下不同溶剂(80％乙醇和石油醚)对挥发性成分提取效率的影响,探讨了提取物甲酯化处理后对提取挥发性成分的影响,并利用主成分分析比较了9种枣中挥发性成分的差异.结果:ASE法以80％乙醇为提取剂较为高效、安全.对河北行唐大枣甲酯化处理后发现更多的挥发性成分,比未甲酯化处理多18种成分.9种枣果中不饱和脂肪酸相对含量占45.3％～70.3％,其中十六烯酸(甲酯)相对含量高,可达24.0％ ～38.3％.将9种枣果18个共有峰相对含量采用主成分分析评价不同产地的枣果品质,9种枣果得到有效区分,其中武邑马牙枣品质佳,其次为武邑小枣、香河小枣和武邑大枣.结论:不同地区、不同品种枣果挥发性成分存在一定的差异性.该实验可为开发枣资源提供参考依据.
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多花黄精化学成分分离鉴定
目的:对多花黄精根茎的正丁醇和二氯甲烷部位的化学成分进行分离,并对所得化合物进行结构鉴定.方法:多花黄精的干燥根茎经江西建昌帮传统炮制方法一炆法炮制,60℃烘干,粉碎,70％乙醇浸泡1h,加热回流提取2次,滤过,提取液合并浓缩,依次用两倍体积的二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇溶液分别萃取3次,萃取液分别减压浓缩至干,得二氯甲烷萃取部分、乙酸乙酯萃取部分和正丁醇萃取部分.用大孔吸附树脂,反复硅胶柱,LH-20型羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20),YMC-HPLC制备柱等技术对多花黄精根茎的正丁醇和二氯甲烷部位进行分离纯化,根据化合物的理化常数测定及波谱数据分析鉴定化合物结构.结果:从多花黄精根茎的正丁醇和二氯甲烷萃取部位中分离得到14个化合物,分别鉴定为(25S)spirostan-5-en-12-one-3-O-D-glucopyranosyl-(1→2)-O-[β-D-xylopyranosyl(1→3)]-O-β-D-glucopyranosyl(1→4)-β-D-galactopyranoside(1),(25S) spirostan-5-en-12-one-3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)]-O-β-D-glucopyranosyl-(1 →4)-β-D-galactopyranoside(2),邻苯二甲酸二丁酯(3),胡萝卜苷(4),β-谷甾醇(5),hypofuran B(6),(25R)-3-β-hydroxyspirost-5-en-12-one(7),(+)-medioresinol(8),黄精碱A(9),5-羟甲基糠醛(10),5-羟基麦芽酚(11),2-(4-羟苯基)乙醇(12),1H-吲哚-3-甲醛(13),黄精碱B(14).结论:化合物4,5,9,14为首次从多花黄精中分离得到,化合物6,8,12,13为首次从黄精属植物中分离得到.该研究为多花黄精综合开发及天然植物药理活性研究提供化学依据和物质参考.
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瓜蒌红花甘草汤对肝经郁热型带状疱疹患者炎症因子和T淋巴细胞亚群的影响
目的:探讨瓜萎红花甘草汤治疗肝经郁热型带状疱疹患者的临床疗效及对炎症因子和T淋巴细胞亚群的影响.方法:选取本院皮肤科就诊的肝经郁热型带状疱疹患者162例,按照随机数字表法将患者分为对照组和治疗组,对照组采用常规治疗口服阿昔洛韦片和甲钴胺胶囊,治疗组在对照组的基础上给予瓜蒌红花甘草汤治疗,治疗两周后,观察患者临床疗效并检测治疗前后炎症因子和T淋巴细胞亚群水平的变化情况.随访6个月,观察患者后遗神经痛(PHN)的发生情况.结果:治疗后,治疗组临床有效率明显高于对照组(P＜0.05).治疗组患者止疱时间、结痂时间、脱痂时间、疼痛缓解时间均明显短于对照组(P＜0.05).治疗第7,14天时患者疼痛视觉模拟评分(VAS)明显低于本组治疗前(P＜0.05),且治疗组明显低于对照组(P＜0.05).随访6个月,治疗组患者PHN发生率低于对照组(P＜0.05).治疗后,治疗组患者血清白细胞介素(IL)-4,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α和CD8+水平较本组治疗前降低,且低于对照组(P＜0.05);而CD4+和CD4+/CD8+水平较本组治疗前升高,且高于对照组(P＜0.05).结论:瓜蒌红花甘草汤通过增强肝经郁热型带状疱疹患者免疫功能及抑制炎症反应,来减轻患者疼痛,从而提高临床疗效.
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益肾骨康方联合奥施康定治疗中重度癌性躯体痛的有效性及安全性的临床观察
目的:观察益肾骨康方联合奥施康定(盐酸羟考酮缓释片)治疗癌性躯体痛患者的临床疗效及安全性.方法:本临床观察采用随机、对照、双盲的研究方法,将2015年1月至2017年5月就诊于望京医院肿瘤科符合纳入标准的100例中重度癌性躯体痛患者,随机分为治疗组和对照组,各50例,两组患者第1周给予奥施康定,第2周治疗组给予奥施康定加益肾骨康方汤剂,对照组给予奥施康定加安慰剂,每日1剂,分2次口服,连续治疗7d,通过观察两组疗效、治疗前后体力状况(KPS)评分、奥施康定用量及不良反应发生情况,评价益肾骨康方治疗癌性躯体痛的临床疗效及安全性.结果:治疗后,益肾骨康方治疗组总有效率为94％,显效率为70％,对照组总有效率为88％,显效率为40％,治疗组疗效优于对照组(P＜0.01),且治疗组在缓解中度疼痛疗效方面优于对照组(P＜0.01);治疗后两组KPS评分较本组治疗前均提高,且治疗组高于对照组(P＜0.05),治疗期间在奥施康定用量方面,治疗组少于对照组(P＜0.05),治疗组不良反应发生情况低于对照组(P＜0.05).结论:益肾骨康方可降低中重度癌性躯体痛患者疼痛,提高患者体力状况评分,提高生活质量,减少奥施康定用量,且在一定程度上改善因大量使用阿片类药物的引起的不良反应.益肾骨康方治疗癌性躯体痛疗效确切,不良反应少,值得进一步临床推广及研究.
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济川煎对老年慢性功能性便秘患者胃肠功能、血清肠神经递质及肠道菌群的影响
目的:探讨老年慢性功能性便秘(CFC)患者应用济川煎治疗的临床效果.方法:选取本院2016年2月至2018年2月收治的118例CFC老年患者,采用随机数字表法均分为两组.对照组(59例)予以琥珀酸普芦卡必利片治疗,观察组(59例)在此基础上加用济川煎治疗.所有患者均治疗1个月.对比两组临床疗效,治疗前后胃肠功能指标、肠神经递质[一氧化氮(NO),5-羟色胺(5-HT),P物质(SP)]和肠道菌群水平变化,不良反应发生情况.结果:治疗1个月后,观察组总有效率93.2％ (55/59),较对照组的78.0％(46/59)明显升高(P＜0.05).两组治疗后全胃肠排出率和胃排空率较本组治疗前均明显增加(P＜0.05),且观察组较对照组增高更明显(P＜0.05).与本组治疗前相比,两组治疗后血清NO含量均明显减少(P＜0.05),血清SP,5-HT水平均明显升高(P＜0.05);且观察组较对照组改善更明显(P＜0.05).两组治疗后肠道厌氧菌群乳杆菌、双歧杆菌数量较本组治疗前均明显增加(P＜0.05),需氧菌群酵母菌、肠杆菌数量较本组治疗前均明显降低(P＜0.05);且观察组较对照组改善更明显(P＜0.05).与本组治疗前比较,治疗后两组患者排便症状(大便性状、排便间隔、排便困难、排便不尽)评分均明显降低(P＜0.05);与对照组比较,观察组患者排便症状评分下降更明显(P＜0.05);与对照组[3.4％(2/59)]相比,观察组不良反应率为6.8％(4/59),差异无统计学意义.结论:CFC老年患者应用济川煎辅助治疗能明显缓解患者症状,增强胃肠功能,调控肠神经递质表达水平,维持肠道菌群稳态,疗效明显,安全性高.
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小柴胡汤加味治疗亚急性甲状腺炎46例临床观察
目的:观察小柴胡汤加味治疗亚急性甲状腺炎(subacute thyroiditis,SAT)的临床疗效、复发率及安全性.方法:将符合要求的90例SAT患者随机分为治疗组(46例)及对照组(44例),治疗组给予小柴胡汤加连翘汤剂口服,1剂/d,对照组给予醋酸泼尼松口服,疗程12周.观察两组患者临床疗效、疼痛的减轻、消失时间、热退时间、复发率及不良事件、远期甲减发生率.结果:与本组治疗前比较,治疗组与对照组治疗后2周血沉均显著下降(P＜0.01),治疗组血沉略高于对照组,组间比较无统计学差异,12周后两组血沉与本组治疗前比较均显著下降(P＜0.01),治疗组血沉与对照组比较明显下降(P＜0.05);治疗组疼痛减轻时间高于对照组(P＜0.05);疼痛消失时间短于对照组,但无统计学差异,治疗组退热时间略低于对照组,组间比较无统计学差异,治疗组临床总有效率97.83％,高于对照组的83.33％ (P ＜0.05).治疗组不良事件发生率2.17％,略低于对照组6.82％,但组间比较无统计学差异;疗程结束后6月,治疗组复发率2.17％,低于对照组的14.29％(P＜0.05);治疗组亚临床甲减发生率4.35％,略低于对照组的9.52％,组间比较无统计学差异.结论:小柴胡汤加味连翘治疗SAT与醋酸泼尼松相比疗效显著,依从性好、复发率低、安全性高.
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补阳还五汤合八珍汤治疗糖尿病肌萎缩的疗效及其对患者血糖、胰岛功能、神经传导功能、血清相关因子的影响
目的:通过观察补阳还五汤合八珍汤联合抗阻有氧运动对糖尿病肌萎缩的血糖、胰岛功能、神经传导功能及血清血管内皮生长因子(VEGF),神经生长因子(NGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),炎性因子的影响,探讨其疗效及机制.方法:78例糖尿病肌萎缩患者按照随机数字表法随机分为对照组和观察组,各39例.在常规治疗基础上,对照组加用抗阻有氧运动,观察组联合补阳还五汤合八珍汤与抗阻有氧运动.疗程3个月.评价两组的临床疗效,测定并比较两组治疗前后血糖、神经电生理检查、胰岛素抵抗及血清VEGF,bFGF,NGF,炎性因子水平.结果:观察组的症状评分有效率为97.4％,体质量改善有效率为94.9％,均优于对照组的74.4％,76.9％ (P ＜0.05).治疗后两组的正中神经及腓总神经的运动神经传导速度(MCV)与正中神经及腓肠神经的感觉神经传导速度(SCV)均较本组治疗前增快(P＜0.05),且观察组优于对照组(P＜0.05).治疗后两组早餐后2h血糖(2 hPBG),糖化血红蛋白(HbA1c)均较本组治疗前明显下降(P＜0.05).治疗后两组胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),白细胞介素(IL)-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均较本组治疗前明显降低,观察组的胰岛素敏感指数(ISI)较本组治疗前明显升高(P＜0.05);且治疗后观察组的HOMA-IR,IL-6,TNF-α水平明显低于对照组(P＜0.05).治疗后两组的VEGF,NGF,bFGF水平明显升高(P＜0.05),且观察组高于对照组(P＜0.05).结论:补阳还五汤合八珍汤联合抗阻有氧运动能更好的改善糖尿病肌萎缩患者的血糖水平,改善胰岛素抵抗,减轻临床症状,其机制可能与改善机体的炎症状态,提高VEGF,NGF,bFGF水平有关.
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当归四逆汤加减熏洗对痉挛型脑瘫患儿运动功能康复的疗效观察
目的:观察当归四逆汤加减熏洗对痉挛型脑瘫患儿运动功能康复的疗效,对促-抗炎因子的调节作用和血液流变学的影响.方法:将108例患儿采用SAS软件生成,随机按1∶1比例分为对照组和观察组各54例.对照组参照《中国脑性瘫痪康复指南》以康复训练为主,采用Bohath疗法和Vojta疗法,40 min/次,1次/d,6次/周,休息1d.观察组在对照组康复治疗的基础上,给予当归四逆汤加减熏洗,30 min/次,1次/d,6次/周,休息1d.两组疗程均为连续治疗6周.进行治疗前后粗大运动功能测试(GMFM)和精细运动能力测试;痉挛程度采用改良Ashworth量表(MAS)和临床痉挛指数(CSI),于治疗前后各评价1次;检测治疗前后肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)和IL-10水平及血液流变学指标.结果:治疗后观察组患儿GMFM量表的A,B,C3个功能区评分和GMFM总分均高于对照组(P＜0.01);观察组患儿FMFM量表B,C,D,E功能区评分和FMFM分值均高于对照组(P＜0.01);观察组息儿MAS分级轻于对照组(Z =2.465,P＜0.05);观察组患儿CSI分级轻于对照组(Z=1.975,P＜0.05);观察组患儿TNF-α,IL-6水平均低于对照组,IL-10水平高于对照组(P＜0.01);观察组息儿全血黏度(高切、低切)、血浆黏度、纤维蛋白原、血小板聚集率均低于对照组(P＜0.01).结论:在Bohath和Vojta康复技能训练的基础上,采用当归四逆汤加减熏洗治疗痉挛型脑瘫可进一步提高患儿的粗大运动功能和精细运动功能,提高肌力,减轻痉挛程度,并具有调节促-抗炎性反应体系和改善血液流变作用.
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乳宁颗粒对乳腺增生伴乳痛患者内分泌激素和血管生成因子的影响
目的:观察乳宁颗粒治疗肝郁痰凝型乳腺增生伴乳痛患者的疗效,探讨其对患者孕酮(P),雌二醇(E2),催乳素(PRL),黄体生成素(LH),卵泡刺激素(FSH)水平及血管生成因子血管生成素-2(Ang-2),缺氧诱导因子-1α(H1F-1α),血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平的影响.方法:选则女性乳腺增生症患者122例,随机按数字表法分为治疗组和对照组各61例.两组患者均口服逍遥丸,3次/d,8丸/次.对照组口服枸橼酸他莫昔芬片,20 mg/次,2次/d.治疗组在对照组治疗的基础上服用乳宁颗粒,1袋/次,3次/d.两组患者均连续观察8周.比较两组患者乳腺增生症状评分,McGill疼痛问卷表(SF-MPQ)疼痛评分、肝郁痰凝证症状评分及临床疗效比较.检测两组血清内分泌激素P,E2,PRL,LH,FSH水平及Ang-2,HIF-1α,VEGF和bFGF水平.结果:治疗后,治疗组患者乳房肿块硬度、乳腺肿块大小评分及视觉模拟量表评分(VAS),现有疼痛强度(PPI),疼痛分级指数(PRI)评分均明显低于对照组(P＜0.01);治疗后,治疗组患者肝郁痰凝证症状(善郁易怒、胸闷胁胀、失眠多梦、心烦口苦)评分均明显低于对照组(P＜0.01);治疗组患者的临床总有效率为98.31％,明显高于对照组86.89％ (x2 =4.319,P＜0.05);治疗组治疗后血清内分泌激素E2,PRL和LH水平均明显低于对照组,P和FSH水平均明显高于对照组(P＜0.01);治疗后,治疗组患者的血清血管生成因子Ang-2,HIF-1α,VEGF和bFGF水平均明显低于对照组(P＜0.01).结论:治疗组在对照组治疗的基础上,加服乳宁颗粒,对治疗肝郁痰凝型乳腺增生伴乳痛均有明显疗效,调节患者体内的内分泌激素(P,E2,PRL,LH,FSH水平)和血管生成因子(Ang-2,HIF-1α,VEGF和bFGF)水平可能与其疗效有关.
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益气活血法抗心肌缺血再灌注损伤的作用机制
心肌缺血再灌注后常易引发心律失常、心功能下降、心肌坏死等一系列损伤,严重影响了治疗效果.因此,深入研究心肌缺血再灌注损伤的病理机制和防治策略是目前的研究热点和难点.心肌缺血再灌注损伤的机制研究目前主要集中在心肌能量代谢障碍、氧化应激、钙超载、线粒体损伤、炎症、细胞凋亡等方面,这些病理过程又存在复杂的相互影响、相互促进关系,使临床防治较困难.现代西医药物因作用靶点单一、不良反应多限制了其防治效果,而中医药具有多信号通路、多靶点等优势,对心血管疾病的预防和治疗均有显著效果.心肌缺血再灌注损伤在中国传统医学中被归于胸痹范畴,益气活血法是其主要治则,在临床上运用广泛.国内外实验表明,益气活血类中药对心肌缺血再灌注损伤的多条病理机制有干预作用,能明显改善心肌损伤、减少心肌细胞炎性浸润,其作用机制包括对抗氧化应激、抑制钙超载、减轻线粒体损伤、改善心肌能量代谢障碍、对抗炎症、减少细胞凋亡等.益气活血法抗再灌注损伤的作用效果优于单用益气类或活血类中药,具有协同作用.但目前多数机制研究都集中于中药单体活性成分,对益气活血法成方的研究较少.本文就国内外益气活血中药及益气活血法防治心肌再灌注损伤的实验研究进行整理,从单体、药对、组方3个层面进行综述,以期为临床应用益气活血法抗心肌缺血再灌注损伤提供理论依据.
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中药DNA条形码分子鉴定技术的应用与展望
中药材品种广泛,存在多基原的情况,质量差异较大,使临床用药安全性和有效性难以得到保证.因传统中药鉴定方法的局限性,对准确鉴别多基原中药材带来了一定的挑战.为了保证中药临床用药安全有效可控,中药鉴定学已成为重要的研究课题之一,也是当前中医药事业急需解决的关键技术要求.DNA基因鉴别是从基因层面对中药材进行快速、准确的鉴定,包括DNA分子标记法、核酸探针杂交法和DNA条形码技术,其中DNA条形码技术应用为广泛.DNA条形码是利用标准的DNA片段对物种进行鉴定的技术,2015年版《中国药典》收载了DNA条形码技术指导原则,建立了动物类采用细胞色素C氧化酶亚基KCOI)序列为主,转录间隔区间(ITS)2为辅;植物类采用ITS2/ITS为主,叶绿体psbA-tmH为辅的中药材鉴定体系.该技术的广泛应用为中药鉴别提供更高效快速的方法,并且有效地应用于多基原中药材的鉴别中,使中药品种混乱现象得到极大改观.文章首先对DNA条形码技术的原理、目的及意义、标准片段的选择进行介绍,着重阐述该技术在中药鉴定中的应用以及存在的局限性,并提出展望,以期为中药材的鉴定研究提供参考.
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植物挥发油成分分析及抗假丝酵母菌活性的研究进展
侵袭性真菌感染是造成目前临床真菌感染的发病率和死亡率逐年上升的重要原因,其中以假丝酵母菌感染尤为严重.近年来主要的抗真菌药物均发现一定程度的毒副作用,由于临床上抗真菌药物的广泛使用造成耐药性日趋严重,因此迫切需要寻找安全有效的新型抗真菌药物.天然植物成分尤其是植物挥发油多具有抗菌消炎、解热镇痛、抗病毒等多种生物活性,其凭借来源广、低毒、广谱、作用途径多样化等优点成为了抗真菌药物研究开发的热点.植物挥发油的抗假丝酵母菌活性与其中成分及含量紧密相关.该文综述了近年来不同科属的植物挥发油的成分分析及抗假丝酵母菌活性研究,系统归纳总结了唇形科、樟科、桃金娘科等植物挥发油的提取、分析及抗假丝酵母菌活性的研究方法和结果,并对目前的研究方向进行了展望,以期为今后植物挥发油的成分分析和活性研究提供方向,为植物挥发油开发成为新的抗假丝酵母菌药物奠定理论基础,为真菌耐药问题造成的临床难题提供新的解决方案.
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基于丹参药材内在质量与外观色泽相关性分析探索传统鉴定经验“色红者佳”的科学性
目的:探究丹参药材指标成分及浸出物含量与外观色泽的相关性.方法:采用HPLC对18批丹参药材中有效成分(丹酚酸B和丹参酮类成分)的含量进行测定,按2015年版《中国药典》收录的方法对丹参药材的浸出物进行测定,使用色差仪测定丹参粉末甲醇溶液的色度值,在此基础上,分别对有效成分、浸出物含量和色度进行相关性研究.结果:丹参中有效成分含量越高,浸出物含量越高,a*(红绿分量值)越大,外观红色越深,药材质量越好;有效成分含量越低,浸出物含量越低,a*越小,外观红色越浅,药材质量越差.结论:通过丹参内在质量与外观质量关联度分析,确立了一种可用于判断丹参质量的简便方法,验证了传统鉴别经验“色红者佳”的科学性.
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广陈皮的外观颜色客观量化及其陈化年份判别模型的建立
目的:依据色度分析原理对广陈皮外观颜色进行客观量化研究,为广陈皮的陈化年份鉴别建立新方法.方法:采用色彩色差计对广陈皮外观颜色进行客观量化研究.采用非参数检验、秩相关检验法和判别分析等统计学方法对陈化年份与L*(明度值),a*(红绿分量值),b*(黄蓝分量值)之间的相关性进行分析.结果:不同年份广陈皮的色度值有显著性差异,且L*,a*,b*与陈化年份之间分别存在线性相关关系.建立了基于L*,a*,b*的广陈皮陈化年份的数学判别模型,陈化年份=-43.637L* +5.351a* +42.430b*+30.790.结论:建立的客观量化方法稳定可行,为广陈皮的陈化年份鉴别提供了一种客观量化方法,可避免因传统人为鉴别方法所带来的误差.
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白芍饮片炒制前后物质基础的变化规律分析
目的:基于HPLC特征图谱和主要成分的含量测定探讨白芍炒制前后饮片物质基础的变化规律.方法:采用RP-HPLC,选择ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm),乙腈(A)-0.05％磷酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱(0～5 min,5％～9％A;5 ～25 min,9％～17％A;25～30 min,17％ ～22％ A;30～35 min,22％A;35～50 min,22％ ～40％A;50～60 min,40％ A),流速1.0mL·min-1,柱温30 ℃,进样量10μL,检测波长254 nm,建立白芍及炒白芍饮片特征图谱表征方法;同时对没食子酸等6种成分进行定量分析(检测波长230 nm).以乙腈-0.05％磷酸水溶液(18:82)为流动相等度洗脱,同时测定1,2,3,4,6-五没食子酰基葡萄糖与苯甲酸的含量.结果:白芍与炒白芍饮片特征图谱中均标示出12个特征峰,并归属了其中8个特征峰.白芍炒制后单萜苷类成分芍药苷与芍药内酯苷质量分数分别降低了6％和7％,鞣质类成分含量显著增加,没食子酸和1,2,3,4,6-五没食子酰基葡萄糖、苯甲酸的质量分数分别增加了28％,26％,53％,其余成分的含量均无明显变化.结论:白芍炒制前后特征图谱及主要成分含量均有一定差异,本文所建立的特征图谱及含量测定方法为白芍和炒白芍饮片质量评价标准的制定提供了参考,为进一步完善二者的质量评价体系奠定了基础.
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附子配伍甘草后对附子生物碱类成分大鼠在体肠吸收特性的影响
目的:研究附子-甘草配伍前后附子中6种生物碱类成分的大鼠在体肠吸收特征.方法:采用大鼠在体肠灌注模型,以紫外分光光度法测定酚红质量浓度,利用LC-MS测定灌注液中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱的质量浓度,分别研究附子单煎液、附子-甘草合煎液、附子-甘草合并液3种配伍方式对上述6种生物碱类成分肠吸收的影响.结果:与附子单煎液相比,苯甲酰乌头原碱在附子-甘草合煎液、附子-甘草合并液中的吸收速率常数(Ka)和单位时间吸收率(A)呈下降趋势;苯甲酰新乌头原碱在附子-甘草合煎液、附子单煎液中的Ka和A相比附子-甘草合并液有所减少;附子-甘草合煎液中次乌头碱的Ka和A相比附子单煎液呈下降趋势,附子-甘草合并液中次乌头碱的Ka和A相比附子单煎液均呈升高趋势,附子-甘草合煎液中苯甲酰次乌头原碱、乌头碱和新乌头碱的吸收相比附子单煎液中均有所降低.结论:附子配伍甘草后6种乌头碱类成分在大鼠十二指肠中的吸收均有一定程度的降低,为阐释“附子得甘草而后缓”的配伍理论提供了实验依据.
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雷公藤配伍白芍对雷公藤提取物透皮吸收的影响
目的:考察雷公藤与白芍配伍后对雷公藤甲素和2种生物碱类成分(雷公藤吉碱、雷公藤次碱)透皮吸收的影响,从经皮转运的角度探讨雷公藤与白芍配伍减毒的机制.方法:采用改良Franz扩散池,以小鼠离体腹部皮肤为透皮屏障,以20％乙醇生理盐水为接收介质,通过HPLC测定接收液中雷公藤甲素(流动相乙腈-水梯度洗脱,检测波长220 nm)和雷公藤吉碱、雷公藤次碱[流动相乙腈-0.1％磷酸水溶液(57∶43),检测波长230 nm]的含量,计算其累积渗透量和稳态透皮速率等渗透动力学参数.结果:与雷公藤乳膏相比,雷公藤-白芍配伍乳膏均能降低雷公藤吉碱、雷公藤次碱的累积通过量,但对雷公藤甲素的累积透过量无影响;其中雷公藤-白芍以比例1∶2和1∶3配伍的乳膏中雷公藤吉碱和雷公藤次碱的24 h累积透过量呈明显的降低趋势.结论:雷公藤与白芍配伍经皮给药能降低毒性成分的透过量,同时不影响主要活性物质雷公藤甲素的透过量,从而达到了减毒增效的作用.
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基于均匀设计法评价五味子与杂色蛤配伍组合的保肝作用
目的:筛选并优化五味子与杂色蛤配伍比例,并考察其对小鼠肝损伤的保护作用.方法:采用均匀设计,以小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力为指标,考察五味子与杂色蛤不同配比对四氯化碳(CC14)肝损伤小鼠的保护作用,通过SAS 9.3软件拟合曲线,得到佳配比,选取佳配比下的不同剂量,分别通过小鼠CCl4急性肝损伤模型和酒精性急性肝损伤模型进行验证试验.结果:五味子与杂色蛤配伍组均能显著降低血清中AST和ALT活力,经回归分析可知AST和ALT活力随五味子剂量的增加先降低后升高,随杂色蛤剂量增加而降低,但两者未见交互作用.确定五味子与杂色蛤佳配伍剂量分别为0.30,0.57 g·kg-1,即配比为1∶1.9;验证试验结果表明该比例下五味子与杂色蛤的配伍组保肝效果显著且优于二者单用组.结论:五味与杂色蛤配伍后具有保肝作用,为杂色蛤资源的开发与利用提供了实验依据.
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基于代谢组学分析不同蒸制次数熟地黄中糖类成分的变化规律
目的:基于代谢组学技术研究不同蒸制次数的熟地黄中糖类成分的变化规律.方法:收集采用传统方法加工的第1蒸至第9蒸熟地黄样品,分别对其水提液进行1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生及LC-MS测定.采用SIMCA-P 13.0软件进行主成分分析(PCA)和正交偏小二乘法-判别分析(OPLS-DA),得到差异标记物,通过多级质谱离子碎片及对照品比较对差异标记物进行鉴定.结果:经OPLS-DA共鉴定了6种糖类化合物,分别为甘露三糖、蜜二糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖;其中甘露三糖和蜜二糖逐渐降低,在第9蒸熟地黄中相对峰面积低,分别为0.60和0.52;阿拉伯糖逐渐升高,在第9蒸熟地黄中相对峰面积达到4.74;甘露糖先升高后降低,其相对峰面积在第5蒸熟地黄中高,达3.33;而葡萄糖和半乳糖基本上处于稳定状态.PCA结果显示第1蒸至第9蒸熟地黄沿着PC1轴逐渐改变,糖类代谢物发生着显著变化.结论:不同蒸制次数的熟地黄样品中糖类成分差异较大,可为九蒸九晒熟地黄的质量评价提供实验依据.
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快速PCR方法在山药真伪鉴别中的应用
目的:采用快速聚合酶链式反应(PCR)方法建立快速、准确、有效的山药药材真伪分子鉴定方法.方法:收集不同地区山药正品及其混伪品材料,对所有样品进行总DNA的提取,通过对山药及其混淆品DNA条形码rbcL片段进行同源对比分析,根据鉴别位点,设计中药山药的鉴别引物,引物序列为Sy89:5'-AAGGACGATGCTACCACATCGACAC-3',Sy90:5'-ATCCCAATAGGGGACGGCCA-3'.采用2步法进行PCR扩增,并对PCR反应体系和反应程序影响因素进行考察,从而对山药进行真伪鉴别.结果:通过对影响PCR退火温度、退火时间、变性时间、循环次数等因素进行反应程序的优化,并对不同Mix进行考查,获得了山药快速特异性PCR反应程序.PCR扩增反应液为50 μL,包括Premix TaqTM 25 μL,上、下游引物各1.5 μL,DNA模板1.5 μL,加无菌双蒸水至50μL.PCR扩增程序为98℃预变性1 min,98℃变性10 s,68℃复性15 s,30个循环,72℃后延伸30 s.以1％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物在250 bp附近处有一清晰条带,而混淆品无条带.结论:快速特异性PCR方法可以简单快速鉴别山药的真伪,为实现中药材分子鉴别的现场运用提供技术支撑.
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滇龙胆3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因克隆、表达及分析
目的:从药用植物滇龙胆中克隆得到3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl CoAreductase,HMGR)基因的cDNA全长,构建原核表达载体使其在大肠埃希菌中表达,对其进行定量表达并进行生物信息学分析.方法:利用PCR扩增克隆得到滇龙胆HMGR基因cDNA全长.构建pEASY-E1-HMGR表达载体,IPTG诱导表达.利用生物信息学方法分析克隆到的cDNA序列并预测结构和功能.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分析滇龙胆根、茎、叶在4个不同发育时期的HMGR表达情况.结果:克隆出两组HMGR基因,其中一组HMGR cDNA全长1 747 bp,开放阅读框长1 697 bp,编码565个氨基酸,定名为GRHMGR-1;另一组HMGR cDNA全长1 731 bp,开放阅读框长1 572 bp,编码523个氨基酸,定名为GRHMGR-2.SDS-PAGE显示重组质粒成功表达目的蛋白.Blastp发现,GRHMGR-1,GRHMGR-2与同属植物黄龙胆、秦艽的亲缘关系为相近.结构分析显示都含有2个HMG-CoA结合位点,2个NADPH结合位点,预测都定位于内质网上.HMGR在滇龙胆根、茎、叶这4个不同发育期均有表达,表达量高的是叶.结论:首次从滇龙胆中克隆到可能编码HMGR酶的基因,可为深入探讨滇龙胆龙胆苦苷生物合成奠定基础.
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法薏苡仁饮片专家共识(2017)
法薏苡仁饮片属于樟帮中药炮制特色产品,是按照中药炮制学理论,经过浸制、蒸制和炒制等数种复制后所得的薏苡仁炮制品种,其性由凉转微温,具有较好的健脾祛湿等效果.法薏苡仁饮片临床应用广泛,包括内科和外科等,可用于治疗风湿性和类风湿性关节炎、功能性消化不良、皮肤病、消化道肿瘤等.为进一步提高临床医生对法薏苡仁饮片的认识,更好的指导临床应用,本课题组联合相关专家共同制定了法薏苡仁中药饮片专家共识,以指导临床医生和患者正确认识并合理使用法薏苡仁饮片,以推进地方特色中药饮片的发展.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2017 | 01 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2015 | 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
