中华检验医学杂志
Chinese Journal of Laboratory Medicine 중화검험의학잡지
- 主管单位: 中华医学检验杂志
- 主办单位: 中国科学技术协会
- 影响因子: 1.40
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 11-4452/R
- 国内刊号: 韩锟
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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建立依赖型特异性核苷酸的乙型肝炎病毒基因分型方法
目的建立乙型肝炎病毒(HBV)基因型的新分型方法. 方法对HBV全基因序列和S基因片段序列,分别建立系统进化树作基因分型;同时,利用S基因片段序列中基因型特异性核苷酸,建立一种较为简单的基因分型方法.结果 S基因区进化树与全基因进化树在基因族的分布上基本相似.在S基因区,基因型A在核苷酸(nt)451位有型特异核苷酸T;基因型B在nt321位有A,nt324位有T,nt345位有G,nt408位有G;基因型C在nt293位有A,nt294位有C,nt491位有A;基因型D在nt290位有A;基因型E在nt619位有A;基因型F在nt287位有C,nt288位有T,nt294位有G,nt337位有T;基因型G在nt290位有G,nt306位有T,nt347位有T,nt481位有G.对18例基因型B和基因型C分子进化树进行分析,所得的基因型结果与S基因型特异核苷酸方法相同. 结论我们建立的一种依赖基因型特异性核苷酸的HBV基因分型方法,经分子进化树分析证明方法可靠.
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耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达
目的为耐核糖核酸酶(RNase)的RNA标准品和质控品的表达制备提供1个通用载体平台.方法将MS2噬菌体基因组中成熟酶蛋白和包膜蛋白基因编码序列的1.7 kb cDNA目的片段,用Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ酶切后,用于相同内切酶酶切的表达载体质粒pET28b中,并在T4 DNA连接酶的存在下连接,构建一新的表达载体pI NCCL,再转化BL21-DE3 E.Coli进行原核表达. 结果成功构建出新的表达载体pI NCCL,经原核表达为耐RNase的病毒样颗粒. 结论本研究得到的pI NCCL表达载体及原核表达系统,可作为1个耐RNase的RNA标准品与质控品的构建和制备表达通用载体平台,以促进有关标准品和质控品的研究.
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一种快速定量检测炭疽杆菌方法的建立
目的建立一种快速、准确、特异定量检测炭疽杆菌的方法.方法根据复合探针荧光定量分析原理,以炭疽杆菌染色体rpoB基因为靶序列,设计合成引物和探针,对炭疽杆菌进行实时定量聚合酶链反应(PCR)检测,并探讨荧光探针与淬灭探针用量及比例、镁离子浓度、淬灭探针长度对定量结果的影响.结果本法适条件:荧光探针浓度300 nmol/L、荧光探针与淬灭探针的比例为1/2,镁离子浓度为3 mmol/L,淬灭探针长15个核苷酸,该法检测炭疽杆菌的灵敏度达103拷贝,能特异区分炭疽杆菌与其他蜡样杆菌. 结论复合探针荧光定量PCR技术能够快速准确、特异、敏感地对炭疽杆菌进行定量分析,可为临床诊断提供帮助.
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多重聚合酶链反应鉴别单核细胞增生李斯特菌的研究
目的建立一种快速有效地鉴定李斯特菌属和鉴别单核细胞增生李斯特菌(Lm)的方法. 方法以具有李斯特菌种、属特异性的iap基因和Lm特异的溶血素基因(hlyA)为靶目标,分别设计双重聚合酶链反应(PCR)和三重PCR鉴别李斯特菌,并比较2种PCR方法的特异性. 结果双重和三重PCR方法检测李斯特菌属和Lm标准株,均具有良好的特异性:进行三重PCR检测,可出现3个条带,其中2条为Lm的特征性条带(700,420 bp),另1条为其他李斯特菌的iap基因片段(1 200 bp),但是双重PCR不能鉴别部分Lm食品分离株,而三重PCR则可以鉴别. 结论建立的三重PCR法可用于李斯特菌属细菌特异性鉴定和混合培养物中Lm的特异性鉴别.
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检测尿脱落细胞中微小染色体维持蛋白5基因表达对膀胱癌的意义
目的探讨微小染色体维持蛋白5(MCM5)在尿脱落细胞中的表达,以检测膀胱癌细胞,为临床早期发现,术后和复发监测,探讨方便、快捷的方法.方法收集尿脱落细胞,膀胱癌组织和正常膀胱内皮组织,提取总RNA,逆转录-巢式聚合酶链反应,免疫组化,检测微小染色体维持蛋白5 mRNA表达水平.结果在膀胱癌30例尿脱落细胞中MCM5阳性率93.3%,其他泌尿系疾病25例MCM5阳性率13.3%,健康志愿者5名MCM5阳性率0%.膀胱癌组织中MCM5基因表达量在1、2、3级间差异均有非常显著意义(P<0.01).结论 MCM5基因检测可以作为早期诊断、术后和复发监测膀胱癌的标志基因.
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提高乙型肝炎病毒P基因区聚合酶链反应检测阳性率的策略
目的提高乙型肝炎病毒(HBV)DNA P基因区聚合酶链反应(PCR)检测的阳性率.方法采用优化PCR反应条件,降低退火温度以及采用3′末端碱基游移兼并引物,减少引物与模板引物结合区的错配对PCR的影响等多种方法,对常规PCR 检测HBV DNA P基因区阴性的病人血清,再进行PCR检测.结果通过降低退火温度及减少3′末端错配,PCR检测阳性率由81.7%(67/82)增加至92.7%(76/82, P<0.05). 结论综合采用优化PCR反应条件,降低退火温度和采用3′末端碱基游移兼并引物等方法,可提高基因高突变区PCR检测阳性率.
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电化学发光技术检测尿中角蛋白19片段的意义
目的检测膀胱癌患者尿液中细胞角蛋白19片段(cytokeratin 19 fragment, CK19,Cyfra21-1)的水平,探讨CK19片段与膀胱癌的关系.方法应用电化学发光免疫分析技术(ECLIA),对45份膀胱癌患者尿液中CK19片段含量进行测定,并与正常对照组和泌尿系良性疾病组及其他肿瘤组进行对照分析.结果膀胱癌组尿CK19平均值为(122.00±12.60) μg/L ,明显高于正常对照组(1.97±0.88) μg/L和泌尿道良性疾病组[尿路感染组(6.70±2.42) μg/L、肾炎组(3.40±1.41) μg/L、前列腺炎组(1.68±0.54) μg/L]及其他肿瘤组(4.10±1.80) μg/L,差异具显著性意义(P<0.01).以3.9 ng/ml为临界值,尿CK19对膀胱癌的敏感性为93.3%,特异性为82.7%,阴性预测值高达97.7%.结论尿液中CK19片段含量可作为膀胱癌的辅助诊断指标,因其具有灵敏、快速、无痛性的优点,适用于膀胱癌的筛查和术后复发的监控.
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检测拉米夫定耐药位点基因芯片的研制及其应用初探
目的研发检测拉米夫定耐药的基因芯片进行临床拉米夫定致乙型肝炎病毒(HBV)耐药相关基因突变的监测.方法 (1)将HBV YMDD区4个突变位点为靶的16条寡核苷酸探针,用GMS 417芯片点样仪固定在经特殊处理的玻片上.待检HBV突变相关的核酸经过聚合酶链反应(PCR)扩增,及用Cy5标记的三磷酸脱氧胞苷进行荧光标记,再通过与基因芯片杂交,严谨洗涤,将非突变的标记片段洗脱后,将芯片在Gene TAC LS IV扫描仪下进行扫描,计算机解读.(2)应用PCR定点突变技术构建Leu515Met, Met539Ile, Met539Val和V542I 4位点和4位点的单一突变质粒,并将芯片检测结果与测序结果对照,以鉴定其特异性.同时,用血清标本和质粒的重复检测,测定其重复性,并对50份拉米夫定治疗血清和慢性HBV感染患者血清进行检测.结果我们研制的芯片能同时特异性地检测耐药相关单一或多位点突变.其检测与测序的符合率98%.重复率达96%~100%.结论本研究制作的4位点基因芯片,既可检测乙型肝炎拉米夫定耐药相关单一碱基突变,亦可一次有效检出4个位点的突变,且具有快速、高特异性和可重复性,检测结果可靠的优点.
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DNA芯片检测肝组织及血清中乙型肝炎病毒DNA的临床研究
目的研究DNA芯片检测乙型肝炎和肝硬化患者肝组织及血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的应用价值.方法用点样仪将聚合酶链反应(PCR)扩增的HBV DNA探针制成基因芯片.对15例慢性乙型肝炎病人的血清和肝活检组织,99例乙型肝炎后肝硬化肝组织,分别用基因芯片、原位分子杂交、免疫组织化学和雅培试剂检测HBV DNA、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg).结果用基因芯片对15份HBsAg、HBeAg阳性的乙型肝炎患者血清进行检测,HBV DNA均阳性,阳性率符合率为100%;15份肝活检组织标本,免疫组化法检测HBcAg阳性15例,原位分子杂交法和基因芯片检测HBV DNA均阳性14例,阳性率93%.99份肝炎后肝硬化患者肝组织标本,HBcAg阳性67份,HBV DNA阳性53份,基因芯片检测HBV DNA阳性46份,阳性率分别为69%、88%.32例HBcAg、HBV DNA阴性的肝组织中,基因芯片检测HBV DNA均为阴性.结论肝炎基因诊断芯片可检测肝组织及血清中HBV DNA,诊断准确率高,假阳性率低.
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乳胶结合试验快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌
目的评价乳胶结合试验检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的试验方法. 方法收集81株金黄色葡萄球菌临床分离株,通过药敏试验将其分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和对甲氧西林敏感的金葡菌(MSSA),应用乳胶结合试验和基因扩增分别检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a)和mecA基因. 结果 33株mecA基因扩增阳性菌株中的28株PBP2a检测呈阳性,5株为阴性,46株MSSA中,mecA基因扩增及PBP2a检测全部为阴性.与聚合酶链反应检测mecA基因相比,乳胶结合试验检测MRSA的特异性和敏感性分别为100%和91.3%(74/81). 结论乳胶结合试验是一种简便、快速、准确地检测MRSA的方法,适于在普通临床微生物实验室开展.
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中国人群血管紧张素转换酶基因与血管紧张素Ⅱ -1型受体基因 A1166-C单核苷酸多态性分析
目的研究血管紧张素转换酶(ACE)基因Alu插入(Ⅰ)/缺失(D)多态性与血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)基因A1166-C 单核苷酸多态性(SNP )在中国人群中的分布状态. 方法采用聚合酶链反应(PCR)及PCR -限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对中国人群ACE基因Alu Ⅰ/D多态性和AT1R基因A1166-C SNP频率进行分析比较. 结果中国人群的ACE基因各基因型频率Ⅱ型37.0%,ID型40.5%,DD型22.5%;I,D各等位基因型频率分别为57.3%,42.7%.AT1R基因A1166-C SNP频率分布:AA型76.5%, AC型23.4%, CC型0.1%;等位基因频率A 88.2%, C型11.8%.结论中国人群ACE基因Alu I/D与AT1R基因A1166-C的 SNP频率的分布有明显的种族差异.
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人体位改变对32项生化指标影响的研究
目的探索不同体位对生化指标的影响.方法 107名志愿者,经交叉同体配对设计,分冬、春、夏3批,抽坐、卧两种姿势同一部位的血液,其中19名分别抽站、坐15 min、卧15 min、30 min、再坐15 min标本,在自动生化分析仪上配对分析32项指标.结果以卧位为基线与坐位相比,25项生化检测结果差异有非常显著意义(P<0.001),3项差异有显著意义(P<0.05),从卧位到立位结果逐渐升高,依次为卧位<坐位<立位,平均升高11.49%,高升55.39%.卧位后坐15 min,各指标可回复到原坐位的94%以上,季节、年龄与体位改变无关,与性别有关,无机磷(IP)、尿酸(UA)、肌酐(Cre)、葡萄糖(Glu)差异无显著意义(P>0.05).结论体位改变能引起28项生化指标的显著生理变异,与蛋白质相关的项目变异尤为显著,致使正常边缘数值出现异常结果.提示在分析实验数据时不要忽视体位因素,以免引起误导.
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努力规范肝脏疾病的免疫学诊断
病毒性肝炎和非病毒性肝脏疾病诊断和监测是目前临床面临的重要问题,不断提高肝脏疾病免疫学诊断的质量,可为临床提供必要的诊断和监测指标,也有助于规范临床检测和诊疗工作.
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快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的应用评价
快速、准确地筛选高危病人成为医院内有效控制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的关键,目前,临床上对macA基因以及其编码PBP2a进行检测是有效的方法.我们将PBP2a胶乳法和mecA基因探针法与PCR检测法进行了比较,并评价了它们的可靠性和临床应用价值,报道如下.
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鲍曼不动杆菌喹诺酮耐药决定区基因突变的研究
随着喹诺酮类药物的广泛应用,鲍曼不动杆菌对其敏感性逐渐降低[1].本研究对临床分离的鲍曼不动杆菌喹诺酮耐药决定区的gyrA和parC基因突变情况进行了分析,报告如下.
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脑脊髓液中肺炎链球菌耐药性的检测
我们从脑脊液中分离到45株肺炎链球菌,采用苯唑西林纸片扩散法和琼脂稀释法测定了肺炎链球菌对青霉素等10种抗生素药物的耐药情况。报道如下。
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聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术在乙型肝炎病毒基因分型中的应用
目前乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分型方法有4种,即全基因测序[1], 表面抗原基因(S基因)序列分析[2],聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因分型[3-6] ,单克隆抗体酶联免疫吸附试验基因分型法[7].而PCR-RFLP方法是较成熟、准确、简单的方法,本研究用分析基因库软件和PCR-RFLP技术及Lindh等[3]基因分型方法对广州地区乙型肝炎无症状携带者(AsC)和患儿的基因型进行研究.
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结核分枝杆菌IS6110单拷贝菌株的流行病学研究
采用RFLP(restriction fragment length polymorphism)技术,利用结核分枝杆菌插入序列(insertion sequence,IS)IS6110中的片段为探针,可在结核分枝杆菌的DNA水平上进行鉴定和分型,有利于流行病学调查如结核病的暴发流行、在社区中的传播及 MDR菌株的传播等.但有些菌株,尤其是亚洲地区流行的部分结核分枝杆菌含有较少的IS6110拷贝,甚至不含IS6110拷贝,对于这些菌株不能用IS6110-RFLP分型的方法分析.本研究即发现1株IS6110零拷贝株和1株IS6110单拷贝株.
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嗜麦芽窄食单胞菌在重症病房的流行
嗜麦芽窄食单胞菌(S.ma)为条件致病菌和医院感染菌[1].我们采用简易快速的三管法和API方法对临床分离的34株S.ma进行鉴定,并采用肠杆菌科基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行DNA分型.
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酶免疫竞争一步法检测抗乙型肝炎病毒核心抗体的影响因素探讨
乙型肝炎病毒(HBV)e抗体(抗-HBe)是观察乙型肝炎大三阳疗效和传染性强弱的指标之一.以往我们使用酶免疫竞争(EIA)二步法检测抗-HBe[1],反应时间相对较长.而近几年普遍使用EIA一步法检测抗-HBe,操作简便,反应时间仅需30 min,但易出现HBVe抗原(HBeAg)、抗-HBe同时阳性或同时阴性,对此我们进行了研究.
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自身抗体检查在自身免疫性肝病诊断中的应用
自身免疫性肝病是一组病因和发病机理尚不完全清楚、但多认为和自身免疫有关的肝脏疾病,临床常见的主要有自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)及原发性硬化性胆管炎(PSC).这3种疾病在病理组织学变化、临床表现、血液生化及自身抗体方面均有各自的特点,前者主要表现为肝细胞炎症坏死、后二者主要表现为肝内胆汁淤积.实验室检查特别是自身抗体检查对这些疾病的诊断有重要意义,本文仅简要介绍其新进展.
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如何解释新生儿中单项乙型肝炎病毒e肮原阳性结果?
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如何做好免疫检测工作和开展新的项目?
关键词: 免疫 -
为什么要选用要求标本1∶1 000倍稀释的抗乙型肝炎核心抗原IgM试剂盒?
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如何解释抗HDV-IgM的结果与乙型肝炎病毒表面抗原间的关系?
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临床诊断检测中有哪些主要类别的单克隆抗体?
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单克隆抗体酶免疫方法检测乙型肝炎病毒基因型的特点是什么?
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检测乙型肝炎病毒基因型的分子杂交方法有何特点?
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环丙沙星耐药的产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌gyrA基因突变研究
环丙沙星耐药的产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌(ESBLs-Eco)喹诺酮作用靶位酶gyrA基因变化状况鲜有报道.
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神经元特异性烯醇化酶对中枢神经系统感染诊断价值的研究
神经元特异性烯醇化酶(NSE)是存在于神经细胞中的一种糖酵解酶,神经细胞受损后,随细胞崩解而进入脑脊液或血液中,脑脊液或血清中NSE升高是神经细胞损伤的重要标志[1].我们用电化学发光免疫法检测化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎和病毒性脑膜炎患儿脑脊液NSE含量,并探讨NSE在中枢神经系统感染诊断中的应用价值.
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血培养检出细菌的变迁及耐药性分析
我们总结了1997~2001年我院血培养检出菌情况,探讨5年来感染菌种构成比变化规律以及患者病区分布情况,并统计分析了近年血培养常见检出菌耐药性情况,以供临床治疗参考.
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流式细胞术检测磺胺甲基异唑依赖性抗血小板抗体试验方法的建立
药物诱导的血小板减少性紫癜是临床药物应用中经常出现的副作用,表现为血小板减少,药物依赖性抗血小板抗体形成,骨髓巨核细胞正常或增加.100多种药物可以引起血小板减少性紫癜,包括奎尼丁、奎宁、青霉素、肝素、阿司匹林、先锋拉啶、利福平、磺胺甲基异恶唑、庆大霉素、地高辛、万古霉素、卡吗西平及某些中草药等.1943年首次报道磺胺类药物引起的血小板减少性紫癜,由于以往检测方法不敏感,磺胺类药物难溶于水等原因,导致药物依赖性抗血小板抗体只在几个病例得到证实.本研究报告了流式细胞术检测磺胺甲基异唑(SMZ)依赖性抗血小板抗体的佳检测条件.
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健康儿童血清透明质酸水平
血清透明质酸(HA)是诊断肝纤维化、肝硬化的一个有意义的血清学标志物[1],但目前国内尚无儿童正常值的资料,为将HA检测方法用于儿童肝硬化、肝纤维化的早期诊断,我们对0~7岁健康儿童血清HA水平进行了系统观察.
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慢性乙型肝炎的抗病毒治疗和耐药株监测
慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的全球性疾病,严重危害人类健康和生活质量.目前慢性乙型肝炎的治疗主要有α干扰素和拉米夫定(Lamivudine),α干扰素为非特异性抗病毒药物,且有免疫调节作用;拉米夫定为抗病毒药物,是一种双脱氧核苷类似物,吸收后在体内代谢成为拉米夫定三磷酸化物(3TC-TP).
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流式细胞仪单平台技术调查成年人外周血T淋巴细胞亚群绝对计数参考范围
根据淋巴细胞的生物学功能和细胞表面抗原表达,可以将人类淋巴细胞分为T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞.
年 | 期数 |
2019 | 02 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 03 04 05 06 |
1998 | 01 02 03 04 05 06 |