寡核苷酸微阵列法检测高血压患者血管紧张素转换酶基因多态性的临床应用

目的了解血管紧张素转换酶(ACE)的单核苷酸多态性(SNPs)与高血压的相关性.方法制备一种基于PCR-序列特异寡核苷酸探针法(PCR-SSOP)原理的寡核苷酸阵列芯片,用于对ACE基因的多个SNPs位点(C5467T,A9596G,A11860G,intron16上287 bp I/D)的同步检测, 并采用该芯片测定了50名健康者和80例高血压患者ACE基因的多态性谱.结果高血压患者ACE基因A11860G的基因型分布为(AA:24;AG:10;GG:46),与健康者的基因型分布(AA:15;AG:18;GG:17)相比较差异有统计学意义(χ2 = 11.39,P< 0.01);高血压患者ACE基因I/D的基因型分布为(II:37;ID:12;DD:31),与健康者的基因型分布(II:23;ID:5;DD:22)相比较差异有统计学意义(χ2=12.87,P< 0.01);而C5467T 、A9596G的基因型分布在两组人群中未见差异有统计学意义.结论 ACE基因A11860G和I/D一样可能与高血压发生、发展密切相关;ACE寡核苷酸基因芯片技术实现了对ACE基因的多个SNPs多态性位点的同步检测,方法简单、操作方便.

高压氧对重型颅脑损伤患者红细胞超氧化物歧化酶和脂质过氧化物的检测及临床意义

目的探讨重型颅脑损伤患者高压氧治疗前后,外周血红细胞超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物(LPO)的含量变化及与预后的关系.方法 360例患者分为高压氧+常规治疗组(HBO组)205例和常规治疗组(对照组)155例,另有30例健康体检者作为正常组.分别于治疗前和治疗后1个疗程、2～3个疗程及6个月(GOS评定),用邻苯三酚自氧化抑制比色分析法检测SOD含量,用硫代巴比妥酸显色法检测LPO含量.结果与正常组相比,HBO组及对照组在治疗前的SOD水平下降,LPO含量升高,差异有统计学上意义(P＜0.01).而在治疗1个疗程后,HBO组SOD水平升高,LPO水平下降,与相同GCS评分(Glasgow coma scale,格拉斯哥昏迷评分)的对照组相比,差异明显(P＜0.05).治疗2～3个疗程后,在GCS 3～5分(Glasgow outcome scale,格拉斯哥结果评分)的患者中,HBO组中的SOD、LPO水平与对照组有区别(P＜0.05).我们应用GOS评分进行比较,HBO组死亡率低于对照组,而预后良好率明显高于对照组(P＜0.01).结论高压氧能显著影响重型颅脑损伤患者红细胞中SOD、LPO的含量,其治疗效果可能是通过减少或抑制自由基的产生而实现的,为临床上高压氧治疗在自由基方面提供了理论基础.

精浆内前列腺素D合成酶双抗体夹心酶联免疫吸附法的建立及其应用

前列腺素D合成酶(L-PGDS)是一种双功能蛋白,它能转运、催化前列腺素D的合成[1-3].我们已用真核表达了人L-PGDS[4]、制备了小鼠抗人L-PGDS单克隆抗体.本研究在此基础上,建立L-PGDS双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA),分析精浆中L-PGDS与精子密度和精子活力间的相关性,以探讨L-PGDS在不同类型男性不育患者精浆内的表达差异[5].

优化聚合酶链反应产物银染测序法鉴定白细胞抗原-DQA1*0102等位基因纯合子

聚合酶链式反应-序列特异引物(PCR-SSP)技术在人类白细胞抗原(HLA)基因分型中被广泛使用.然而,分型过程中常出现"空白基因"而影响整个结果的可靠性.对此,目前多采用DNA测序以确定各等位基因纯合子或存在新突变或结合PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法进行确认[1].我们用PCR-SSP对109名广西巴马县壮族长寿老人和71名对照组进行HLA-DQA1座位基因分型,发现了33个HLA-DQA1*0102/- 个体,经本室优化DNA直接银染测序法[2]测定,确定均为HLA-DQA1*0102/*0102等位基因纯合子,现报告如下.

抗Sm D1抗体在系统性红斑狼疮诊断中的价值

系统性红斑狼疮(SLE)具有广泛直接对抗核抗原、胞浆抗原和核抗原的自身抗体谱[1],抗Sm(抗Smith抗体)被认为是诊断SLE的特征性抗体[2].近期研究发现,Sm抗原由U-RNA、B′、B、N、D1、D2、D3、E、F和G等多种成分组成;D1是主要的Sm抗原,其以多肽序列(aa83-119)取代整个Sm分子作为抗原,可极大地提高Sm抗体的检出率[3].本研究对SLE和类风湿性关节炎(RA)、混合性结缔组织病(MCTD)、干燥综合症(SS)和皮肌炎(DM)等患者血清进行抗Sm D1、抗Sm、抗ds-DNA和抗核小体抗体检测分析,以探讨抗Sm D1在SLE诊断中的价值.

2004年广州市4例散发严重急性呼吸综合征患者实验室检查特点

目的探讨散发严重急性呼吸综合征(SARS)患者实验室检查的特点.方法分析2004年确诊4例散发SARS患者的实验室检查结果. 结果白细胞及淋巴细胞呈不同程度降低,下降时间较流行时提早,下降程度较小.2例外周血T淋巴细胞亚群计数轻微降低.3例丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)轻度升高.肾功能、血糖、血脂及心肌酶无异常.血氧饱和度均无降低.所有病人血清SARS-IgM/G抗体早在发病第6天由阴转阳,滴度在短期内呈4倍以上升高,中和抗体实验阳性,1例咽拭子中检测出SARS-CoV RNA.结论 2004年中国4例散发病例,临床表现较轻,病程短,无并发症,归因于此次致病的SARS-CoV毒力小,抗体出现较早,病毒迅速被清除.

北京居民血清游离甘油水平及其对甘油三酯水平分类的影响

目的调查血清游离甘油(FG)水平及其与血清甘油三酯(TG)、年龄、性别等的关系,探讨FG对血清TG水平划分的影响.方法用高效液相色谱法测定480例北京居民血清FG,用酶法测定总甘油(TTG),分析FG与TG、年龄和性别的关系及FG对TG水平划分的影响.结果 480例北京居民血清FG平均值0.082 mmol/L,中位数0.075 mmol/L;FG/TG平均值8.0%,中位数6.4%;FG和FG/TG女性明显高于男性;TG和TTG高于目前医学决定水平1.69 mmol/L(150 mg/dl)的个体分别占22%和25%.结论按新的方案对血清TG水平划分,临床TG测定更需具备去除游离甘油的能力.

革兰阴性菌中1类整合子的分布及其与耐药的关系

目的在革兰阴性细菌中检测1～3类整合子,并分析整合子对细菌耐药性的影响.方法应用聚合酶链反应对临床分离的340株革兰阴性细菌进行整合子的初筛,对于整合子阳性的菌株,再利用限制性片段长度多态性技术(RFLP)进行分型.结果 340株菌中有87株(25.6%)含有1类整合子,其中有1株同时含有2类整合子,它们对10种抗菌药物的耐药率依次为亚胺培南(9.2%)、哌拉西林/他唑巴坦(34.5%)、阿米卡星(34.5%)、头孢吡肟(35.6%)、头孢他啶(41.4%)、头孢噻肟(65.5%)、庆大霉素(66.7%)、头孢曲松(67.8%),替卡西林/克拉维酸(72.4%)、环丙沙星(73.6%).结论 1类整合子广泛地存在革兰阴性细菌中,1类整合子阳性菌株对多种抗生素的耐药率大于整合子阴性的菌株.

化学发光免疫分析技术在严重急性呼吸综合征冠状病毒核衣壳蛋白检测中的应用

目的建立一种可用于严重急性呼吸综合征(SARS)早期诊断的简便、快速、灵敏的实验室检测方法.方法采用化学发光免疫分析方法(Chemiluminescence immunosaasy, CLIA)测定34种不同病毒培养上清和人血中SARS冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳蛋白 (Nucleocapsid protein, SARS-CoVN).结果 6种不同SARS-CoV毒株测定均为阳性,11种非SARS毒株测定均为阴性,低可检出核酸定量为6.3×10PFU/ml的SARS-CoV培养上清;测定49例抗体阳性的临床血清样本,发热6～10 d的样本检出率高可达100%. 结论 SARS-CoV的CLIA的灵敏度和特异性较高,且简便、快速,在SARS的早期诊断中有良好的应用前景.

聚合酶链反应检测SEN病毒的方法学探讨

目的探讨聚合酶链反应(PCR)扩增SEN病毒(SENV)核酸的优化条件.方法将标本分别以Acupure DNA/RNA提取法(方法1)、SDS-蛋白酶K方法(方法2)及裂解液提取TTV核酸法(方法3)抽提SENV DNA模板,并用3组针对SENV DNA不同区的引物进行扩增,比较不同模板提取方法、不同扩增引物及不同体积标本对SENV DNA检出率的影响.结果在191份血清中,方法1、方法2和方法3提取核酸后可分别检测出15份、9份和7份.采用方法1提取SENV DNA的基础上,采用2组套式引物分别扩增出15份和11份,一次PCR引物仅检出2份SENV DNA阳性标本;应用引物2扩增至少需要50 μl血清.结论不同引物扩增方法和不同模板提取方法可能是影响SENV DNA检出率重要因素.

鲍曼不动杆菌6种氨基糖苷类药物修饰酶基因的研究

为研究鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因及其与耐药表型关系,我们用琼脂稀释法检测了庆大霉素、阿米卡星等6种抗菌药物对20株多重耐药性鲍曼不动杆菌的低抑菌浓度(MIC),并用聚合酶链反应(PCR)检测了6种氨基糖苷类药物修饰酶基因.

应用聚合酶链反应-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变

目的应用聚合酶链反应(PCR)-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变,建立一种新的分子药敏试验方法.方法以传统药敏试验、PCR-单链构象多态性和PCR-直接测序方法为对照,对利福平、链霉素(SM)和乙胺丁醇耐药的结核菌基因rpoB、rpsL、rrs 和embB的寡核苷酸探针,通过反向斑点杂交检测78株结核菌临床分离株PCR产物.结果 18株结核菌药物敏感株的4种耐药基因均为野生型.60株结核菌耐药分离株中,59株为耐RFP株,rpoB基因突变率为93.2%,常见的突变位点为531位和526位密码子,33株为耐SM株,rpsL基因突变率为75.8%,均为43位密码子AAG→AGG突变,rrs基因突变率为9.1%,均为513位A→C突变,rpsL和rrs基因总突变率为84.8%;43株为耐EMB株,embB基因突变率为58.1%,均为306位密码子突变.结论应用PCR-寡核苷酸探针反向斑点杂交技术可简便、快速、准确地分析大多数结核菌耐药基因突变,检测其耐药性.

丙型肝炎病毒1b亚型诊断芯片的制备与实验室研究

目的建立一种简单有效的制备、筛选丙型肝炎病毒(HCV)1b亚型cDNA基因芯片探针的技术.方法应用cDNA文库法制备芯片探针,限制性内切酶Sau3AⅠ消化HCV-1b全长cDNA,所得的酶切片段在72℃补平加单个碱基A,然后与pMD18-T载体连接,AT克隆,用载体引物进行PCR初步鉴定,并测序.将筛选出的片段打印在氨基修饰的玻片上制备成cDNA芯片并进行杂交验证分析.样品标记采用限制性显示PCR(Restriction Display PCR RD-PCR)技术.结果应用cDNA文库法,共得到22大小相对一致(250～750bp)的基因片段,序列分析表明,均属于HCV-1b基因,可以作为诊断芯片探针;芯片杂交结果显示,样品和诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳.结论用cDNA文库法收集片段是一种快速、简便制备芯片探针的实用方法;制备的诊断芯片可以用于检测HCV-1b RNA,具有敏感、检测结果较为可靠的优点.

肺炎克雷伯菌质粒携带DHA-1型ampC基因的克隆和序列分析

我们观察到一些菌株对头孢西丁耐药,认为可能存在AmpC酶.在对一尿路感染病人尿标本中多重耐药肺炎克雷伯菌的质粒进行分析时发现了该菌质粒上携带的DHA-1型基因并对其进行了克隆和序列分析.

含风疹病毒部分核酸序列的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达

目的构建原核表达系统,表达内含风疹病毒部分核酸序列的由噬菌体包膜蛋白构成的病毒样颗粒,并包被重组RNA,使其具耐核糖核酸酶(RNase)的特性.方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增风疹减毒活疫苗中风疹病毒糖蛋白E1的部分保守区域,进行TA克隆后,用限制性内切酶Hind Ⅲ酶切,获得所需要的目的片段,并与用Hind Ⅲ酶切的表达载体pNCCL1相连接,构建一新的表达载体pNCCL1-Ru.再转化E.Coli BL21-DE3,用IPTG诱导表达噬菌体MS2包膜蛋白后,再自我组装成病毒样颗粒,并将风疹病毒部分序列包裹到病毒样颗粒内.结果成功构建了新的表达载体pNCCL1- Ru,其原核表达产物病毒样颗粒中所包裹的风疹病毒RNA序列与风疹BRDⅡ株同源性高达98%,所包裹的RNA具有耐RNase消化的特性以及良好的稳定性.结论我们构建的表达载体pNCCL1- Ru及原核表达系统,可作为构建和制备耐RNase的风疹病毒核酸标准品和质控品的平台,可为实验室进行风疹病毒核酸的检测提供稳定的无传染性的标准品和质控品.

实时荧光定量测定人B细胞激活因子受体基因表达水平

目的研究建立实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测人B细胞激活因子受体(BAFF-R)含量的方法,及探讨其在外周血单个核细胞(PBMC)中BAFF-R mRNA表达的检测价值.方法在BAFF-R基因高保守区设计特异性引物和荧光探针,用逆转录(RT-PCR)扩增目的片段实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中BAFF-R mRNA含量,并以 BAFF-R mRNA和β2M mRNA含量的比值进行BAFF-R表达水平评价.结果 RFQ -PCR检测BAFF-R含量的线性范围为109 ～101 pg/ml,低浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为12.5%和11.9%,高浓度样本批内和批间CV分别为8.3%和9.3%.30名健康献血员样本的PBMC中,83%(25/30)有BAFF-R mRNA表达,范围为0.14～1.03.结论 RFQ -PCR检测BAFF-R mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性.

聚合酶链反应临床应用的优越性和局限性

聚合酶链反应(PCR)技术自1983年问世以来,因其对基因或特定核酸序列在短时间内具有极大的扩增效率,已广泛应用于感染性疾病、肿瘤、遗传病、寄生虫病、法医学、动植物和考古等诊断和研究领域,并在某些方面呈现出几乎难以替代的优势.PCR用于疾病的临床诊断后,使人们对蛋白分子表型的认识,进一步深入到了遗传物质--核酸分子的探索,也使临床检验诊断学科中的临床分子诊断技术得到了飞速发展.像任何自然界的事物一样,PCR虽然有其无可比拟的优点,但也有其一定的局限性.如果在临床实际应用中,不遵循客观规则,也很容易产生非PCR技术问题所致的错误检验结果.

心脏外科手术继发偶发分枝杆菌心内膜炎一例

2003年7月本院从一心脏外科手术患者的血、骨髓中培养岀偶发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum).

从感染性腹泻患者粪便中检出大科赖迪沙门菌

2004年6月,我们从一感染性腹泻患者粪便中分离出一株大科赖迪沙门菌(S.takoradi).

侵蚀艾肯菌致口腔颊膜脓肿一例

2004年6月,我们自1例左颊膜囊肿患者的穿刺液中分离出侵蚀艾肯菌.

荧光偏振技术同步检测沙眼衣原体解脲脲原体方法的研究

沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)是常见泌尿生殖系感染等病原体,其早期检测对临床诊断治疗十分重要[1].传统的单一检测这两种病原体工作繁琐、费用高.本研究建立了荧光偏振与模板指导的末端延伸反应检测技术(TDI-FP),在同一反应体系应用多重引物,检测CT、UU感染,大大提高了检测时效.

蛋白和DNA定量单位的表达方式常混肴,区别何在?

何谓Multiresistance及Pan-resistance?

什么是苛养菌?哪些菌属苛养菌?

ESBL与ESBLs的区别?

禽流感病毒的生物学特性及其实验室检测

禽流感病是由甲型禽流感病毒(AIV)某些亚型的毒株感染人引起的急性呼吸道传染病.1997年4月,香港流浮山3个养鸡场发生H5N1禽流感,1个月后,1例3岁患儿高热并死于不明原因的多功能衰竭,后证实为H5N1禽流感病毒感染所致,这是世界上第一例甲型禽流感病毒使人致病的病例.此次香港地区的禽流感中,有18例染病,其中6例死亡[1,2]

白血病与淋巴瘤的分子诊断

近年临床研究表明,大部分白血病和淋巴瘤存在某种染色体易位,易位会产生新的融合基因.这些标志可以用于诊断不同类型的白血病和淋巴瘤.世界卫生组织2000年发布的白血病和淋巴瘤诊断标准已经将染色体易位作为重要的指标之一.当前白血病和淋巴瘤的治疗取得了很大进展,不幸的是,相当一部分患者终会复发,复发的原因是许多完全缓解的患者体内仍然存在常规方法不能检测出来的低水平的肿瘤细胞，称为微小残留病(minimal residual disease,MRD)[2].目前,临床治疗的目标是使患者达到分子水平上的缓解，这就要求MRD检测的灵敏度能够达到1/10细胞,能够定量,快速、价廉、易于标准化,同时能在不同实验室重复结果[3-6].

血栓与止血的检测

血栓与止血的实验室检测,必须掌握常用检测项目,了解新的分子标志物检测项目的原理、

全国血液学实验室诊断与临床专题学术会议纪要

由中华医学会中华检验医学杂志编辑委员会图3 本刊总编辑、中华医学会检验医学分会主任委员丛玉隆教授讲话图4 中国工程院院士、上海医学遗传学研究所所长曾溢滔教授讲话 图5 中国工程院院士、江苏省血液学研究所所长阮长耿教授作学术演讲图6 上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所副所长王鸿利教授在答疑主办的"全国血液学实验室诊断与临床专题学术会议"于2004年10月8-11日在广西桂林市召开.会议收到论文150余篇,来自全国各地的检验科、血液科以及相关实验室的专家学者200位代表出席会议.

上海市23项临床化学检验项目的允许误差范围

目的调查分析上海市二、三级医院,23项临床化学检验在常规条件下的变异系数(RCV)现状.探讨今后上海地区临床化学室内质量控制的要求.方法按美国CLIA′88可接受范围的四分之一作为上海地区拟推荐要求.对上海市2003年147家临床实验室23项常规临床化学 3 570 336个室内质量控制数据进行整理和统计分析,计算出各项目变异系数(CV)百分位数的均数,与卫生部1985年推荐的RCV的统计分析结果进行比较.结果上海地区138家临床实验室(占94.0%)CV小于卫生部1985年推荐的RCV,约有111家临床实验室(占75.5 %)符合上海地区拟推荐的要求.结论拟定的推荐要求基本适宜,不仅可被临床接受,而且已有75.5%单位符合要求,但尚有24.5 % 单位须努力才能达到要求.

人免疫缺陷病毒Ⅰ型基因序列分析中的质量控制研究

目的研究DNA序列分析中各种影响因素的作用,建立排除污染、进行序列质量控制的方法.方法通过对950份HIV-1样品DNA基因序列结果的分析,查找序列读取及序列分析中存在的各种影响因素,对各种可能导致污染的原因进行分析和解释.结果在使用各种软件进行序列分析时,两样本之间的基因距离为0;两样本所测区段的核苷酸或氨基酸序列完全一致或相差甚微;样本与实验室内所构建的克隆株之间的基因距离过近,同源性达到99%以上;两个独立传播的群体之间个别样本的互混等指标均提示存在污染的可能.结论构建基因进化树和将样本的核苷酸序列翻译成蛋白质的氨基酸序列后构建共享序列,是一种很好的发现序列质量问题、进行序列质量控制的方法.

LH750血液分析仪临床应用评价

血液分析仪是医学实验室重要仪器之一,我们参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)和国际血液学标准化委员会(ICSH)有关文件对临床应用的LH750血液分析仪进行评价.

头孢地尼等五种抗菌药物对呼吸道感染致病菌体外抗菌活性的研究

目的比较头孢地尼与其他4种抗菌药物对临床常见呼吸道致病菌的体外抗菌活性.方法采用琼脂稀释法测定对239株临床分离菌株的低抑菌浓度.结果金黄色葡萄球菌(MSSA)对头孢地尼的敏感性高,敏感率为100%,肺炎链球菌(包括PSSP、PISP)对头孢地尼的敏感性较高,敏感率为63.6%～100.0%.流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌对3种头孢菌素类抗菌药物比较敏感.肺炎克雷伯菌中产ESBL菌株对3种头孢菌素类抗菌药物耐药率为100%;非产ESBLs菌株对3种头孢菌素类抗菌药物的敏感率为73.1%～88.5%.结论头孢地尼与其他4种抗菌药物比较,对呼吸道常见致病菌有较强的抗菌活性.

2002-2003年中国医院和社区获得性感染革兰阳性细菌耐药监测研究

目的监测我国不同地区医院获得性感染(HAI)与社区获得性感染(CAI)患者中革兰阳性球菌耐药状况.方法按原设计方案对14家医院31个研究病房,从2002年7月1日至2003年6月30日年度内分离的770株革兰阳性球菌,采用国际标准平皿二倍稀释法进行体外敏感试验,以MIC50、MIC90表示抗菌药物的抗菌活性,并按2002年美国实验室标准委员会(NCCLS)指导原则的标准计算细菌对抗菌药物的耐药率(R)%、中介率(I)%和敏感率(S)%.结果从住院感染患者中分离到葡萄球菌390株,甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)与甲氧西林耐药表皮葡萄球菌(MRSE)的检出率分别为41.0%(68/166)与29.1%(34/117), 苯唑西林耐药金黄色葡萄球菌(ORSA)与苯唑西林耐药表皮葡萄球菌(ORSE)的检出率分别为41.6%(69/166)和82.1%(96/117).HAI患者中MRSA与ORSA检出率均为60.7%(17/28),显著高于CAI患者中MRSA与ORSA检出率,后两者分别为37.0%(51/138)与37.7%(52/138).未发现对万古霉素、去甲万古霉素耐药或中介金黄色葡萄球菌或凝固酶阴性葡萄球菌菌株.青霉素耐药肺炎链球菌(PRSP+PISP)的总耐药率为35.3%(12/34),包括耐药率R%(2.9%,1/34)和中介率I%(32.4%,11/34).从研究病房分离到肠球菌220株,非研究病房分离到95株共计315株,其中粪肠球菌251株,屎肠球菌58株,两者比值为4.3∶ 1.屎肠球菌对氨苄西林耐药率为72.4%(42/58),显著高于粪肠球菌对氨苄西林的耐药率37.5%(94/251) (P<0.01).发现5株对万古霉素中介,表型属Van B型的粪肠球菌,并检出3株Van A型对万古霉素、去甲万古霉素及替考拉宁都耐药的屎肠球菌.结论革兰阳性球菌对所测定药物的耐药状况包括MRSA、ORSA、PRSP(R+I)及AREF与中国细菌耐药监测组以往报道结果规律相似或耐药率略有增加,与文献报道收集西太区某些监测资料大体一致.本次监测发现3株Van A型屎肠球菌对检测的3种糖肽类抗生素全部耐药.

洋葱伯克霍尔德菌临床分离与耐药性的7年监测

为了解洋葱伯克霍尔德菌(burkholderia cepacia)在临床的耐药性,我们统计分析了我院自1997年1月-2003年12月该菌的分离率,并监测抗菌药物的耐药性变化.

肾脏病的病因学诊断及进展

近年来,随着对肾脏疾病病因与发病机制研究的不断深入,以及分子生物学和免疫学技术的长足进步,肾脏病因学实验诊断有了不少新的突破和进展.实验室诊断方法为研究肾脏疾病的病因与发病机制,疾病诊断与鉴别诊断,疗效观察与预后判断等都提供了越来越重要的依据.

连续R显带和荧光原位杂交技术在白血病诊断中的应用

目的探讨连续R显带和荧光原位杂交技术(FISH)在鉴定白血病染色体复杂变异易位中的应用.方法对15例核型分析有疑问的标本在R显带基础上再进行荧光原位杂交.对比分析同一中期分裂相的显带和FISH结果.结果 4例应用BCR/ABL探针;4例PML/RARa探针;4例AML1/ETO探针;2例IgH探针;1例MLL探针.经显带结果与FISH结果对比分析,9例疑似的复杂易位得到确证,并精确定位.6例核型结果得到修正.结论连续R显带和FISH方法在复杂变异易位的鉴定方面与传统的核型分析和直接FISH检测相比具有明显的优势.在白血病的诊断方面,对于未知异常染色体的检出将具有更广泛的应用前景.

多重聚合酶链反应在α-地中海贫血诊断中的应用

目的初步评价使用单管多重PCR对缺失型α-地中海贫血(α-地贫)的诊断效能.方法使用单管多重PCR基因诊断试剂对202例血液学方法筛检疑似α-地贫患者进行基因检测,并对其中部分标本进行测序.结果疑似为α-地贫的202份临床标本,基因检测证实其中136例为α-地贫,其结果经序列分析证实.与PCR检测相比,一管法红细胞脆性、MCV、MCH与RDW-CV检测的灵敏度分别为85.29%、99.44%、73.53%和61.03%,特异性分别为69.70%、66.67%、62.12%和60.61%.在136例α-地贫患者中,--SEA/αα 104例、-α3.7/αα 14例、-α4.2/αα 4例、-α3.7/--4.211例和-α4.2/--SEA3例,分别占76.47%、10.29%、2.94%、8.09%和2.21%.结论与血液学方法相比,多重PCR检测具有快速、准确的优点,可用于人群和临床样品的缺失型α-地贫的分子筛查以及产前诊断.

特发性血小板减少性紫癜患者血小板对自身淋巴细胞的异常激活

目的探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者血小板表面人类白细胞抗原(HLA-DR)的表达和CD4+T淋巴细胞的活化状态.方法采用流式细胞术检测60例ITP患者和60例正常人血小板表面HLA-DR的表达水平和自身血小板活化的淋巴细胞产生白细胞介素2(IL-2)水平. 结果 ITP患者血小板表面HLA-DR的表达量为0.808%±0.218%,正常对照组为0.025%±0.019%,两者相比差异具有统计学意义(P<0.01).ITP患者CD4+T淋巴细胞经自身血小板激活后,IL-2的表达量为5.1%±1.23%,较正常对照组(0.0%)有明显差异(P<0.01).结论 ITP患者在自身血小板HLA-DR抗原的作用下,出现了自身反应性T淋巴细胞的异常活化,T淋巴细胞处于高活性状态.

红细胞平均体积和脆性及血红蛋白电泳联合检测在地中海贫血诊断中的价值

目的探讨红细胞平均体积(MCV)、红细胞脆性和血红蛋白(Hb)电泳联合检测在地中海贫血诊断中的应用价值.方法采用日本Sysmex KX-21自动血细胞分析仪、中山医科大学红细胞脆性一管定量法、美国Helena公司KEP型全自动电泳分析系统,分别对确诊的160例地中海贫血患者和110例非地中海贫血者进行MCV、红细胞脆性和Hb电泳测定,并对结果作相关统计学分析.结果 MCV、红细胞脆性、Hb电泳单项检测对地中海贫血诊断的灵敏度及特异度分别为91.3%、78.1%、71.3%及69.1%、90%、91.8%;MCV与Hb电泳、红细胞脆性与Hb电泳2项检测平行联合的灵敏度及特异度分别为97.5%、93.7%及63.6%、78.2%;系列联合的灵敏度及特异度分别为71.2%、68.8%及97.3%、99.1%.MCV、红细胞脆性、Hb电泳3项检测平行联合的灵敏度、特异度为100%、61.8%;系列联合的灵敏度和特异度为67.5%、100%.经u检验,平行联合检测的灵敏度与各单项检测灵敏度之间、联合检测的特异度与各单项检测特异度之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 MCV、红细胞脆性、Hb电泳平行联合检测可提高灵敏度,联合检测可提高特异度.

南京军区福州总医院全军检验医学中心

中国人民解放军福州总医院全军检验医学中心始建于1978年,是全军早成立的医学专科中心之一.现由检验医学科和实验科2个科室组成,检验医学科侧重于临床检验业务,实验科除承担部分临床检验业务外,主要承担基础与临床相关实验研究.1988、1990年先后成为第二军医大学和福建医科大学的硕士研究生联合培养点.2003年成为福州总医院检验医学和分子生物医学专业博士后科研工作站,并成为福建省福总司法鉴定所挂靠单位.

我国临床血液学检验亟待解决的问题

近年来,我国临床血液学检验取得了令人瞩目的成就[1,2].同时,也面临着挑战,包括如何建立血液病的实验诊断体系和实验诊断标准,如何有效选择和运用有价值的血液病实验诊断检测项目,以及如何建设和加强血液病学实验室管理,如何使从事血液病诊断的实验室与临床紧密结合等[2].现根据我国临床血液学检验的发展现状,提出以下亟待解决的问题,供有关部门和同道参考.