中华检验医学杂志
Chinese Journal of Laboratory Medicine 중화검험의학잡지
- 主管单位： 中华医学检验杂志
- 主办单位： 中国科学技术协会
- 影响因子： 1.40
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 11-4452/R
- 国内刊号： 韩锟
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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耐核糖核酸酶内含长片段嵌合体RNA的病毒样颗粒的构建和表达
目的 通过改变原噬菌体ms2包膜蛋白RNA包装位点(19碱基的茎环结构)的数量及亲和力,构建新的原核表达系统,探讨表达内含长片段(达到理论上的1 900 bp)RNA的耐RNase病毒样颗粒的可能性.方法 首先设计含Hind Ⅲ和Not Ⅰ酶切位点的引物,扩增ms2包膜蛋白的编码成熟酶蛋白和衣壳蛋白的1 700 bp序列,并将原来的19mer的包装位点序列改变为C-5变异体(19 bp stem-loop结构中-5位的尿嘧啶改变为胞嘧啶),Hind Ⅲ和Not Ⅰ酶切后,与用同样酶切的表达载体pET-28(b)相连接,得到重组载体pET-ms2-pac.应用重叠PCR扩增3种病毒的5段嵌合体序列(包括3段SARS-CoV基因、一段HCV基因和一段HSN1基因),并在SARS-CoV3和HCV序列之间插入一个19mer的变异体包装位点序列,在设计引物时,使嵌合体两端含有Not Ⅰ酶切位点,与Not Ⅰ酶切的重组载体pET-ms2-pac相连接,构建得到具有2个变异包装位点的表达载体pET-ms2-3V.同时构建3种对照重组表达载体,分别测定N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3V 4种重组表达质粒表达产物的260 nm吸光度(A260)值,根据公式A160=0.125 mg/ml计算4种表达产物的表达效率.结果 成功构建了4种原核表达载体:pET-ms2-3V、P-3V-pET-P、N-P3V-pET-P和N-P3V-pET-C.pET-ms2-3V和P-3V-pET-P经原核表达后得到含全长为1 891的5段嵌合体RNA的病毒样颗粒;N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C其原核表达产物病毒样颗粒中仅包装了1 200 bp的目的 嵌合体RNA.N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3V的表达效率分别为0.23、0.35、0.35和0.51 mg/ml.N-P3V-pET-C比N-P3V-pET-P表达效率高52%,而pET-ms2-3V比P-3V-pET-P表达效率高38%.所包装的RNA具有耐RNase和DNase消化的特性以及良好的不同温度条件下的稳定性.结论 通过改变噬菌体ms2 RNA包装位点(19碱基的茎环结构)的数量,可构建能表达内含达到理论上的约1 900 bp外源RNA的耐RNase病毒样颗粒的原核表达载体平台.通过应用包装位点的变异体C-变异体,可以增加病毒样颗粒的表达效率.
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耐吡嗪酰胺结核分枝杆菌基因突变研究
目的 研究吡嗪酰胺酶编码基因pncA突变与结核分枝杆菌吡嗪酰胺(pyrazinamide,PZA)耐药的关系.方法 将临床分离的36株结核分枝杆菌进行常规PZA药敏试验和pncA基因序列分析.采用绝对浓度法进行PZA药敏试验;PCR扩增pncA基因及其上游、下游碱基序列,纯化回收PCR产物克隆到T载体并进行全自动测序.结果 36株临床分离株中25株PZA耐药,11株PZA敏感.5株高耐PZA(PZA浓度为250 μg/ml)临床分离株4株pncA基因突变;20株低耐PZA(PZA浓度为50 μg/ml)6株pncA基因突变;25株耐PZA结核分枝杆菌pncA基因突变率为40.0%.3株PZA敏感临床分离株pncA基因出现突变、其中2株为同义突变.11株耐PZA结核分枝杆菌pncA基因上游调控序列突变,其中5株同时有pncA基因突变;2株PZA敏感结核分枝杆菌pncA基因上游序列突变.结论 pncA基因突变可引起结核分枝杆菌对PZA耐药,但pncA基因突变只是结核分枝杆菌耐PZA的一种机制,可能还存在PZA的其他耐药机制.
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焦磷酸测序法快速检测胰腺癌K-ras基因点突变
目的 建立基于焦磷酸测序技术的胰腺癌K-ras基因点突变的检测方法,并与Sanger测序法作一比较.方法 用焦磷酸测序法(Pyrosequencing)和Sanger测序法(Sanger sequencing)分别在10名正常胰腺组织、49例胰腺癌、11例慢性胰腺炎、18例胰腺良性囊肿、7例胰岛素癌、9例壶腹癌、7例胆管癌及7例十二指肠乳头癌石蜡包埋组织的DNA中检测K-rag基因12密码子点突变.结果 采用上述两种方法在所有正常胰腺组织、慢性胰腺炎、胰腺良性囊肿、胰岛素癌、壶腹癌、胆管癌及十二指肠乳头癌均未见K-ras基因点突变,而采用焦磷酸测序法发现胰腺癌石蜡包埋组织K-ras基因点突变率为71.4%(35/49),显著高于采用Sanger测序法发现胰腺癌石蜡包埋组织K-rag基因点突变率(61.2%,30/49).结论 焦磷酸测序法较Sanger测序法更为敏感,且焦磷酸测序法准确、快速、高通量,适合临床标本的批量测定.
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急性髓系白血病患者131例免疫表型与预后的相关性分析
目的 探讨急性髓系白血病(AML)免疫表型与预后的相关性.方法 采用多色流式细胞术对131例AML患者进行检测,分析其免疫表型与患者年龄、初诊时WBC、PLT和Hb的关系,及其对完全缓解率(CR)的影响.结果 AML患者中髓系抗原表达阳性率高的是CD13、CD33和髓过氧化物酶(MPO),急性早幼粒细胞白血病(M3)亚型中CD34和HLA-DR表达率较低,淋巴细胞抗原CD19和CD7表达常见,阳性率分别为15.4%和14.6%.CD7阳性组患者的年龄明显高于阴性组患者年龄(t=-2.27,P＜0.05),CD14阳性组患者的初诊WBC计数明显高于阴性组(Z=-2.284,P＜0.05).131例AML患者的总CR率为56.5%,CD34阳性组(82例)的CR率为45.1%,CD34阴性组(49例)的CR率为75.6%,两组间差异有统计学意义(x2=11.524,P＜0.05).CD34和HLA-DR双阳性组(74例)的CR率为41.9%,单阳性组(38例)CR率为78.9%,双阴性组(19例)CR率为68.4%,3组问差异有统计学意义(Z=-3.492,P＜0.01).CD7、CD19、CD13、CD33、CD38、CD15、CD64、CD14及MPO等抗原表达阳性组和阴性组间CR率的差异无统计学意义(P均＞0.05).多因素回归分析显示,患者年龄大于60岁、初诊时WBC大于50×109/L、PLT大于30×109/L、Hb小于60 g/L以及CD34阳性是低CR率的独立风险因素.结论 AML患者年龄,初诊时WBC、PLT和Hb计数以及CD34表达与CR率有关,免疫表型的检测对于判断AML预后有一定价值,有助于指导临床治疗和判断预后.
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单链构象多态性技术在家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因13外显子点突变筛查中的应用
目的 探讨单链构象多态性(SSCP)技术在家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体(LDLR)基因13外显子点突变筛查上的应用价值.方法 以16例临床诊断为家族性高胆固醇血症(FH)患者为研究对象,提取外周血DNA,扩增LDLR基因第13号外显子片段,组合优条件进行SSCP电泳并银染.对异常条带进行DNA序列测定确定其突变性质和位置.结果 优化SSCP电泳条件为:不含甘油8%凝胶,在10℃条件下电泳;含5%甘油的8%凝胶,在常温条件下电泳(交联度均为49:1).凝胶厚度均不超过0.4 mm,电泳电压为5 V/cm,在此条件下进行SSCP电泳均可以得到满意电泳图谱.对发现的异常条带,结合DNA测序证实有4例患者LDLR基因第13外显子分别发生A606T,D601N,Y601D,或G636V错义突变,同时均存在1959碱基C→T同义突变.另外4例患者13外显子仅存在1959碱基C→T同义突变.结论 通过优化各种条件进行的PCR-SSCP银染方法,是高胆固醇血症病LDLR基因13外显子点突变初步筛查的有效手段.
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短发夹状RNA真核表达载体对HL-60细胞生存素基因表达的影响及诱导凋亡作用
近研究发现,白血病细胞凋亡受阻与生存素(survivin)的过度表达有关.为此,我们设计了survivin特异性短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,利用脂质体转染急性粒细胞白血病细胞株HL-60细胞,检测转染前后细胞survivin基因mRNA和蛋白表达以及凋亡情况,探讨以survivin为靶点,将RNA干扰(RNA interference,RNAi)用于白血病基因治疗的可行性.
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有丝分裂关卡基因致染色体数目异常自然流产胚胎发生的机制
目的 探讨有丝分裂关卡基因(hBUB1)在染色体数目异常自然流产胚胎发生中的可能机制.方法 采用实时定量逆转录(RT)-PCR和免疫印迹法(WB)检测染色体数目异常组和正常对照组的自然流产胚胎组织中目的 基因在mRNA和蛋白水平的表达;构建针对hBUB1基因的短发卡状(shRNA)表达载体,用细胞免疫化学、WB和实时定量RT-PCR方法评价其对胚胎细胞内源性hBUB1表达的干扰效果;用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTF)试验测定细胞增殖抑制率;用流式细胞术解析细胞周期分布.结果 hBUB1蛋白在染色体数目异常组中的表达显著低于正常对照组(阳性表达率分别为8%和93.5%,P＜0.05).shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hBUB1基因的表达(干扰前后mRNA水平分别为0.196±0.067和0.042±0.006,P＜0.05).胚胎细胞转染有效干扰质粒48 h后,染色体数目异常组细胞增殖抑制率达62%,显著高于正常对照组(4%,P＜0.05).有效干扰质粒引起G2/M期细胞从对照组的40.2%和41.3%降低至21.3%.结论 hBUB1基因表达下调可导致细胞增殖的抑制和周期的改变,在染色体数目异常自然流产胚胎发生中可能起很重要的作用,这将为寻找可靠的临床检测指标奠定基础.
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人Rh(D)血型抗原模拟表位的筛选和鉴定
目的 从噬菌体随机肽库中筛选人Rh(D)血型抗原模拟表位,并对其免疫学活性进行鉴定.方法 以抗Rh(D)单克隆抗体作为固相筛选分子,对噬菌体随机十二肽库进行3轮"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选35个克隆,经噬菌体ELISA和交叉反应试验,确定阳性克隆,再对这些克隆进行DNA序列测定和抗体竞争抑制试验,以获取人Rh(D)血型抗原模拟表位.然后采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)对所获噬菌体进行鉴定和抗原性分析.结果 经过3轮淘洗后,噬菌体得到富集,获得11个阳性克隆.DNA序列测定和竞争抑制实验结果表明,这11个克隆噬菌体所展示的外源多肽中有7个克隆氨基酸序列含有相同的色氨酸(W)、脯氨酸(P)和谷氨酰胺(Q)结构(-WP-Q-),且均具有40%以上的抑制率;其余4个克隆没有共性,抑制率较低,可能为非特异性结合.Western blot分析表明,被选定的噬菌体能被抗Rh(D)血清特异识别,具有类似于Rh(D)蛋白的抗原性.结论 利用抗Rh(D)单克隆抗体筛选噬菌体随机肽库,成功获得含有(-WP-Q-)结构的Rh(D)抗原模拟表位,为进一步探讨Rh(D)新生儿溶血病的发病机制和疫苗的研究奠定基础.
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临床生化检验参考方法的主要作用
参考方法是临床检验参考系统的主要组成部分.参考方法主要用于评价常规方法和为标准物质定值,从而建立和保证检验结果的溯源性.常规方法的校准偏倚和非特异性及参考物质的互通性是临床检验标准化中的重要问题,标准化工作也需要互通的参考物质.参考方法在鉴定和纠正常规方法主要质量问题及参考物质研制中发挥不可替代的作用.
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Traceability,international standardization programs, and world-wide reference systems in laboratory medicine
随着科学与技术的发展,临床检验近年出现了许多新的检验项目,尤其是利用免疫学原理对某些浓度很低的特殊蛋白的检测,但这些检测的结果可以是方法特异的,一种方法结果可能无法与其他方法结果相比较.为实现标准化或一致化,不同免疫分析的方法设计需具有可比性,校准物需溯源至同一参考物质.新的欧盟法规要求体外诊断产品的校准物和控制物的定值需具有溯源性,此要求适用所有体外诊断产品,对全球制造商和临床实验室产生影响.溯源原理基于EN ISO 17511,方法间结果的可比性有赖于合理设计的参考系统.此参考系统包括下列基本要素:足够明确的分析物定义,参考测量程序,适当的一级和次级参考物质,经过认可的参考实验室网络,临床溯源性相关信息,以及测量不确定度表述等.溯源性通过不间断的校准链(溯源链)实现,后者由交替出现的测量程序和校准物质组成.SI溯源链始于分析物的SI单位定义,随后通过一级参考测量程序和一级参考物质传递SI单位.量值的准确性或正确性源于一级参考测量程序和一级参考物质,但由于一级参考物质价格昂贵,一级参考测量程序无法在常规检测中应用,尚需中间的校准物和方法将准确性传递至产品校准物,终至患者样品.每一次传递都会增加误差或不确定度,因此溯源链的传递步骤越少越好.正确的传递链要求每一测量程序的检测特异性和每一校准品的互通性,达不到这些要求会使溯源链中断.制造商还需确定校准品定值的不确定度并将这一信息提供给用户,在计量学上不确定度与定值同样重要.临床实验室位于溯源链的终端,结果的溯源性有赖于制造商所使用和描述的参考测量程序和参考物质.建立校准物的溯源性和改进检验结果的可比性需要标准化计划,这意味着使检测结果尽可能接近上一级参考测量程序得到的真值.采用较低级别的公认方法为特定的参考物质定值时,上述过程表述为"一致化",而不是"标准化",因为一致的结果不一定是真值.为整理和公布检验医学现有较高级别参考物质、参考测量程序和参考实验室,国际计量局(BIPM)、国际临床化学联合会(IFCC)和国际实验室认可协会(ILAC)成立检验医学溯源联合委员会(简称JCTLM).JCLTM的主要任务是通过实施参考系统,建立检验结果溯源性,改进其可比性,从而提高医疗卫生质量并降低费用.JCTLM设立工作框架,按照国际标准(ISO 17511,15193,15194)建立参考物质和参考测量程序认定步骤.工作任务被很快确立并付诸实施,包括建立参考物质和参考测量程序列表,建立参考实验室网络,建立新的参考物质和参考测量程序的审批程序,以及合作研发新的参考物质和参考测量程序.
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婆罗双树样基因4与疾病关系的研究进展
人们早对转录因子婆罗双树样基因4(SALL4)的关注,是发现SALL4突变导致了机体末端指节的发育畸形和眼球活动障碍.近2年来,关于SALL4与疾病关系方面的研究有了突破性进展,SALL4在白血病发生和维持胚胎干细胞多能性等方面起重要作用.
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外周血涂片中检出组织胞浆菌一例
随着血细胞分析仪的普及,对白细胞、红细胞、血小板及相关参数的检测数据很快就能得出.但是,外周血三系(白细胞、红细胞、血小板)有异常情况时,血细胞分析仪中的"中间细胞"值不一定会超出参考范围.血细胞形态学在实际工作中往往被忽视了,以致造成漏诊、误诊现象的发生.
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浙江省POCT质量管理探索
POCT(point-of-care testing)是随着检验医学发展应运而生的新事物,它是指在中央实验室外,靠近检测对象,及时报告结果的微型便携式检验系统,在国内也有"床边检验"、"快速检测"等翻译.POCT与传统实验室检验的区别是缩短了检验的运转周期,能即时在采样现场进行分析并获得结果,深受临床科室的欢迎[1].
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艾滋病合并隐球菌脑膜炎17例临床与实验室诊断分析
HIV感染机体后主要攻击淋巴细胞,导致CD+4T淋巴细胞数量进行性减少.CD+4T淋巴细胞减少程度与各种机会感染成正比.当CD+4T淋巴细胞＜100个/μl时,新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)等机会性致病菌便会乘虚而入[1].本研究总结分析2004年10月至2007年8月,本院收治541例艾滋病患者中并发隐球菌脑膜炎17例的实验室诊断及真菌药敏试验结果.
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血糖测定的方法学进展与临床应用
临床上的血糖测定一般是指血液中的葡萄糖测定,它是临床生化检验中常用的生化检测项目之一,对糖尿病(diabetes mellitus,DM)、代谢综合征(metabolic syndrome,MS)等疾病的诊断、治疗和监测有重要的指导意义.
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临床检验质量保证体系的重要环节:检验科对外部供应商的评价和选择
检验科的全程质量管理是一个系统工程,在全程质量保证的环节中,外部供应商(包括厂家和代理商等)所提供的产品及其服务与检验科的质量保证体系息息相关,是体系中非常关键的一环.供应商提供的产品质量与服务质量必须符合体系的要求.
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亲和毛细管电泳法测定甲氨蝶呤对映体与二氢叶酸还原酶反应动力学参数
目的 建立一种测定氨甲蝶呤(MTX)两种对映体与二氢叶酸还原酶(DHFR)结合反应动力学参数的方法.方法 建立DHFR反应体系,采取亲和毛细管电泳技术,以含0.2%Brij-35的pH 9.50的50mmol/L硼砂为电泳缓冲液,检测波长为254 nm,在25 kV的电压下,分离反应体系中各组分.观察酶反应前后的电泳图谱并根据反应生成物峰面积的变化计算相关反应动力学参数,将不同浓度的氨甲蝶呤两种对映体L-(+)-MTX和D-(-)-MTX分别作用于所建立的DHFR反应体系,测定两种对映体的半数抑制浓度(IC50).结果 建立了亲和毛细管电泳法对氨甲蝶呤对映体与DHFR反应动力学参数的测定方法,在30 min内实现DHFR反应体系中反应物和生成物的分离,并根据反应生成物峰面积的变化计算得出D-(-)-MTX的IC50为3.17×10-7mol/L,L-(+)-MTX的IC50为2.48×10-8mol/L,两者相差13倍左右.结论 亲和毛细管电泳的方法可以快速准确地用于DHFR反应动力学参数的研究,通过检测MTX对映体对DHFR的抑制能力的差异,首次发现MTX对映体对DHFR有立体选择性作用.
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一种快速等温检测核酸目标序列方法的建立
基因诊断技术因其灵敏性和特异性较高,问世后即得到广泛运用[1].目前,基因检测主要为PCR和核酸杂交为基础的两类方法.我们建立一种经核酸杂交和切刻内切酶酶切[2-3]的快速等温核酸检测方法(rapid isothermal detection and amplification,RIDA),并对其方法学性能进行评价.
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对《从血液中分离一株松鼠葡萄球菌》一文的异议
编辑同志:阅读贵刊<从血液中分离一株松鼠葡萄球菌>[1]一文后,笔者觉得有一点是需要更正的.此文中松鼠葡萄球菌的药敏试验采用纸片扩散法,药敏结果为:万古霉素、氯霉素、庆大霉素、替考拉宁、阿莫西林/棒酸均敏感;青霉素、苯唑西林、环丙沙星、红霉素、复方新诺明、克林霉素、四环素均耐药,笔者觉得阿莫西林/棒酸敏感的结果明显不妥.
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《中华检验医学杂志》编审专家介绍
涂植光 <中华检验医学杂志>第六、七届编辑委员会委员.博士研究生导师.1946年出生,从事临床医师工作9年、高校教育工作27年.曾赴英国Royal Postgraduate Medical School研修.
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系统性硬化症一例诊断与治疗评析
患者,女性,63岁,退休教师,因"颜面部及双上肢皮肤紧绷感6月余,气促2月余"于2007年3月21日入住本院.患者2006年9月无诱因出现颜面部及双上肢皮肤肿胀及紧绷感,伴双手指发白随后紫绀,及局部麻木、疼痛,发作时间持续几分钟至十几分钟;活动后稍显气促;体温间断低热,(37.5～38.2℃).
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血尿、蛋白尿、全血细胞减少
病历摘要患者男,75岁.2007年5月因"发现肉眼血尿半月余,颜面及双下肢水肿10 d"入住北京大学第一医院.患者近4个月夜尿增多,入院前半个月余无明显诱因出现全程无痛肉眼血尿,10 d前出现颜面及双下肢可凹性水肿,血压升高.
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血清尿素测定基质效应研究
目的 评价2007年全国室间质量评价(EQA)临床化学项目材料和13种市售制备物血清尿素测定在7种脲紫外速率法测定系统上的基质效应,并考察这些测定系统的校准偏差.方法 按美国临床和实验室标准协会(CLSI)EP 14-A2试验方案,同位素稀释气相色谱质谱法作比对方法,7种尿素酶常规方法为待评方法,用比对方法和待评方法同时测定25份新鲜冰冻人血清和EQA材料及市售制备物.考察常规方法和比对方法测定EQA材料(或市售制备物)结果间的数量关系与它们测定新鲜冰冻人血清样品数量关系的一致程度,评价样品的基质效应.考察新鲜冰冻人血清样品常规方法和比对方法结果的差异,评价测定系统的校准偏差.结果 8种EQA材料和3种市售制备物对参加评价的所有测定系统无基质效应,1种市售制备物对所有系统都表现基质效应,其他样品视系统的不同而表现出不同的情况.7种测定系统中的6种都存在不同程度的校准偏差:同直线Y=X相比,系统A的斜率、截距偏差均小于5%,不存在明显校准偏差.系统B、C、D、F、G的斜率偏差小于5%,截距偏差大于5%,存在一定的校准偏差.系统E的斜率和截距偏差均大于5%,表现为存在校准偏差.结论 样品的基质效应和测定系统的校准偏差影响血清尿素测定的准确性和可比性.应充分重视基质效应和校准偏差对临床检验量值溯源的影响.
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同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清总甘油
目的 建立同位素稀释液相色谱串联质谱测定血清总甘油的方法.方法 以[13C3]-甘油作内标,用氢氧化钾异丙醇溶液水解血清甘油酯为游离甘油,将游离甘油转化为苯甲酸酯,用同位素稀释液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)分离检测,用标准曲线法定量.结果 甘油/内标峰面积比与甘油浓度(0.565～4.517 mmol/L)线性相关系数大于0.999 9;测定不同浓度血清总甘油批内变异系数(CV)平均为0.52%(范围0.21%～2.62%),总CV平均为1.15%(范围0.62%～2.00%);分析国际和国家标准物质,测定值与认证值的偏倚小于1%(-0.20%～1.06%).结论 建立同位素稀释液相色谱串联质谱测定血清总甘油方法,方法特异、精密、准确,可望用作血清总甘油测定参考方法.
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国际临床化学联合会酶学测定参考方法实验室网络的初步建立
目的 总结我国实验室运行国际临床化学联合会(IFCC)酶学测定参考方法情况和参加IFCC参考实验室室间质评(RELA)结果,了解我国酶学参考测量水平.方法 目前国内有8家实验室运行全部或部分IFCC酶学参考方法.各实验室按IFCC参考方法建立测量程序,评价各自程序的精密度与准确性,精密度评价按美国临床和实验室标准协会(CLSI)EP-5进行,准确度评价采用国际有证参考物质.7家实验室参加2006年RELA.结果 各实验室目前能达到的批内变异系数(CV)均在1.5%以内,批间精密度在2%以内.部分实验室进行了有证参考物质分析,测定结果偏倚在给定的不确定度范围内.我国酶学实验室在2006年RELA中具有与除外组相似的室间CV,只是样本A乳酸脱氢酶(LDH)及样本B ALT的室间CV较大,但剔除可能离群值后室问CV与除外组相似.结论 中国酶学实验室经过5年的发展,现在无论从硬件配置还是技术力量上均已接近国外同类实验室,我国临床酶学参考实验室网络已初步建立.
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六种临床诊断酶学测定参考方法的应用及国际比对结果分析
目的 应用国际临床化学联合会(IFCC)公布的参考方法对血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、(天)门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)及淀粉酶(AMY)6个酶进行测定,并通过参加参考实验室国际比对计划评估参考方法的准确性.方法 按照IFCC有关酶学活性测定(37℃)参考方法的标准操作程序(SOP),分别使用PE和Agilent的两套测定系统进行6个酶的测定.通过测定质控血清监测两套测定系统的稳定状态、有证参考物(CRM)并参加酶学国际比对(ring trial),验证参考方法的准确性.结果 两套系统测定室内质控血清的测值稳定,6种酶天间测定变异系数为0.5%～1.9%;测定结果一致,两者结果偏移小于2.1%;CRM测定结果在允许的范围内,初步验证了参考方法的准确性;高低两个浓度样本,两个独立系统的国际比对结果中有4个酶(ALT、AST、GGT、AMY)的测定值位于所有参考实验室测定的(x)±s范围内,LDH与CK测值位于(x)±2s之间;用稳健统计学方法评价,除了LDH的样本A测值属于离散值以外,其他5个酶ALT、AST、CK、GGT、AMY及LDH样本B的比对结果未发现离群.结论 应用IFCC参考方法采用两套测定系统对6个酶进行的测定结果稳定、准确,具有等效性.
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血清总胆固醇、总甘油、游离甘油和甘油三酯标准物质的研制
目的 研制与临床标本基质相似的血清总胆固醇(TC)、总甘油(TTG)、游离甘油(FG)和甘油三酯(TG)标准物质.方法 按国家标准物质技术规范的要求,制备4种血脂浓度的健康人新鲜混合血清,用酶法测定TC检测均匀性,用HPLC法检测稳定性并定值,评估不确定度.结果 4种血清均匀性检验数据方差分析P值分别为0.339、0.212、0.275、0.196(均＞0.05),说明均匀性良好;稳定性研究结果显示4种血清TC和TG在-20℃保存至少可稳定4年;4种血清的标准值和不确定度TC分别为(5.110±0.064)mmol/L、(4.761±0.062)mmol/L、(3.941±0.050)mmol/L和(3.158±0.041)mmol/L;TTG分别为(2.212±0.043)mmol/L、(1.679±0.033)mmol/L、(1.275±0.027)mmol/L和(1.067±0.023)mmol/L;FG分别为(0.142±0.005)mmol/L、(0.149±0.004)mmol/L、(0.146±0.003)mmol/L和(0.122±0.003)mmol/L;TG分别为(2.069±0.043)mmol/L、(1.530±0.033)mmol/L、(1.129±0.027)mmol/L和(0.945±0.023)mmol/L.结论 研制的血清总胆固醇、总甘油、游离甘油和甘油三酯标准物质均匀性和稳定性良好,定值可靠,已被国家质量监督检验检疫总局发布为国家一级标准物质(GBW 09145、GBW 09146、GBW 09147、GBW 09148).
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三种方法在尿液有形成分分析中的对比观察
随着尿干化学分析仪的普及,逐步实现了尿液化学分析的自动化.此后,各型自动尿液有形成分定量分析仪相继出现和应用,减轻了劳动强度,并提高了尿沉渣分析的准确性和检测效率,促进了尿沉渣检查的标准化,使尿液分析取得划时代的进步.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌快速检测方法的比较
目的 筛选出快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcous aureus,MRSA)的实验方法.方法 从天津医科大学附属肿瘤医院细菌室菌库中提取源自肿瘤患者感染的44株金黄色葡萄球菌,利用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、微量肉汤稀释法、Etest法、青霉素结合蛋白2a(penicillin-binding protein 2a,PBP2a)乳胶凝集法5种表型检测MRSA方法进行检测,并与PCR方法进行比较.结果 PCR法检测mecA基因,确定MRSA 36株;以PCR作为金标准,苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法和苯唑西林微量肉汤稀释法检测出MRSA均为32株,敏感度和特异度均为88.9%和100%;E试验检测出MRSA为33株,敏感度与特异度分别为88.9%、87.5%;PBP2a乳胶凝集法检测出MRSA 29株,敏感度与特异度分别为80.5%、100%.结论 PBP2a乳胶凝集法比上述试验报告周期缩短24 h,是一种快速、简便、特异度好且便于临床试验室推广开展的检测MRSA方法.
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| 2019 | 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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