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硒蛋白S过表达载体的构建及其在肝癌细胞SMMC7721中的表达鉴定

吴繁;刘威龙;周伯平;艾书玲;陈心春;祝葆华

摘要: 目的:构建硒蛋白S基因(SELS)真核表达载体pCMV-SELS,转染肝癌SMMC7721细胞,实现 SELS 在 SMMC7721中的成功过表达。方法通过基因克隆技术将 SELS 基因的完整ORF插入真核表达载体pCMV-3tag-3a(+),得到阳性真核表达质粒pCMV-SELS,将其瞬时转染到肝癌SMMC7721细胞中,利用RT-PCR与Western blot方法验证SELS的过表达水平。结果成功构建了真核表达质粒pCMV-SELS,将其瞬时转染SMMC7721细胞后24 h,收集细胞进行RT-PCR和Western blot检测,结果显示:与阴性对照组pCMV-3tag-3a(+)转染组相比,实验组pCMV-SELS细胞中SELS的mRNA和蛋白表达水平均有显著升高,两组比较具有统计学差异(P<0.05)。结论成功构建真核表达载体pCMV-SELS,并实现了SELS基因在SMMC7721细胞中的过表达。

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