异基因骨髓移植小鼠供体骨髓细胞在受体内的分布及淋巴细胞供受体来源比例分析

目的观察小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后供体骨髓细胞在受体内的分布以及嵌合体内T、B淋巴细胞增殖分化规律.方法以绿色荧光蛋白(GFP)转基因C57BL/6J(H-2b)小鼠为供体,以137Cs 5.5Gy×2照射的BALB/c(H-2d)小鼠为受体,分别于移植后3天(+3天)、+7天、+21天、+35天和+70天取外周血、骨髓、胸腺、脾脏、肠集合淋巴结及肝脏,用流式细胞仪和荧光显微镜观察供体来源的骨髓细胞分布.用藻红蛋白标记的抗CD4、抗CD8、抗B220抗体检测+21天小鼠体内骨髓、外周血及其他免疫器官中T、B淋巴细胞的构成比例.结果①+3天、+7天供体骨髓细胞在受体脾脏中分布多,分别为(1.06±0.02)%、(76.60±1.80)%;骨髓中分别为(0.37±0.06)%、(39.70±5.38)%.②+21天受体骨髓、脾脏、淋巴结、胸腺及外周血中供体细胞达60%～90%.③+3天受体肠集合淋巴结中供体骨髓细胞达(0.36±0.04)%,与受体骨髓中供体骨髓细胞的比例相当.结论①allo-BMT后早期供体骨髓细胞可分布到受体的骨髓、脾脏、肠集合淋巴结中,脾脏中多.②+21天受体内骨髓及其他免疫器官以供体细胞为主.③受体肠道集合淋巴结也是移植后供体骨髓细胞的早期寄居点和B淋巴细胞增殖后的迁移部位.

利用SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR方法检测白血病患者RbAp46基因的表达

目的探讨白血病患者骨髓细胞RbAp46基因的表达水平.方法建立实时定量RT-PCR方法,利用SYBR Green Ⅰ染料检测140例急性白血病(AL)、13例慢性粒细胞白血病(CML)慢性期和7例CML急变期患者以及32例非白血病患者骨髓细胞RbAp46基因的表达水平.结果初诊与复发AL患者骨髓中RbAp46基因表达水平的M估计值分别为178.23和213.65,明显高于完全缓解组和对照组(分别为85.89和88.08);CML慢性期组M估计值为58.27,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而CML急变期组M估计值为173.24,明显高于CML慢性期组和对照组.98例初诊AL中除M2、M4亚型M估计值(62.63,130.67)与对照组相比差异无统计学意义外,余均明显高于对照组.初诊AL中RbAp46基因表达水平与bcr/abl、PML-RARα、mdrl基因的表达无相关性,但与WT1基因的表达水平呈正相关,与AML1/ETO融合基因表达呈负相关.结论RbAp46在AL初诊、复发及CML急变期患者骨髓细胞中高表达,可能参与白血病的发生.

HLA相合同胞异基因造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病第1次慢性期51例分析

目的评价HLA相合同胞异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗第1次慢性期(CP1)慢性粒细胞白血病(CML)的疗效.方法CML-CP1患者51例,采用全身照射加环磷酰胺(TBI/Cy)或白消安加环磷酰胺(Bu/Cy)的预处理方案.移植方式为HLA相合同胞异基因外周血造血干细胞移植(PBSCT)28例,骨髓移植(BMT)23例.中位随访时间1434(60～4062)d.结果造血重建50例(98.0%),急性移植物抗宿主病(aGVHD)35例(68.6%),其中Ⅱ～Ⅳ度11例(21.6%),慢性GVHD(cGVHD)17例(37.8%),移植相关死亡8例(15.7%),复发5例(9.8%),5年无病生存率(DFS)为(79.2±6.4)%.两种预处理方案的5年DFS、死亡率及移植相关并发症差异均无显著性(P值均＞0.05),但Bu/Cy组复发率低(P＜0.01).两种移植方式的5年DFS、复发率及死亡率差异均无统计学意义(P值均＞0.05),但allo-PBSCT组cGVHD发生率高(P＜0.05).结论allo-HSCT治疗CML CP1疗效良好.预处理方案和移植方式对CML-CP1患者DFS无显著影响.供者淋巴细胞输注是治疗移植后复发的有效方法.

猕猴单倍体相合非清髓造血干细胞联合间充质干细胞移植的实验研究

目的用非清髓预处理建立猕猴单倍体相合造血干细胞移植(HSCT)模型,研究间充质干细胞(MSC)在单倍体相合移植中的作用.方法采用健康、单倍体相合的猕猴亲子配对,受者非清髓性预处理用氟达拉滨+环磷酰胺+60Co(200 cGy)全身照射+兔抗人胸腺细胞球蛋白,移植物抗宿主病(GVHD)预防用环孢菌素A、霉酚酸酯、抗CD25单抗.实验分为单纯造血干细胞(HSC)移植组和HSC联合MSC移植组;检测供受体嵌合水平,观察造血恢复、GVHD等情况.结果单倍体相合的子代猕猴采用非清髓预处理方案,可获稳定植入.比较了单纯非清髓HSC移植组和HSC联合MSC移植组的造血恢复,发现造血恢复时间主要与嵌合状态有关;MSC可促进植入;相同条件下,HSC联合MSC移植组更容易形成供受者混合嵌合;GVHD的发生率低.结论成功建立了猕猴非清髓性单倍体相合HSCT的模型,非清髓HSCT联合MSC可能在单倍体相合移植中有较好效果.

间充质干细胞对脐血CD34+细胞体外扩增和黏附分子表达的影响

目的研究间充质干细胞(MSC)对脐血CD34+细胞体外扩增能力和黏附分子表达的影响.方法从正常人骨髓中分离扩增MSC,通过免疫表型和向成骨细胞及脂肪细胞分化能力对其鉴定;将脐血CD34+细胞接种到MSC或其他培养液中,比较不同培养条件对造血细胞扩增能力、集落形成能力及黏附分子表达的影响.结果MSC表达Thy-1、SH2、SB10、CD44、CD13、CD49e和CD29,不表达CD34、CD45、HLA-DR、CD14和CD31,经过诱导可以向成骨细胞和脂肪细胞分化;实验组在MSC和细胞因子作用下,扩增8 d后有核细胞、CD34+、CD34+CD38-、CD34+CD62L+细胞和CFU-Cs分别扩增145.57±17.89,37.47±13.78,69.78±50.07,10.74±5.89和20.73±5.54倍,均显著高于对照组;扩增后CD34+细胞的ALCAM、VLA-α4、VLA-α5、VLA-β1、HCAM、PECAM和LFA-1表达较扩增前无明显变化,虽然ICAM-1和L-选择素表达下降,但实验组CD34+CD62L+和CD34+CD54+细胞的绝对数显著增加.结论MSC可为造血干细胞体外扩增提供适宜的微环境,有助于抑制HSC分化并保持其造血重建潜能和归巢能力.

细胞周期蛋白在难治性白血病中的表达

目前已有较多资料证实cyclin在实体肿瘤中呈高表达.我们检测了cyclin在急性白血病(AL)中,特别是复发难治性AL中的表达情况.报道如下.

急性白血病患者p15与p16基因甲基化检测及mRNA表达水平的定量分析

近年研究发现肿瘤细胞中存在DNA甲基化分布异常.即在肿瘤细胞中同时还存在基因组某些区域,特别是在一些抑癌基因的启动子区域高甲基化现象.抑癌基因启动子及转录起始区高甲基化可能也是导致抑癌基因失活和细胞恶性转化的机制之一[1].抑癌基因p15(CDK2B)和p16(CDK2A)均位于人类9号染色体短臂(9p21),编码两种细胞周期依赖性激酶(CDK)抑制性蛋白,参与细胞增殖与分化的调节[2,3].为探讨p15与p16在白血病细胞的甲基化状态及与表达水平的关系,我们应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术检测40例初诊急性白血病(AL)患者p15和p16甲基化状态,同时用荧光实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-QPCR)技术检测p15和p16基因mRNA表达水平.

利用改良抑制消减杂交方法建立再生障碍性贫血CD4+T细胞的基因差异表达文库

目前发现T细胞介导的免疫在再生障碍性贫血(再障)发病机制中起重要作用,并且已有多个独立的研究小组从再障患者外周血及骨髓中成功分离出能引起造血功能衰竭的致病相关性T细胞克隆,并证实其表型为CD4+T细胞[1,2],但这些T细胞异常增殖、活化及抑制机体造血功能的具体机制仍不清楚.我们通过改良抑制消减杂交的方法,建立CD4+T细胞的差异基因表达文库,为揭示再障病理损伤的机制提供线索.

急性白血病患者AML1a基因的表达

AML1基因又称为CBFα或RUNX1,其编码的产物是一种重要的转录因子,参与体内多种重要物质转录表达的调节.AML1功能缺失影响胚胎期定向造血[1],并在急性白血病(AL)的发生和发展中起着重要作用[2,3].AML1a是AML1的一种选择性剪接体,缺乏正常的转录调节功能,且具有更强的靶基因亲和力,能干扰AML1的正常功能,可能与AL的发生、发展有关[4].我们应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对AL患者AML1基因的表达进行研究,从分子水平探讨该基因在AL发生中的作用机制.

造血干细胞移植配型中HLA分型方法的研究进展

移植物抗宿主病(GVHD)是造成异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)和器官移植失败的关键因素之一,而移植前选择供受体HLA合适的配型则是减弱和减轻移植排斥反应的重要措施.随着无关供受体移植数量的逐年增加以及HLA新等位基因的不断发现(已发现1900多个等位基因),势必要求建立一种快速、特异、高分辨、低成本、大规模及智能化的新型HLA分型技术平台,因此,HLA分型技术为适应这一现状而取得了飞速发展.我们对近年出现的几种HLA分型策略作一概述.

β2微球蛋白在恶性血液病中的临床意义

β2微球蛋白(β2-MG)是HLA Ⅰ类分子中非主要组织相容性复合物(MHC)编码的轻链部分,是一种相对分子质量为11.8×103的蛋白质,基因定位于第15号染色体,由于其分子量小,电泳显带在β2区而得名.它为细胞膜上组织相容性抗原的一部分,与HLA分子分离释放到体液中的β2-MG经血液及淋巴循环到肾小球被自由滤过,但几乎全部被近曲小管以胞饮形式摄取,在局部被代谢降解为氨基酸供机体再利用.机体所有的有核细胞都能不同程度地产生β2-MG,除成熟的红细胞和胎滋养细胞外其他细胞均含有β2-MG.β2-MG以间皮细胞和上皮细胞合成较多,主要由淋巴细胞产生.健康人β2-MG的合成速率较为恒定,约为0.13mg·kg-1·h-1.近年来的研究表明,在几乎所有的恶性血液系统疾病中均能观察到患者血清β2-MG的显著升高.此外,在肾功能受损、肿瘤、自身免疫疾病患者体内也能观察到血清β2-MG升高.β2-MG在临床上已被广泛用于许多疾病尤其是血液系统疾病的分期与预后评价.

原发性老年急性髓系白血病的特点及疗效分析

为了解中国老年急性髓系白血病(AML)患者的临床、生物学特点和治疗现状,我们总结分析了我院收治的49例初治原发性老年AML的特点及治疗情况.

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非法医学期刊曝光台