祖孙三代携带额外小染色体

先证者 男,5个月,第2胎,足月顺产,母乳喂养.查体:身高67cm,体重6kg.头围44cm,前囟未闭,毛发黄软,额前凸.眼窝凹陷,眼距宽,双侧小眼球,小角膜(右侧角膜不易看到),左眼有轻度光感,视物不能,泪腺发育正常.听觉良好.舌偶外伸.X光线示脊柱无侧弯.B超检查各脏器发育正常.脑CT示颅内无病灶.四肢、外生殖器发育与同龄儿无差异.染色体检查:全部核型为47,XY,+mar.额外小染色体为等臂中位着丝粒小染色体,银染法显示额外小染色体有两对NORs存在,对称地排列在着丝粒两端.G显带小染色体整臂深染.C显带示双着丝粒,且着丝粒明显增大.实验室检查:弓形虫抗体(TOAb IgG)阳性、巨细胞病毒抗体(HCMVIgG)阳性.红细胞超氧化物歧化酶1540 U/gHb(正常参考值1510 U/gHb).

Turner综合征伴9号染色体臂间倒位一例

患者 女,19岁.学生,未婚.因身材矮小、原发性闭经就诊.体检:面容呆板,反应迟钝.女性外表,身高140 cm,蹼颈,颈后发际低,盾状胸,两乳头间距较宽,乳房发育差.外阴幼稚.B超提示:子宫小,卵巢萎缩.患者智力较差、记忆力差.

t(13;18)伴精神发育迟滞一例

患者 男,15岁.自出生6个月起开始发热持续3年,一直未查明原因.精神发育迟滞,现今仍不会说话,只能发单音,流涎,眼斜视,颈蹼,耳大并且低位,脸不对称,背弓,身材偏矮,对痛感无反应.系第4胎,其他家庭成员表型正常,其母孕期曾因胃病服用草药(药名不详).

急性髓细胞白血病中胰岛素样生长因子-2基因印迹的研究

目的:了解急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)中胰岛素样生长因子-2(insulin-like growth factor-2,IGF-2)基因的印迹状态.方法:根据IGF-2基因第9外显子具有ApaⅠ位点多态性,利用聚合酶链反应(PCR)结合限制性长度多态性技术,对26例AML患者骨髓细胞IGF-2基因进行杂合子筛选,并进一步检测杂合子个体该基因的印迹丢失(loss of imprinting,LOI).结果:11例AML患者为杂合子信息个体(11/26),其中8例为双等位基因表达,即发生了LOI(8/11).结论:IGF-2基因的印迹丢失可能参与急性髓细胞白血病的发生和发展.

2型糖尿病患者脂蛋白脂酶基因PvuⅡ酶切多态性的观察

目的:探讨脂蛋白脂酶基因变化与2型糖尿病及其脂质代谢的关系.方法:采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法,对127例2型糖尿病患者和125名正常对照者脂蛋白脂酶基因第6号内含子PvuⅡ酶切位点进行多态性分析.结果:脂蛋白脂酶PvuⅡ酶切位点的"P+"等位基因和不含酶切位点的"P-"等位基因在糖尿病病例组和对照组的分布频率分别为"P+"69.3%、63.6%,"P-"30.7%、36.4%;3类基因型的分布各为P+/P+48.0%、44.8%,P+/P-42.5%、37.6%和P-/P-9.45%、17.6%.两组人群在基因型和等位基因频率上均无显著的统计学差异.我国人群脂蛋白脂酶PvuⅡ酶切位点多态性的分布频率与日本人群相近,与欧美人群差异较大.结论:我国汉族人群脂蛋白脂酶PvuⅡ酶切多态性与2型糖尿病无明显关联;该酶切位点多态性具有明显的种族差异.

中国广州汉族人群六个STR位点的调查

目的:了解广州汉族人在vWA31A等6个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点法医学的有关数据.方法:运用STR-PCR、4%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,结合荧光DNA自动检测技术,对汉族人群6个STR位点的等位基因频率和基因型频率进行了调查,并与其他种族或人群的等位基因频率进行了比较.结果:6个STR位点是vWA31A、TH01、F13A01、FES、TPOX和CSF1PO,所有位点的结果均符合Hardy-Weinberg平衡,且各位点等位基因间无相关性,除vWA31A外,其它5个位点的杂合度均低于白种人和黑种人.6个位点的累积DP=0.99999,PE=0.9708,pM=1.059×10-5.结论:所得到的等位基因频率等数据可为中国汉族人群法医个人识别、亲子鉴定及遗传学研究提供依据.

染色体非平衡易位的分子细胞遗传学研究

目的:应用荧光原位杂交技术对1例染色体异常患者进行分析.方法:对经细胞遗传学提示的染色体结构异常的病例,选用1、18号染色体探针池进行涂染.结果:证实患者由于染色体不平衡易位导致部分单体和部分三体.结论:1q42-qter、18q22-qter可能与心脏的发育等胚胎发育过程有关.

用荧光原位杂交技术检测乳腺癌细胞系第6号染色体长臂缺失

目的:研究10例乳腺癌细胞系的6号染色体长臂缺失.方法:运用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)技术,并采用37个分布于6q12-6q27的YAC探针和6号染色体着丝粒特异性探针,检测了10例乳腺癌细胞系的6号染色体长臂.结果:在5例细胞系中发现6q12-6q27的大段缺失,1例发现有6q25-q27的小段缺失.在含有多个细胞亚群的两例细胞系中,6q的缺失仅见于6号染色体多倍体的细胞.在1例细胞系中检测到6q21-q22.2部位有DNA扩增.结论:6q25-q27是乳腺癌的常见缺失区.6q的缺失可能是继发性改变.

多指(趾)家系疾病相关基因排除性定位分析

目的:定位一个常染色体显性遗传多指(趾)家系中的疾病相关基因.方法:采用已经报道的7号染色体上7个微卫星DNA标记及2号染色体上1个微卫星标记对该家系进行连锁分析.结果:7号染色体上7个位点的Z值均小于1,与该家系致病基因不连锁;2号染色体上的1个位点与致病基因明显不连锁.结论:该家系的致病基因很可能是一个新基因座.

人类血管内皮细胞一氧化氮合成酶基因启动子序列的功能分析

目的:血管内皮细胞一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,ecNOS)在体内催化一氧化氮合成.为研究一氧化氮合成酶基因转录的调控,对一氧化氮合成酶基因启动子序列进行功能分析.方法:以血管内皮细胞核提取物为材料,采用凝胶迁移实验和DNaseⅠ足迹法实验.结果:启动子序列有3个区域与蛋白/转录因子结合.其中(-106～-88)GC含量丰富,为转录因子SP1所结合;另外两个区域(-79～-64)和(-58～-44)覆盖文献报道中CTCF转录因子的结合区,但结合方式与CTCF不一致.结论:(-79～-64)和(-58～-44)区域可能结合有新的未曾报道的转录因子或存在SP1类似蛋白/SP1多聚体的不完全特异性结合.

CDKN 2/p16基因甲基化失活与肺癌关系的研究

目的:研究CDKN2/p16基因5′端调控序列区CpG岛甲基化的状态与肺癌发生发展的关系.方法:采用甲基化敏感性核酸内切酶酶切基因组DNA的方法,对89例肺癌的CDKN2/p16基因进行了Southern杂交分析.结果:89例肺癌发现该基因甲基化21例,甲基化频率为23.6%(21/89),其中17例发生于42例P16蛋白阴性表达的患者.结论:CDKN2p/16基因5′端CpG岛甲基化可能是该基因失活的重要机理,参与肺癌的发生发展过程.

用反义寡核苷酸阻断热休克蛋白70表达诱导卵巢癌细胞凋亡

目的:观察特异性热休克蛋白70(heat-shock protein,HSP)反义寡核苷酸阻断卵巢癌细胞的HSP70表达,及其对卵巢癌细胞生长和增殖的影响.方法:用胎盘蓝拒染法计算卵巢癌细胞的生长抑制率,Giemsa染色法从形态上了解凋亡的发生,用琼脂糖凝胶电泳进一步检测发生凋亡的特征性DNA降解,流式细胞仪定量分析凋亡发生率及周期特异性.结果:用HSP70反义寡核苷酸处理的卵巢癌细胞表现出明显的生长抑制,在形态学上显示出细胞凋亡的特征,琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA降解的特征性DNA阶梯图.流式细胞仪检测表明1～20μmol/L的反义寡核苷酸能诱导8.3%～41%的卵巢癌细胞发生凋亡,主要是G1期和S期细胞,凋亡发生随药物剂量及药物作用时间增加而增多.结论:HSP70反义寡核苷酸能抑制卵巢癌细胞的生长并诱导其发生凋亡.

利用辐射杂种板(GB4)精细定位人类新基因H-RalGDS于染色体9q34.1

目的:H-RalGDS基因是我们新近分离与克隆的人类新的Ras相关基因,是鼠Ral鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(RalGDS)在人类的同源基因.利用辐射杂种板(radiation hybrid, RH)制图法进行该基因的精细定位.方法:根据H-RalGDS基因cDNA的3′不翻译区设计正反向引物,PCR扩增人/鼠辐射体细胞杂种板(radiation hybrid Genebridge 4 panel),并将杂种板每一细胞株的PCR结果按一定方式统计后输入WI/MIT Radiation Hybrid Mapper的相关网址,进行H-RalGDS基因的RH制图和整合分析.结果:RH制图将H-RalGDS基因定位在9号染色体的骨架图上.定位附近的Marker顺序为9pter--WI-6083--H-RalGDS-WI1405--9qter,经文献检索及进一步与物理图、遗传连锁图及细胞学图谱的整合分析,将其精细定位于染色体9q34.1区带的基因位标SURF5与RPL7A之间.结论 H-RalGDS基因的定位不仅有助于人染色体9q34区带的精细基因图与细胞遗传图的构建,而且也表明用RH制图法定位于人类新基因既简便、易行、可靠,又可为丰富染色体上的基因定位提供新的信息.

血管紧张素原及血管紧张素转化酶基因多态性与高血压之间的关系

目的:研究血管紧张素原基因(angiotensinogen, AGT)第2外显子M235T等位基因的变异及血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)基因多态性、在中国正常人群及原发性高血压(essential hypertension,EH)患者中的频率分布,分析基因在EH中的发病作用.方法:应用多聚酶链反应结合限制性酶切方法,对95名健康体检者和87例EH患者进行AGT基因突变的检测.PCR后直接电泳检测ACE基因多态性.结果:EH患者T235等位基因频率(0.45)高于对照组(0.33),P＜0.05.在男性EH患者与男性对照组中差别更为明显(P＜0.01).在有家族史的EH患者中,ACE D等位基因频率高于正常对照组(0.59 vs 0.41,P＜0.05).结论:AGT基因的突变与EH的发病具有相关性,对男性EH影响可能更大;在有家族史的高血压患者中,ACE D等位基因与EH相关联.

妊娠中、晚期300例胎儿脐血染色体核型分析

目的:分析妊娠中、晚期胎儿脐血染色体核型,了解该时期异常核型出现的频率、类型及与各种产前诊断指征的关系.方法:300例有产前诊断指征的孕妇,在妊娠18～38孕周时穿刺胎儿脐带血管,抽脐血查染色体核型.结果:发现异常核型23例(7.7%),其中妊娠中期检出异常8.6%(15/174);妊娠晚期6.3%(8/126),P=0.77.三体为主要的染色体异常,占异常核型的60.9%(14/23).其中21三体占39.1%(9/23),平衡易位次之,占21.7%(5/23).高龄孕妇21三体儿的检出率为5.4%(5/92);非高龄组1.9%(4/208),P=0.26.胎儿宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)组异常核型检出率高达26.3%(5/19).平衡易位组为38.5%(5/13).结论:在有产前诊断指征的孕妇,胎儿染色体异常的发生率为7.7%,染色体三体、尤其21三体是妊娠中、晚期主要的异常核型,是高龄以及IUGR常见的染色体异常.

血管脂肪瘤一家系八例

先证者(Ⅱ8) 男,35岁.19岁时发现右上肢前臂屈侧突出于体表的多发肿物,无痛及痒感,无破溃,不影响肢体活动,由于肿物日渐增多,波及胸腹部,故来就诊.体检:发育正常,营养中等,上下肢及胸腹部突出于体表多发性肿物,与皮肤颜色基本相同,边界清,质地软,圆形或呈分叶状,压之桔皮样.直径5～50mm,有的融合成片,触痛较轻,共40个.诊断:体表多发肿物.取前臂及胸背部肿物经病理检查证实为血管脂肪瘤.

Gaucher's综合征二例

例1 男,7岁,浙江人,因反复多发性骨折3年,左上臂肿胀疼痛5天入院.患儿3年多来无明显诱因间歇出现全身各处骨骼的肿胀疼痛,经摄片均证实为骨折.

甲基丙二酸血症二例

例1 男,生后5天.因呼吸急促2天,拒乳,昏睡,疑为"新生儿败血症"入院.查体:T35.3℃,R36次/分.反应低下,哭声无力,面色青紫,三凹征阳性, 肝肋下1.5cm,肌张力增强,以下肢为重.

单纯型遗传性痉挛性截瘫一家系四例

先证者(Ⅲ4) 男,23岁.智力、发育正常.16岁时走路双腿酸软乏力,不能登高.走路时双足内缘抬高,外缘下垂,呈剪刀步态.症状缓慢加重,于1998年来我院就诊.体检:Bp120/90 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),发育正常,智能及语言正常.眼部及心、肺检查正常.双下肢肌张力增高,腱反射亢进,双侧病理征阳性.

寻常性鱼鳞病一家系

先证者 女,22岁.患者出生后约8～10月发病,四肢伸侧皮肤干燥,覆以鱼鳞状鳞屑,症状夏季减轻,冬季加重,皮肤易发生皲裂,从发病到成人期症状无明显减轻,经皮肤病专家确诊为寻常性鱼鳞病,父母非近亲结婚.

良性家族性婴儿惊厥一家系

先证者(Ⅴ2) 男,7个月.反复发作惊厥4个月.患儿于3个月时开始无明显诱因出现发作性双眼球上翻,四肢强直伸位,双手握拳,呼之不应,有时为四肢强直阵挛及口角面部抽动,可伴有口唇发绀,大小便失禁,每次发作持续30秒～2分钟.

Machado-Joseph病的选择性病理改变及分子生物学基础

Machado-Joseph病(Machado-Joseph disease,MJD)是一种常染色体显性遗传的神经变性病,具有突眼、眼震、进行性共济失调、锥体系和锥体外系征,以及肌肉萎缩等临床表现,并有早现倾向.国际疾病分类学已将MJD归入脊髓小脑共济失调(spinocerebellar ataxia,SCA),称MJD为脊髓小脑共济失调Ⅲ型(spinocerebellar ataxia type 3,SCA3),是SCA中常见的病种[1,2].尽管各国对MJD的研究取得了丰硕的成果,但MJD高度选择性的病理改变的形成机理一直不为学术界所认识,学者们正在为此探讨.

血管紧张素原基因多态性与心血管疾病

随着人们对肾素血管紧张素系统在人体生理及病理作用认识的深入,由遗传决定的该系统的基因多态性对心血管疾病的影响也引起了人们的重视.血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)作为体内唯一的血管紧张素前体,其基因多态性对心血管疾病的影响也是近年来人们研究的热点之一,现将这方面的研究作一综述.

单核苷酸多态性研究及应用

人类基因组计划诣在解读人类分布于24条染色体上的30亿对碱基,它们涵盖了人的所有生存信息.面对如此庞大的信息量,人类基因组测序的策略是以作图为基础,将染色体分为较易分析操作的结构区域.

从琼脂糖电泳凝胶中回收DNA的一种简便方法

目的:构建一种简便装置,以高效回收琼脂糖电泳凝胶中的DNA.方法:利用1.5ml微量离心管、1ml移液枪头、尼龙网膜和透析膜,做成一个巧妙且简单的DNA回收装置.以分子量参照物λDNA/EcoR I+HindⅢ为验证样品,对其部分条带进行回收.用凝胶电泳和DNA连接实验鉴定回收产品的质量.结果:在电压降为3V/cm、时间为0.5 h的电洗脱条件下,分子量标记中564bp条带的终回收率高达80%,21 227bp条带的回收率约为30%.DNA回收产品质量优良.结论:从琼脂糖电泳凝胶中回收目的DNA,这是一种简便、快速、高效且廉价的方法.

甲基化特异性PCR检测Prader-Willi综合征

目的:探讨一种高效、快速检测Prader-Willi综合征(Prader-Willi syndrome,PWS)的方法.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSPCR),其作用原理基于DNA经亚硫酸氢钠处理后,来自父方非甲基化序列的胞嘧啶转变为尿嘧啶,而来自母方甲基化序列则保持不变,随后用具有高度特异性的引物进行扩增.结果:PWS患者的DNA经亚硫酸氢钠处理后,扩增仅能得到来自母方甲基化序列174 bp的产物,与用PW71B印迹杂交甲基化分析结果一致,与临床诊断相符,确诊为PWS.结论:MSPCR可检测由目前已知3种机理导致的PWS,是一种有效的首选筛查方法.

冰冻组织特定区域的RNA快速提取及其RT-PCR分析

目的:为减少RNA提取过程中不同细胞和组织间的交叉污染,提高逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)结果的特异性和可靠性.方法:建立冰冻组织特定区域的RNA快速提取及RT-PCR检测技术.首先,制备5μm和20μm的连续冰冻切片,前者用于常规组织学染色和针对靶基因产物的免疫组织化学染色.依观察结果,在20μm的切片上,分离某一特定区域做快速RNA提取和RT-PCR分析.结果:该方法能在1小时内完成微量组织的RNA提取,并在6小时内获得RT-PCR结果.与常规RNA提取法比较,可有效排除因细胞间污染所致的假阴性或假阳性结果.结论:该方法适用于在多种类型组织混杂的标本内检测某一特定细胞群体和各群体间的基因表达以及表达差异,是对现有RNA提取和RT-PCR检测技术的重要补充.

五个国际著名检索系统收录<中华医学遗传学杂志>