168例精神分裂症患者的细胞遗传学分析

1 对象与方法1.1 对象患者组168例均系我院住院的精神分裂症患者,其中男性132例、女性36例,年龄16～56岁,平均年龄29.24岁,其中16～25岁74例(44%),26～35岁58例(34.5%),36～45岁24例(14.3%),46岁以上12例(7.1%).病程:一年以内39例(23.2%),1～5年62例(36.9%),6～10年39例(23.2%),11～15年12例(7.1%),16～20年13例(7.7%),20年以上3例(1.8%).家族史:有阳性家族史者67例(39.9%),无阳性家族史者101例(60.1%).诊断分型:偏执型72例(42.9%),单纯型48例(28.6%),混合型36例(21.4%),青春型11例(6.5%),紧张型1例(0.6%).对照组31名均系我院健康职工,均无精神病家族史,其中男性16名,女性15名,年龄22～58岁,平均年龄32.6岁.

染色体核型45,XY,-14,-21,+t(14;21)携带者生育严重畸形后代

患者男,30岁,结婚3年其妻生育1愚型女儿,患者为粮库工作人员,吸烟,喝酒,患有肠炎.其妻,女,28岁,天然气仪表操作人员,身体健康,孕4个月左右患感冒1次,夫妇非近亲结婚.其女10个月,发育缓慢,智力低下,颈短,前额扁平,眼裂大,眼距宽,内眦下斜,鼻梁低,鼻孔向上,嘴小,唇厚而外翻,张口伸舌,左手通贯掌.

染色体异常核型六例

例1 女,28岁,结婚3年,分别于孕2月左右自然流产2次.夫妻非近亲结婚,孕期无患病及服药史,无有毒有害物质及放射线接触史,TORCH系列检查、妇科检查无异常.表型、智力正常.月经不规律,3～4个月1次,每次2～3天.外周血淋巴细胞培养,G显带分析染色体核型为:46,XX/46,XX,t(2;17)(2qter→2p23∷17q25→17qter;17pter→17q25∷2p23→2pter),见图1.丈夫表型、染色体核型均正常.

孕妇血清标记物唐氏综合征筛查发现46,XY,t(13;15)(q22;q25)一例

患者 26岁,G1P0, 孕16周时取静脉血2 mL,采用时间分辨免疫荧光法进行唐氏综合征筛查(试剂由美国PE公司提供),结果显示21-三体综合征风险概率1∶250.

半叶性全前脑胎儿染色体三倍体一例

患者 32岁,G2P0+1,于2006年11月3日17+2周孕因胎儿宫内畸形前来我室咨询.本次孕前及孕期否认不良因素接触史,但妊娠早期因腹痛服用保胎药"保胎灵"治疗,时间剂量不详.

新生儿染色体异常与表型的关系

我们对2002年1月至2006年11月在本院出生的144 例有特殊表型指征的新生儿进行细胞遗传学检查,探讨新生儿的一些特殊的表型指征与染色体畸变的关系.1 对象与方法1.1 对象 144例新生儿(女性87例,男性57例)来自本院产科和新生儿科,因可疑愚型面容、体表或内脏畸形、皮纹异常等临床指征者而进行染色体检查,并对部分染色体异常患儿的父母进行体检和外周血染色体检查.

常染色体异常核型两例

例1 男,1岁8个月,因智力较同龄儿低来院检查.查体:智力低,心肺(-),余无异常.例2 男,1天,疑染色体病来院.查体:发热,皮肤瘀癍.细胞遗传学检查:常规染色体培养,G带,计数50个细胞,分析5个染色体核型.例1染色体核型为46,XY,17p+.例2染色体核型为46,XY,r(12)/45,XY,-12嵌合体.

46,XY,t(20;22)一例

患者男,30岁.其妻怀孕两次,均于孕50～60天自然流产.夫妇体健,表型及智力均正常,非近亲结婚,无不良因素接触史.细胞遗传学检查:取患者夫妇外周血淋巴细胞培养,常规方法制片,G显带分析,镜下计数40个中期分裂相,分析15个,患者核型为46,XY,t(20;22)(20qter→20pter∷22q12→22qter),其妻核型正常.

138例染色体多态的细胞遗传学分析及临床表现

染色体多态是各种染色体上恒定的微小变异,表现在结构及带纹强度上的差异,主要包括染色体着丝粒区、D组和G组染色体短臂和着丝粒区及副缢痕、Y染色体长臂染色区域长度的变异及9号染色体臂间倒位等.染色体多态按孟德尔方式遗传,通常不表现表型效应或病理意义.但我们在临床中发现染色体多态常伴有流产、早产、死胎、分娩智力低下儿、不育等,进行相关的临床研究讨论,对医学遗传咨询具有指导意义.

染色体平衡易位两例

例1 女,23岁,结婚3年共孕3次,均在2个月左右无明显诱因自然流产.夫妻表型及智力正常,非近亲结婚,怀孕期间未接触放射性及有毒、有害物质.细胞遗传学检查:抽取夫妇外周血进行淋巴细胞培养,制片,G显带,计数30个分裂相,分析10个染色体核型,核型为46,XX,t(14;18)(14pter→14q24∷18q12→18qter;18pter→18q12∷14q24→14qter).其夫染色体核型正常.

四川汉族人群Y染色体单倍组及其特点的研究

目的 建立四川汉族人群Y染色体单倍组的分布资料.方法 应用PCR-限制性片段长度多态性、变性高效液相色谱技术、DNA测序方法对341份四川汉族男性标本Y染色体18个二态位点进行基因分型.结果 共观察到14个Y 染色体单倍组,其中H2、 H4 单倍组在四川汉族中被首次证实,N*、H14单倍组为中国人群首次报道.四川汉族人群Y染色体单倍组分布频率与已报道的中国南方汉族人群相比差异具有统计学意义.结论 该研究获得了更为准确的四川汉族人群的Y染色体单倍组分布频率,为生精障碍、前列腺癌和睾丸癌等男性特异性疾病的Y连锁遗传因素研究奠定了基础.

喉癌细胞中S100A8新的相互作用蛋白质的鉴定

目的 探索S100A8相互作用蛋白在喉癌发生、发展中的可能机制.方法 应用抗S100A8抗体通过免疫沉淀的方法从喉癌细胞系Hep-2中分离与S100A8相互作用的蛋白质.用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪分析目的蛋白条带.根据这些目的蛋白条带的肽指纹谱,用Mascot软件预测其相应的蛋白质.用P-Match 软件预测这些蛋白质的NF-kappa B结合位点.用免疫共沉淀方法证实其中一个蛋白质与S100A8相互结合的能力.结果 获得了4种与S100A8相互作用的新的蛋白质,它们分别是假想蛋白质LOC80154(hypothetical protein LOC80154)、MHC class Ⅰ HLA-B、T-box 1异构体C相似蛋白质(similar to T-box 1 isoform C)和肌纤维膜相关蛋白1(sarcolemmal associated protein 1).这4种蛋白质均具有NF-kappa B的结合位点,其中MHC class Ⅰ HLA-B是NF-kappa B通路中的一个成员, 我们首次证实该蛋白质具有结合S100A8的能力.结论 本研究获得的S100A8新的伴侣可能是NF-kappa B通路的成员.MHC class Ⅰ HLA-B与 S100A8的结合提示S100A8可能作为新成员与包括HLA-B在内的其他蛋白质在NF-kappa B通路中发挥作用.这些发现为进一步研究S100A8在喉癌发生中的分子机制提供了新线索.

18例闭经患者的分子-细胞遗传学研究

目的 探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)和高分辨比较基因组杂交(high resolution-comparative genomic hybridization,HR-CGH)技术在闭经研究中的应用价值.方法 17例原发闭经和1例继发闭经患者经常规妇科检查、B超及内分泌功能检查后,应用染色体核型分析,部分染色体异常患者采用FISH和HR-CGH技术相结合的分子-细胞遗传学检查诊断结果,并对其临床症状及发病机制进行了探讨.结果 17例原发闭经患者中,7例为46,XX 的正常女性核型;10例携带有异常染色体核型,所占比例为58.8%,其中3例为46,XY的女性患者,2例为45,X及45,X/46,XX的Turner's患者;其余5例均为携带有X染色体结构异常,包括X染色体部分单体、X等臂染色体和X/Y嵌合体等异常核型患者;1例继发性闭经患者为X染色体与常染色体易位的异常核型.结论 应用FISH 和HR-CGH技术与高分辨染色体显带技术,精确诊断患者的染色体核型,可为临床的诊断和治疗提供医学遗传学依据.

人胚胎干细胞系HUES4的培养和染色体核型分析

目的 建立人胚胎干细胞无动物源性饲养层培养方法,同时对长时间体外培养的人胚胎干细胞核型变化进行分析.方法 人胚胎干细胞系HUES4细胞分别培养于小鼠胚胎成纤维细胞和人包皮成纤维细胞饲养层,并对其干细胞特性进行鉴定;在培养传代过程中,收获P27、P34、P41和P44细胞进行染色体核型分析, P27细胞还进行DNA短串联重复序列多态性分析.结果 生长于人包皮成纤维细胞饲养层的HUES4细胞碱性磷酸酶染色以及SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81抗原阳性,SSEA-1抗原阴性.所检测的4代细胞中均见46,XY/46,XY,t(9;15)(q22;q26)核型嵌合现象,且异常核型百分比随传代次数增加有上升的趋势.结论 培养人胚胎干细胞的饲养层细胞可由无动物源性的饲养层细胞替代;长期体外培养有增加细胞染色体核型异常的风险.

泰国缺失型α地中海贫血1的产前基因诊断

目的 对携带泰国缺失型α地中海贫血1,可能生育α地中海贫血高危胎儿的夫妇进行产前基因诊断.方法 应用聚合酶链反应、DNA测序等方法对夫妇及胎儿DNA进行基因分析.结果 4个家系的孕妇均为泰国缺失型α地中海贫血1复合α地中海贫血2的Hb H病患者,5个家系的孕妇或丈夫为泰国缺失型α地中海贫血1杂合子;其配偶为东南亚缺失型α地中海贫血1杂合子.他们的胎儿检出2例Hb Bart's胎儿水肿综合征,1例Hb H病,4例α地中海贫血杂合子,2名正常.DNA测序分析证实PCR的检测结果.结论 泰国缺失型α地中海贫血1的产前基因诊断研究,对遗传咨询和地中海贫血产前基因诊断具有重要意义.

染色体22q11微缺失综合征的临床表现与荧光原位杂交诊断结果

目的 研究22q11微缺失综合征(22q11 microdeletion syndrome,22q11 DS)的临床特征与荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)诊断结果的意义.方法 评估临床表型,应用FISH技术检测外周血标本22q11区域的微缺失;对FISH结果和临床特征进行多因素Logistic回归分析.结果 64例疑似患儿中FISH检测微缺失为14例,阳性率21.9%.确诊患儿广泛存在多发畸形.建立了以面容异常(x1)、先天性心脏畸形(x2)、免疫问题(x3)为变量的FISH诊断结果(y)的Logistic回归预测方程:y＝-8.206+2.324x1+2.725x2+1.674x3,P=exp(y)/[1+exp(y)].结论 精确的临床评估可以初次筛选有22q11微缺失危险性的患儿,其FISH检查结果可通过Logistic回归方程进行预测.

AK078438基因克隆表达、组织分布和亚细胞定位

目的 研究AK078438基因的克隆表达、组织分布和在不同肿瘤细胞中的表达及该蛋白的亚细胞定位.方法 应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法扩增AK078438基因的全长开放阅读框(open reading frame,ORF),原核表达系统表达,亲和层析纯化该基因的融合蛋白,半定量RT-PCR方法在mRNA水平检测该基因在正常小鼠组织、肿瘤细胞以及间充质干细胞的分布.构建该绿色荧光融合蛋白的真核载体转染细胞,观察该蛋白在细胞中的定位.结果 AK078438基因全长ORF为1065 bp,编码355个氨基酸.mRNA水平上,该基因表达于小鼠的大脑、子宫、结肠、肾脏、睾丸和骨髓,在心脏、脾脏、肺、肝脏、胃中不表达.在小鼠结肠癌细胞株C26、黑色素瘤细胞株B16、小鼠Lewis肺癌LL/2,间充质干细胞中均有表达,在小鼠肝癌细胞系Hepa,小鼠骨髓细胞瘤NS-1中不表达.该蛋白定位于细胞质中.结论 对AK078438的蛋白表达、亚细胞定位、表达谱等分析为进一步研究该基因的功能奠定了基础.

抑制ECV304细胞内EOLA1基因表达后效应观察

目的 观察抑制人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞内内皮高表达脂多糖相关因子1 (endothelial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1,EOLA 1)基因表达后细胞生长的变化.方法 构建EGFP-EOLA1融合蛋白表达载体pEGFP-N2/EOLA1,转染ECV304细胞,G418压力筛选获得稳定表达株;设计靶点特异性的寡核苷酸,连接到经BamHⅠ和Hind Ⅲ酶切线性化的pSlincer3.1/H1质粒上.转染重组质粒到稳定表达EGFP-EOLA1融合蛋白的ECV304细胞,检测靶基因的抑制情况,观察EOLA1表达被抑制后细胞生长的改变.结果 抑制EOLA1表达后ECV304细胞生长明显减慢.结论 EOLA1基因在细胞内参与了细胞生长的调控.

PINK1基因多态位点IVS5-5G＞A可能增加中国人晚发性帕金森病的发病风险

目的 探讨PINK1基因第5外显子上游调控区IVS5-5G＞A多态位点与散发晚发性帕金森病(Parkinson disease, PD)发病风险的关联性.方法 对IVS5-5G＞A多态位点是否可能影响 mRNA 剪接进行了生物信息学分析.采用病例-对照的方法对382例散发晚发性PD病例和336名匹配的对照进行了PINK1基因IVS5-5G＞A多态与中国汉族人散发晚发性帕金森病的发病风险的关联研究.基因型分型采用聚合酶链反应,变性高效液相色谱和测序相结合的方法.等位基因频率和基因型频率分布差异的比较采用卡方检验.结果 生物信息学分析内含子区IVS5-5G＞A多态位点位于第5外显子剪接受点区域内,可能是影响基因表达的调控区功能性单核苷酸多态性.PINK1基因IVS5-5G＞A多态性与中国人散发晚发性PD发病风险之间存在有统计学意义的相关性(OR=1.95, 95%CI:1.29～2.94, P=0.0012).携有A等位基因的纯合子(AA)发病风险明显增加(OR=2.45, 95%CI:1.27～4.72, P=0.009).结论 研究结果证实PINK1基因IVS5-5G＞A多态性可能是中国人晚发PD的一个危险因素.

resistin基因过表达影响3T3-L1脂肪细胞的脂质代谢

目的 观察resistin基因过表达对3T3-L1脂肪细胞的脂质代谢、糖代谢的影响.方法 构建大鼠 resistin真核表达载体并转染3T3-L1前体脂肪细胞,获得稳定表达resistin基因的细胞株;采用油红O染色,观察脂肪细胞分化及脂质积聚情况;采用逆转录PCR技术,检测脂肪细胞分化标志基因及葡萄糖转运体4(glucose transporter 4, GLUT4)基因表达变化;采用全自动生化仪比色法,检测脂肪细胞内甘油三酯(triglyceride,TG)、游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)的含量变化.结果 (1) resistin基因过表达脂肪细胞中,脂滴出现时间提前,且细胞内布满了小而多的圆形脂滴;(2) resistin基因过表达脂肪细胞中,分化中、晚期标志基因C/EBPα、FAS的mRNA表达水平明显上调,分化早期标志基因Pref-1的表达则明显下调;(3)resistin基因过表达脂肪细胞中,胞质内TG、FFAs含量均显著增加;(4)resistin基因过表达脂肪细胞中,分化第2、4、8 d的GLUT4基因mRNA表达水平间无显著变化,与正常脂肪细胞中的表达水平差异也无统计学意义.结论 resistin基因过表达能够显著干扰3T3-L1脂肪细胞的脂质代谢,有助于肥胖和胰岛素抵抗的发生,而并不影响GLUT4基因的表达.

四氢生物蝶呤反应性苯丙氨酸羟化酶缺乏症在我国南北地区差异的临床初步研究

目的 通过对不同类型高苯丙氨酸血症(hyperphenylalaninemia,HPA)临床特点的分析,探讨我国南、北方四氢生物蝶呤(tetrahydrobiopterin, BH4)反应性苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase, PAH)缺乏症患者对BH4 的反应性.方法 (1)108例HPA患儿,男63例、女45例,平均年龄7.05个月.所有患者都进行口服BH4负荷试验,同时进行尿蝶呤谱分析、红细胞二氢蝶啶还原酶测定.对其中血苯丙氨酸(phenylalanine, Phe)浓度＜600 μmol/L者给予口服Phe-BH4联合负荷试验.(2)根据患儿父母双方祖籍,以长江为界将诊断为BH4反应性PAH缺乏症的患儿分为南、北两组.比较南、北方组BH4反应性PAH缺乏症患儿在BH4负荷试验中血Phe浓度的变化.结果 (1)HPA中诊断BH4反应性PAH缺乏症36人(33.3%),BH4无反应性苯丙酮尿症(phenlketonuria, PKU)49人(45.4%),四氢生物蝶呤缺乏症(BH4D)23人(21.3%).BH4反应性PAH缺乏症血Phe浓度8 h、24 h时分别平均下降了49.24%和65.35%.(2)36例BH4反应性患者分为南方组23人、北方组13人.南、北方组BH4反应性患儿服药后24 h时血Phe浓度均值分别为(217.02±189.03) μmol/L和(458.75±342.54) μmol/L(P＜0.05),而两者在服药后2 h、4 h、8 h、24 h时血Phe浓度下降的百分数差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 部分因PAH缺乏引起的PKU患儿口服BH4 20 mg/kg后24 h,血Phe浓度较服药前下降30%以上,其中绝大多数为轻、中度HPA(血Phe 120～1200 μmol/L),少数为经典型PKU(血Phe＞1200 μmol/L).本研究中我国南方组BH4反应性PAH缺乏症服药24 h时血Phe浓度较北方组低,但是南、北方患者对药物的总体反应性差异无统计学意义.

多巴反应性肌张力障碍GCH1基因突变分析

目的 探讨多巴反应性肌张力障碍(dopa responsive dystonia, DRD)三磷酸鸟苷环化水解酶Ⅰ基因(guanosine triphosphate cyclohydrolase Ⅰ, GCH1)的突变.方法 应用聚合酶链反应、DNA直接测序和限制性内切酶酶切技术对6例散发DRD患者进行GCH1基因的突变分析,对100名健康对照者进行GCH1基因的PCR和限制性内切酶酶切分析.结果 1例患者检测出GCH1基因一个新的点突变151(G→A),为起始密码子突变,导致所编码的起始氨基酸由蛋氨酸变为异亮氨酸(M1I)而不能起始翻译.100名健康对照者等位基因无此突变.结论 发现了GCH1基因一个新的杂合型点突变151(G→A),我国散发DRD患者中存在GCH1基因突变.

中国北方地区苯丙氨酸羟化酶基因的突变构成

目的 了解中国人苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因的突变构成.方法 应用PCR单链构象多态结合序列分析检测230例苯丙酮尿症患儿PAH基因全部外显子及其两侧内含子.结果 (1)在460个PAH等位基因中检测出75种不同的突变基因,总检测率达94.6%(435/460),其中3种突变基因(S251-R252＞SfsX89、Y387D和A389G)尚未见到报道.常见的突变基因为:R243Q(21.7%)、EX6-96A＞G(10.2%)、R111X(8.3%)、R413P(6.5%)和Y356X(6.1%).较常见的突变基因为:V399V(4.1%)、IVS4-1G＞A(3.5%)、IVS7+2T＞A(2.2%)和R241C(2.2%).大部分突变集中在第3、5、6、7、11和12外显子及其两侧内含子区域.(2)检测出10种多态性位点,突变率高的4个位点IVS3-22C＞T(56.7%)、IVS10+97G＞A(75.9%)、Q232Q(89.0%)和V245V(81.9%),提示PAH基因cDNA序列存在人种差异.结论 中国人PAH基因的突变构成与欧洲人群完全不同,与亚洲其它人群有频率的差异.

应用细菌双杂交系统技术寻找与人PCIA1基因相互作用的基因

目的 探寻与新近发现的人类交叉免疫反应抗原(homo sapiens cross-immune reaction antigen)基因PCIA1相互作用的基因,为其功能研究提供线索.方法 应用Stratagene公司的细菌双杂交系统和人胚肾cDNA文库,构建诱饵质粒pBT-PCIA1,与靶质粒pTRG-cDNA文库大规模地共转化报告菌株,筛选并分离具有相互作用的pTRG-cDNA阳性克隆,经DNA序列分析和生物信息学确定靶基因.结果 发现7种靶蛋白基因,其中3种基因功能尚不清楚,其余4种具有重要生理功能,突变或表达异常都会导致严重疾病;α-辅肌动蛋白-4(actinin, alpha 4, ACTN4)、鞘脂激活蛋白原(prosaposin, PSAP)或真核翻译起始因子(eukaryotic translation initiation factor 3, subunit 10 theta, EIF3S10)过表达都会促进肿瘤发生和演进.结论 细菌双杂交系统技术探测蛋白质之间的相互作用,是一种提供新基因功能研究信息的有效方法;PCIA1基因表达与肿瘤形成、侵袭和转移密切相关.

山东省潍坊东部地区精神分裂症1号染色体基因扫描研究

目的 对精神分裂症患者及正常对照者的1号染色体进行扫描,查找精神分裂症的关联位点.方法 在1号染色体上间隔10 cM(厘摩)遗传距离,选择了31个微卫星遗传位点,用DNA 混合池的方法对119例精神分裂症患者与119名正常对照者的DNA样本分别混合后进行基因组扫描.经卡方检验分析,对比患者组与对照组的等位基因峰型比率的差异.结果 在D1S2878遗传位点患者组与对照组的等位基因频率差异有统计学意义,P＜0.01.结论 山东省潍坊东部地区精神分裂症患者群体中存在与1号染色体的关联区域.

TGFβ 1和AT1R基因多态性与乙肝肝硬化遗传易感性及临床表型的关联研究

目的 探讨与宿主肝纤维化及门脉高压形成相关的转化生长因子β1 (transforming growth factor beta 1,TGFβ1)和Ⅰ型血管紧张素Ⅱ受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R)基因多态性与乙肝肝硬化遗传易感性及临床表型的关系.方法 应用PCR-RFLP对102例乙型肝炎后肝硬化患者和106名随机抽样的无亲缘关系的健康献血者分别检测TGFβ1启动子区-509C/T、AT1R 1166A/C基因多态性.结果 肝硬化组TGFβ1启动子区-509C/T纯合子CC的基因型频率明显高于对照组(P＜0.05);肝硬化Child-Pugh C级组-509C/T位点CC基因型分布频率明显高于B级和A级组(P＜0 05);AT1R 1166A/C基因型和等位基因频率在对照组和肝硬化组之间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 TGFβ1启动子区-509C/T基因多态性与乙型肝炎后肝硬化遗传易感性有关,并与肝硬化严重程度密切相关,AT1R 1166A/C基因多态性可能与乙型肝炎后肝硬化遗传易感性无关.

良性成人家族性肌阵挛癫痫一家系

先证者(Ⅳ1) 男,42岁,因"双上肢震颤16年,发作呼之不应、四肢强直阵挛14年"于2006年10月来我院就诊.患者16年前出现双上肢震颤,维持姿势及精细运动时加重,静止时减轻.14年前因通夜失眠后出现全身强直阵挛发作,平均每月1次.6年前在我院门诊诊断为"癫痫",间断服用卡马西平、苯妥英钠症状无好转.

成年型多囊肾一家系六例

先证者(Ⅱ7) 男,59岁,自觉双侧腰部不适,疼痛6年,加重伴水肿2年.该患者于6年前无明显诱因出现双侧腰部不适,疼痛,遂于当地市医院检查,诊断为"先天性多囊肾",未给予特殊治疗.

癌家族一家系七例

先证者(Ⅲ3) 45岁,因咽部有紧缩感,且食物通过缓慢而就医,经X线及钡餐检查,发现食管中段狭窄,病理检查为鳞状恶性肿瘤.家系调查:该家系中7人患癌症,其中男性4例、女性3例,家系成员中无近亲结婚史.先证者的父亲(Ⅱ1)已死亡,60岁时因吞咽困难,呕吐,食管疼痛到医院就诊,诊断为食道癌.先证者的两个姑姑(Ⅱ3、Ⅱ9)和两个叔叔(Ⅱ7、Ⅱ11)都为癌症患者(图1),其中Ⅱ3,54岁时经病理检查为乳腺癌.Ⅱ7,55岁时发现食物通过食管有滞留感,咽部有轻微疼痛感,就诊后经病理检查为食道癌.

Charcot-Marie-Tooth病Ⅱ型一家系

先证者(Ⅴ2) 男,18岁,因"行走困难5年"于2006年10月来我院就诊.患者5年前出现下肢乏力,右下肢稍明显,行走速度变慢,欠稳,不能走远路,无肢体麻木,上肢力量可.症状逐渐加重.近2年行走时右下肢足轻度内翻,近1年行走时常觉足尖难提起,容易绊倒,同时发现下肢远端逐渐变细.既往史无特殊.生长发育同同龄人.查体:弓形足,双足轻度内翻.心肺腹检查未见异常.神经系统:神志清,记忆力、计算力可,颅神经检查未见异常.双下肢大腿下1/3处以下肌肉萎缩变细,呈仙鹤腿,四肢肌张力正常,肌力:上肢近中端Ⅴ度,远端手握力、指伸屈、外展内收Ⅲ-Ⅳ度,双下肢近端Ⅴ度,中端Ⅳ度,远端轻度足下垂,足趾背屈Ⅱ-Ⅲ度,跖屈Ⅲ度,双下肢上肢远端痛觉减退20%,深感觉(位置、运动、振动)正常.

常染色体显性遗传性白内障伴小瞳孔一家系

先证者(Ⅳ2) 男,19岁,学生,智力、发育正常.自幼左眼晶状体混浊,灰白色;白天注视远处物体时,瞳孔直径小于2 mm;瞳孔对光反射甚微;瞳孔放大时呈卵圆形;视力偏低,且随年龄增长,视力逐步下降;全身其他情况正常.诊断为遗传性白内障伴小瞳孔.家系调查见图1.Ⅰ1、Ⅱ2、Ⅲ2、Ⅳ1、Ⅳ2均有同样病症.家系中无近亲通婚史.

屈侧网状色素沉着一家系15例

突变为缺失突变c.442delAG[2].2006年,中国学者Li等[3]对一个中国屈侧网状色素异常家系进行全基因组扫描,将该病的致病基因定位于17p13.3.在微卫星标记D17S831和D17S1866处取得大LOD值为3.61.单倍型分析将该病的致病定位在距离D17S1798 6.8 cM范围之内.此区域内含有21个已知基因和16个预测基因,目前该区域的致病基因尚未克隆出.以上研究显示,屈侧网状色素异常在不同的种族和不同 的家系中被定位在不同的区域,证实该病具有一定的遗传异质性.

实体瘤间期细胞制备技术对荧光原位杂交效果的影响

目的 将改进的实体瘤间期细胞制备方法应用于荧光原位杂交,为实体瘤间期细胞的制备建立技术平台.方法 采用随机引物法标记3号染色体着丝粒探针,分析实体瘤不同间期细胞制备技术对荧光原位杂交效果的影响.结果 6种制片方法各具特点,根据其在应用方面有不同侧重,可采用不同制片方法.胶原酶法制片的荧光原位杂交效果佳.对于冰冻组织或较小的组织,可采用印片法制片.结论 适当的制片方法,结合荧光原位杂交,为实体瘤的染色体研究和诊断应用奠定了技术基础.

p53基因第7内含子多态性与非小细胞肺癌及其组织p53基因突变的关系

目的 研究p53基因第7内含子多态性与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)及其组织p53基因突变的关系.方法 采用病例对照方法选择105例NSCLC患者和100名对照,以聚合酶链反应和ApaⅠ酶切鉴定p53基因第7内含子基因型.然后收集64例NSCLC活检标本及40例NSCLC石蜡包埋组织,鉴定基因型后测序检测第5～8外显子突变.结果 在NSCLC中p53基因第7内含子ApaⅠ+/+占23.8%,ApaⅠ-/-占12.4%,ApaⅠ+/-占63.8%;在对照组中ApaⅠ+/+、ApaⅠ-/-和ApaⅠ+/-分别为44.0%、11.0%和45.0%.两组间基因型构成比差异有统计学意义(P＜0.01).序列分析显示基因型ApaⅠ+/+、ApaⅠ-/-和ApaⅠ+/-的NSCLC组织p53基因第5～8外显子突变率分别为20.0%、50.0%和52.9%,不同基因型之间的突变率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 p53基因第7内含子多态性与NSCLC有关.

新疆地区维吾尔族乳腺癌BRCA1基因突变分析

目的 研究新疆地区维吾尔族乳腺癌患者BRCA1基因突变情况及突变位置.方法 选取70例维吾尔族乳腺癌根治标本,对照组为32例维汉族乳腺良性病变(纤维腺病及纤维腺瘤)及乳腺癌旁非癌组织;应用PCR-单链构象多态性和DNA序列测定的方法检测BRCA1基因突变.结果 (1)70例维吾尔族乳腺癌中发现9例BRCA1突变的12个新位点.(2) 70例维吾尔族乳腺癌BRCA1的突变率为12.86%(9/70),22例维吾尔族早发性乳腺癌(≤35岁)BRCA1突变率为31.82%(7/22).维吾尔族早发性乳腺癌BRCA1突变率(7/22)高于维吾尔族晚发性乳腺癌(2/48),差异有统计学意义(χ2=10.295,P＜0.01).(3)70例维吾尔族乳腺癌中发现9例BRCA1基因核苷酸多态性位点, 其中8例多态性位点均为3232A＞G.(4)2例双侧乳腺癌中均检测出BRCA1基因的突变.结论 BRCA1突变可能与新疆维吾尔族乳腺癌尤其是维吾尔族早发性乳腺癌及双侧乳腺癌的发生密切相关.

MSX1基因微卫星多态性与非综合征性唇腭裂的相关性研究

目的 探讨肌肉片段同源盒1基因(muscle segment homeobox 1,MSX1)与湖南汉族非综合征性唇腭裂(nonsydromic cleft lip and patate, NSCLP)的相关性.方法 以MSX1基因内含子区的(CA)n微卫星作为遗传标记, 对湖南汉族129例NSCLP患儿和108名正常儿童采用聚合酶链反应-变性聚丙烯酰胺凝胶基因分型技术进行基因分型,并经测序确定片段长度,应用病例对照研究进行相关性分析.结果 湖南汉族人群MSX1基因(CA)n等位基因分布符合Hardy-Weinberg平衡,杂合率及多态信息量均为0.50;CA4等位基因频率在唇裂伴或不伴腭裂组及单纯性腭裂组高于对照组,CA4,4基因型频率在唇裂伴或不伴腭裂组和单纯性腭裂组高于对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 MSX1基因内(CA)n微卫星是多态性较好的遗传标记;MSX1基因可能与湖南汉族人群NSCLP发病相关.

PON2基因C311S、G148A多态性与脑卒中关系的研究

目的 探讨对氧磷酶2(paraoxonase 2, PON2)基因多态性与脑卒中的关系.方法 用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法分别检测PON2基因C311S、G148A多态性在脑出血组(150例)、脑梗死180例)和正常对照组(120名)的基因频率.结果 发现中国湖南地区人群存在PON2基因C311S、G148A多态性,在正常对照组中等位基因频率分别是S/C 0.77/0.23,A/G 0.43/0.57. 脑出血组、脑梗死组患者PON2基因的等位基因频率与正常对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PON2基因多态性可能与中国湖南汉族人群脑卒中发病无关,C/S、G/A等位基因可能不是中国湖南地区汉族人群脑卒中发病的独立危险因素.

汉族人维生素D受体基因TruⅠ酶切位点多态性及其对BsmⅠ酶切位点多态性测定的影响

目的 测定汉族人维生素D受体基因TruⅠ酶切位点多态性分布并探讨其对BsmⅠ酶切位点多态性分布测定的影响.方法 收集80名健康汉族人外周静脉血标本,提取基因组DNA,用限制性片段多态性长度酶切法测定80名汉族人维生素D受体基因TruⅠ、BsmⅠ酶切位点多态性;换用常规引物再次测定上述标本BsmⅠ酶切位点多态性;分析维生素D受体基因TruⅠ、BsmⅠ酶切位点多态性及两次测定的BsmⅠ位点的一致性.结果 测得TruⅠ基因型频率为TT 68.7%,Tt 26.3%,tt 5.0%;同一PCR片段上测得BsmⅠ位点基因型频率为BB 6.2%,Bb 52.5%,bb 41.3%,多态性分布均符合Hardy-Weinberg 平衡;换用常规引物测定同批标本BsmⅠ位点多态性,基因型分布为BB 20.0%,Bb 26.2%,bb 53.8%,不符合Hardy-Weinberg平衡(r=13.29,P＜0.01).与第1次测定相比,有22个标本基因型由Bb型变成BB型或bb型,发生基因型丢失.结论 汉族人VDR基因存在TruⅠ多态性,其多态性分布与其它种族不同;TruⅠ酶切位点多态性可引起BsmⅠ位点多态性测定时等位基因的丢失.

汉族人群4q亚端粒区等位片段4qA和4qB的结构特征

目的 研究中国人4q35亚端粒区等位片段4qA和4qB的结构特征,探讨其与面肩肱型肌营养不良症(facioscapulohumeral muscular dystrophy,FSHD)的内在联系.方法 研究对象包括80名无血缘关系的健康成年人.低熔点胶包埋法抽提基因组DNA.同一样品分别进行EcoRⅠ酶切、EcoRⅠ/BlnⅠ双酶切和HindⅢ酶切,脉冲电场电泳分离,p13E-11、4qA和4qB 探针Southern印迹,计算4qA/4qB的频率、基因型频率及各型EcoRⅠ片段的长度,SPSS13.0统计软件分析数据.结果 4q亚端粒区4qA的频率(46.9%)与4qB(53.1%)基本相等(χ2=1.250,P＞0.05),4qA/4qB杂合型频率明显高于纯合型频率(P＜0.05),4qA型和4qB型EcoRⅠ片段长度分别为(115.8±11.9)kb和(98.3±8.6)kb,两者差异有统计学意义(t=23.04,P＜0.001).8.8%(7/80)的个体检测到易位构型.2名个体出现4qB型短EcoRⅠ片段.结论 正常中国人4q亚端粒区4qA和4qB的频率基本相等,杂合型频率明显高于纯合型频率.4qB型D4Z4缺失不致病.4qA和4qB型EcoRⅠ片段具有动态性变化特征.

流式细胞术检测遗传不稳定性:肺癌穿刺标本中DNA异倍体与P16表达

目的 观察肺癌DNA异倍体与P16蛋白表达,探讨流式细胞术(flow cytometry, FCM)在检测肺癌遗传不稳定性和恶性度中的应用.方法 CD45、P16荧光标记抗体同步标记穿刺标本中血细胞、肿瘤细胞,FCM测定CD45+ P16+和CD45- P16+的细胞比率并进行比较;检测肺穿刺标本细胞DNA含量.结果 (1)74份恶性肿瘤中,异倍体肿瘤占62.2%(46份).50%肺癌出现P16蛋白低表达;(2)16.22%的肺癌(12/74)仅单表现P16蛋白低表达;28.38%的肺癌(21/74)仅单表现DNA异倍体特征;33.78%的肺癌(25/74)既表现P16蛋白水平下调又表现DNA异倍体特征.FCM可以在肺癌中检测出78.38%的肿瘤(58/74)存在恶性度指标P16低表达或DNA异倍体.结论 P16蛋白低表达和DNA异倍体均为肺癌高频率发生的恶性度指标,采用FCM进行联合检测可以观察肺癌遗传不稳定性,并辅助肺癌穿刺标本恶性度评估.

孕妇血浆中胎儿游离DNA的生化特征及其应用研究新进展

孕妇血浆中胎儿游离DNA,源于胎儿细胞和(或)胎盘的凋亡,经核酸内切酶选择性地剪切为313 bp以下的短片段分子,在孕早期和孕晚期分别平均占血浆DNA总量的3.4%和6.2%,因相对含量丰富,已成为当前无创伤性产前分子遗传诊断中胎儿DNA的重要来源,现开展了胎儿性别鉴定、RhD阴性孕妇的Rh(D)基因检测、胎儿非整倍体病的诊断、STR遗传标记检测等应用研究.该文对母体血浆中胎儿游离DNA的来源、胎儿游离DNA的浓度、纯度、分子片段大小和分布、产后清除等基础性研究以及业已开展的临床应用,进行了总结和分析.根据胎儿游离DNA的生化特征和检测的靶基因,采用相应的分子基因诊断策略和实验设计,限制扩增产物的片段长度和优化PCR反应条件,有助于提高无创伤性产前胎儿分子遗传诊断的成功率.

中国云南怒族群体线粒体DNA D环区SNP遗传多态性研究

目的 观察怒族群体线粒体DNA 单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的群体遗传特点,为法医学鉴定提供线粒体DNA序列多态性的基础数据,并为研究少数民族起源提供科学依据.方法 应用ABI3730型遗传分析仪,PCR产物直接测序法,对87名中国云南怒族无关个体线粒体DNA D环Ⅰ区进行序列分析.结果 在mtDNA高变区SNP16028～16362之间与Anderson序列比较,怒族87名无关个体中共检出62个碱基突变SNP位点, 突变点492个,59个SNP单倍型.怒族mtDNA两个高变区SNP基因差异度为0.9675,偶合概率为0.0437.结论 怒族线粒体DNA D环Ⅰ区SNP具有高度多态性,是耘迦禾宓母鎏迨侗稹⑶权鉴定以及民族起源的分子研究有用的遗传标记.

潮汕地区汉族人群20个Y染色体短串联重复序列基因座复合扩增及遗传多态性

目的 获得20个Y染色体短串联重复序列(Y short tandem repeats, Y-STR)基因座及其单倍型在潮汕地区汉族人群中的遗传多态性分布情况,评估其法医学应用价值.方法 通过建立3组Y-STR荧光标记复合扩增系统(MultiplexⅠ: DYS434,Y-GATA-A10,DYS438,DYS439,DYS531,DYS557,DYS448,DYS456,DYS444;MultiplexⅡ: DYS458,DYS460,DYS443,DYS447,DYS446,DYS709;Multiplex Ⅲ: DYS622, DYS635, Y-GATA-H4, DYS520,DYS630),对潮汕地区汉族158名无关男性个体进行20个STR基因座的复合扩增,用ABI310基因分析仪对扩增产物进行检测,统计20个Y-STR基因座的群体遗传学参数.结果 3组复合扩增系统均可成功进行分型,基因多样性(gene diversity,GD) 值低为0.2506(DYS434),高为0.8034(DYS447);20个Y-STR基因座共同构成的单倍型157种,其中156种为唯一的,单倍型多样性为0.999998.另对30个父性家系调查显示:同一家系成员20个Y-STR基因座单倍型一致,未观察到基因突变.结论 20个Y-STR基因座具有丰富的遗传多态性,父系遗传稳定,建立的3组Y-STR荧光标记复合扩增系统分型可靠,可用于法医学个体识别和亲权鉴定.

中国北方汉族人群中载脂蛋白M基因多态性分布特征及连锁不平衡分析

目的 研究中国北方汉族人群中载脂蛋白M基因(apolipoprotein M, APOM)多态性分布特征及其连锁不平衡关系.方法 采用PCR扩增基因组DNA直接测序法结合PCR-限制性片段长度多态方法对330名中国北方汉族健康人群的APOM基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)进行分析.结果 中国北方汉族人APOM基因存在1号内含子rs805264位点、5号内含子rs707922位点及 rs707921位点3个多态位点,不同种族及地区APOM基因SNP差异有统计学意义.APOM基因rs805264位点、rs707922位点及rs707921位点SNP在中国北方汉族人群中呈现明显的连锁不平衡,主要有G-G-C、A-T-A两种单体型.结论 APOM基因SNP在中国北方汉族人群中存在显著连锁不平衡.

《中华医学遗传学杂志》2008年征订及征稿启事