凝血酶敏感蛋白1对人肝癌细胞株HCCLM3生长和黏附的作用
摘要： 目的:观察凝血酶敏感蛋白1对人肝癌细胞株HCCLM3的生长抑制和黏附的作用.方法:实验于2006-05/2007-01在河南省高等学校省级开放实验室完成.①采用浓度为2×107L-1的HCCLM3对数生长期单细胞悬液接种培养后,采用MTT法检测凝血酶敏感蛋白1对HCCLM3的生长抑制作用.②对数生长期的HCCLM3细胞株接种于纤黏连蛋白覆盖的96孔板后,按照处理因素分组:空白对照组、凝血酶敏感蛋白1组(加入凝血酶敏感蛋白1蛋白40 mg/L)、CD36阻断组和CD47阻断组[先加入对应的单抗(浓度5 mg/L),在体积分数为0.05 CO2,37℃温箱孵育30 min使单抗与细胞充分结合后再加入凝血酶敏感蛋白1].培养72 h后MTT方法检测凝血酶敏感蛋白1对细胞黏附力的作用,染色后直接计数黏附细胞.结果:①凝血酶敏感蛋白1对HCCLM3细胞的生长抑制率随着浓度的提高而增加,40 mg/L与50 mg/L相比抑制作用差异无显著性.抑制率随着时间的延长而增加,在72 h抑制作用明显.②黏附力的检测显示:凝血酶敏感蛋白1组,CD36阻断组,CD47阻断组细胞黏附力均显著低于对照组(P＜0.05).但凝血酶敏感蛋白1组,CD36阻断组,CD47阻断组细胞黏附力差异无显著性(P＞0.05).结论:凝血酶敏感蛋白1对HCCLM3的生长有抑制作用,在一定范围内呈剂量依赖性和时间依赖性.凝血酶敏感蛋白1可抑制人肝癌细胞株HCCLM3与细胞外基质的黏附能力,作用途径可能与受体CD36,CD47无关.
-
大鼠胚胎中脑多巴胺神经元的分离培养与鉴定
背景:神经细胞移植治疗是有希望治愈帕金森病的方法之一.目的:探讨大鼠胚胎中脑多巴胺神经元分离、培养与鉴定的方法.方法:解剖分离E14d SD大鼠胚胎中脑组织,制备单细胞悬液,以神经细胞培养液培养,观察其生长情况并进行RT-PCR和免疫组织化学鉴定.结果与结论:在神经细胞培养液中,细胞生长良好.RT-PCR和免疫组织化学结果显示大多数细胞表达多巴胺神经元特异性分子标志.证实实验成功建立了大鼠胚胎中脑多巴胺神经元分离培养与鉴定的方法.
-
E1A激活基因细胞阻遏子蛋白在人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用
背景:研究内皮细胞凋亡的机制及其与动脉硬化形成的关系将为动脉粥样硬化的防治提供新的思路.而E1A激活基因的细胞阻遏子蛋白在内皮细胞凋亡中的作用,目前尚未见报道.目的:探讨E1A激活基因的细胞阻遏子蛋白在去血清诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用及其调控机制.时间及地点:实验于2007-10/2008-12在解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所实验室完成.材料:人脐静脉内皮细胞,Phoenix amphotropic 293细胞,pLNCX-CREG和pLNCX-GFP反转录病毒真核表达载体.方法:采用持续去血清培养的方法诱导内皮细胞凋亡,用TUNEL染色和Western blot检测去血清饥饿24,48,72 h后各实验组细胞中cleave-caspase3表达;用pLNCX-CREG和pLNCX-GFP反转录病毒真核表达载体转染人脐静脉内皮细胞,并筛选稳定表达的细胞克隆;应用Western blot检测E1A激活基因的细胞阻遏子蛋白的表达,并进一步应用流式双荧光染色分析E1A激活基因的细胞阻遏子蛋白过表达在去血清诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用.主要观察指标:cleave-caspase3表达量,人脐静脉内皮细胞凋亡率.结果:成功构建了E1A激活基因细胞阻遏子过表达的人脐静脉内皮细胞模型,证实内皮细胞E1A激活基因细胞阻遏子的表达随凋亡的增加而增加,E1A激活基因细胞阻遏子过表达的人脐静脉内皮细胞去血清饥饿后凋亡较对照组明显减少.结论:E1A激活基因细胞阻遏子过表达抑制了去血清诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,机制可能与调控P13K蛋白表达有关.
关键词： E1A激活基因细胞阻遏子 凋亡 人脐静脉内皮细胞 P13K -
磷酸钙骨水泥填充椎体成形过程中椎体生物力学评价
背景:目前椎体成形中常用的充填剂聚甲基丙烯酸甲酯因其过高的强度会引起临近节段骨折,新型材料磷酸钙骨水泥具有骨传导性,但其在体内的生物力学情况尚不明确.目的:模拟骨质疏松性骨折椎体的力学环境,观察磷酸钙骨水泥填充后椎体的力学变化情况,评价其在椎体成形中的适用性.设计、时间及地点:随机对照,动物体内生物力学实验,于2007-02/12在苏州大学实验动物中心完成.材料:成年雌性山羊12只,双侧去卵巢法制备骨量减少动物模型.方法:以直径4.0 mm钻头横向钻通模型山羊L2～5腰椎椎体双侧皮质,两两随机向骨缺损内注入磷酸钙骨水泥或聚甲基丙烯酸甲酯,以L1和L6椎体为对照组.主要观察指标:生物力学测试仪测试术后2,6,12,24周各组椎体的强度和刚度.结果:磷酸钙骨水泥组椎体强度从2周起逐渐增强,在24周时强,各时间点与对照组相当,但均低于聚甲基丙烯酸甲酯组.磷酸钙骨水泥组椎体刚度从2周开始下降,12周达到低,24周时上升,但各时间点间无统计学差异(P=0.265);聚甲基丙烯酸甲酯组刚度2～24周也无明显降低(P=0.815);各时间点2组间比较无明显差异(P＞0.05),但都低于对照组.结论:磷酸钙骨水泥填充后椎体具有更合适的生物力学强度,有望替代聚甲基丙烯酸甲酯在椎体成形中应用.
-
智能人工肠内容物感知神经的初步研究
背景:现有的人工肛门括约肌都缺乏感知大便的功能,患者控制排便主要是通过自己的习惯而不是根据肠道内是否存在大便的实际情况来决定排便.目的:研究能够感知不同肠内容物状态的人工感知神经.方法:选用20只健康新西兰兔,于近结肠远端约10 cm肠管制作肠管内容物固体、流体、气体、空虚状态4种模型.各个状态的每段肠管随意选取5个测量点,利用超声波"智能人工肠内容物感知神经"系统对新西兰兔近结肠内4种状态肠内容物进行判断.结果与结论:固体、流体、气体、空虚状态的正确判断率分别为96%,99%,100%,100%.提示该超声波探测系统可有效感知肠道内是否具有内容物和分辨肠管内容物的不同状态.
-
不同给氢方式对兔氢气代谢的影响
背景:不同给氢方式均可对缺血再灌注损伤产生治疗作用,目前尚缺乏不同给氢方式对机体氢气代谢影响的研究.目的:比较等体积氢水腹腔、静脉注射及氢气腹腔注射对兔氢气代谢的影响,以利于提供更优化的氢气治疗方案.方法:20 只新西兰大白兔在监测呼气氢气基础值后,依次予以饱和氢气生理盐水、氢气10 mL/kg 腹腔注射及氢水10 mL/kg10 min 内静脉泵入,持续监测呼气氢气浓度,等降至基础值并稳定30 min 以上后再进行下一方式给氢干预.记录各种给氢方式呼气氢气浓度的达峰时间、峰浓度,计算半衰期和曲线下面积,比较3 种给氢方式对呼气氢气浓度的影响.结果与结论:腹腔注射氢水、氢气及静脉注射氢水3 种方式达峰时间分别为(3.25±1.80),(17.8±6.48)和(7.45±1.39) min,差异有显著性意义(P < 0.01);半衰期分别为(7.40±2.09),(141.50±85.01)和(1.20±0.37) min,差异有显著性意义(P < 0.01);较基础值增加的曲线下面积分别为(302.17±221.90),(5 234.29±2 681.18)和(209.51±104.49) ppm?min,差异具有显著性意义(P < 0.01).提示腹腔注射氢水、氢气均可迅速提高呼气氢气浓度,腹腔注射氢气能长时间维持呼气氢气高浓度.
-
应用密度梯度离心和贴壁筛选法分离免骨髓间充质干细胞
背景:特定条件下,骨髓间充质干细胞可向成骨细胞、成软骨细胞等细胞分化.但骨髓中间充质干细胞含量极低,体外如何获取、纯化并使其高效快速增殖是组织工程技术应用和推广的前提.目的:优化获取兔骨髓间充质干细胞并对其进行纯化、鉴定,同时对其生物学性状进行观察.设计、时间和地点:观察性实验,于2005-09/2006-07在同济医学院实验动物中心完成.材料:兔龄2个月雌性新西兰纯种大耳白兔1只,用于间充质干细胞取材及原代培养.方法:采用密度梯度离心法、贴壁筛选法并结合传代对抽取的骨髓液进行纯化.首先将培养瓶中的培养液吸出,加PBS后再加入2.5 g/L胰酶约3.0 mL,置于37℃培养箱中,两三分钟后在倒置显微镜下观察细胞形态,当细胞胞质回缩,细胞变瘦长,细胞间隙增大,同时有少量脱肇的圆形细胞时可终止消化,加入含血清的L-DMEM完全培养基即可.按1.0X 108L-1的密度接种到一次性塑料培养瓶中进行培养.主要观察指标:间充质干细胞的形态、超微结构和表面标志物的表达;第1,3,5,8,10代细胞的增殖情况,并绘制出生长曲线.结果:①经密度梯度离心法、贴壁筛选法并结合传代方法所得的间充质干细胞很纯,第3代和第5代细胞形态单一,细胞排列具有典型的漩涡状结构.②透射电镜观察显示间充质干细胞核大,以圆形或类圆形为主,胞核比例大,细胞器少,为低分化细胞.③传代培养的间充质干细胞生长曲线呈S型,第1,3,5代细胞增殖能力强,细胞生长旺盛,而第8,10代细胞增殖明显减弱.④所分离培养的细胞表达CD44、CD90,不表达CD34,电镜观察为低分化细胞.结论:分离培养的细胞为间充质干细胞且成分单一,具有干细胞特性,第3代和第5代细胞很纯且其增殖能力强.
-
自体肋软骨移植修复创伤性鞍鼻畸形21例
背景:外伤致鼻基本支架塌陷后,软组织也会塌陷收缩,另外外伤损伤鼻软骨会引起鼻软骨无菌性炎症从而致部分软骨吸收,所以长期的鞍鼻畸形常伴有鼻小柱过短.外伤性鞍鼻畸形合并鼻小柱过短用医用硅橡胶矫正时张力大,易出现皮肤穿孔、破溃等并发症.目的:观察应用自体肋软骨移植修复创伤后鞍鼻畸形的效果.方法:纳入21例外伤性鞍鼻伴鼻小柱过短患者,男6例,女15例,年龄16～45岁,均有明确外伤史,对治疗方案均知情同意.取自体右侧第7肋软骨塑形成柳叶形鼻梁模型假体,鼻小柱支架修复外伤后鞍鼻畸形.在鼻小柱底部人中凹陷处行"V-Y"皮瓣推进缝合以延长鼻小柱.观察自体肋软骨移植修复后患者鼻畸形恢复情况,移植软骨有无排出及切口瘢痕情况等.结果与结论:自体肋软骨移植修复后患者鼻外形、鼻尖高度形态满意,鼻小柱延长,切口愈合良好,供软骨区无并发症发生.21例均获随访,随访时间6个月～2年,患者无移植软骨排出,无软骨变形,外形良好,鼻小柱底部人中凹陷处瘢痕小.提示应用自体肋软骨移植、人中凹陷处"V-Y"皮瓣推进缝合是修复创伤后鞍鼻畸形的理想方法.
-
兔骨关节炎滑膜组织血管内皮生长因子mRNA表达及透明质酸钠的影响
背景:骨关节炎的发病机制目前还未完全清楚,研究发现血管内皮生长因子参与骨关节炎的发生发展.目的:观察血管内皮生长因子在滑膜组织表达的改变及透明质酸钠对滑膜血管内皮生长因子基因表达的影响.方法:24只大耳白兔随机正常对照组、生理盐水组和透明质酸钠组行单膝前交叉韧带切断术,4周后生理盐水组关节腔注射生理盐水0.3 mL,透明质酸钠组注射等量的高分子量10 g/L透明质酸钠,1次/周,连续5周.第10周处死动物,比较各组股骨内髁关节软骨的大体变化,采用实时定量聚合酶链反应方法检测滑膜VEGF mRNA的表达水平.结果与结论:大体评分显示生理盐水组软骨退变的程度明显重于正常对照组和透明质酸钠组(P＜0.05);生理盐水组滑膜血管内皮生长因子mRNA表达较正常组显著下降(P＜0.05),透明质酸钠组滑膜血管内皮生长因子mRNA表达较生理盐水组有升高,但比正常对照组低(P＜0.05).结果表明,滑膜组织血管内皮生长因子表达下降可能参与透明质酸钠的发生发展,关节腔注射透明质酸钠对透明质酸钠滑膜组织血管内皮生长因子表达有上调作用,有利于滑膜组织修复,可能是其治疗透明质酸钠机制之一.
-
人脐带胶在豚鼠眼睑原位重建中的应用
背景：健康新生儿脐带胶是一种无血管的黏液结缔组织，有一定的弹性和韧性，含有溶菌酶、胎盘球蛋白、透明质酸酶、AMP抗体和补体系统，不容易发生感染和排斥反应，还含有较多的间充质干细胞，临床已被用于眼部整形手术。
目的：观察脐带胶作为睑板替代物在豚鼠上眼睑重建中的组织相容性和组织病理变化。
方法：取健康新生儿脐带中的黏液结缔组织-脐带胶，制备成厚薄相近的组织块；同时制作豚鼠睑板全层缺损模型并植入脐带胶组织块，观察动物大体情况，分别于脐带胶植入后1，2，3周取其交界处眼睑组织，光镜下观察组织学改变。
结果与结论：所有动物在植入脐带胶材料后均未发生感染、脱位等情况，所有动物角膜上皮完整，无角膜上皮脱落。脐带胶代替睑板植入后1周时，结膜红润，切口无红肿等排斥反应发生，角膜上皮完整，眼睑运动可；脐带胶与肌肉间的炎性细胞浸润。植入后2周时结膜面红润，切口无红肿，无分泌物增多等排斥反应发生，角膜上皮完整，眼睑及眼球运动良好，无睑球粘连发生；脐带胶有溶解吸收倾向，炎性细胞不明显。植入3周时结膜切口愈合良好，角膜上皮完整，眼睑柔软，形态与对侧眼无明显区别；脐带胶部分吸收，其周边有新的纤维生成，无炎性细胞。说明脐带胶的免疫原性低，可引导新生胶原的生长，是一种良好的睑板替代物。 -
钛合金种植体表面制备的生物活性膜
背景:传统的仿生方法通常采用常规模拟体液和1.5倍模拟体液,其缺点就在于涂层生长过于缓慢,生长周期长达数周甚至几个月.目的:探讨3倍模拟体液诱导Ti-6Al-4V合金表面快速形成类羟基磷灰石涂层的能力.设计、时间及地点:体外生物学分析.实验于2008-11/2009-03在中国科学院金属研究所完成.材料:Ti-6Al-4V合金片由陕西省宝鸡市博达金属材料有限公司提供.方法:将经过预处理的Ti-6Al-4V合金浸泡在37℃的3倍模拟体液中,为保持浸泡液成分的恒定,溶液每24 h更换1次,共浸泡3 d.主要观察指标:用扫描电镜、X射线衍射仪和红外光谱仪分析涂层的形貌、相及元素组成.结果:扫描电镜观察样品浸泡1 d时,表面被沉积膜覆盖,局部区域有较大颗粒状的晶体出现.浸泡3 d时,表面完全被沉积膜覆盖,且有大量颗粒状或鳞片状晶体出现,晶体沉积以某一区域为核心,持续生长.生成物主要由Ca,P,O,C等元素组成,但是没有检测到Al,V等元素的存在.X射线衍射仪和红外光谱仪分析浸泡3 d时Ti-6Al-4V合金表面制备的生物活性膜主要成分为羟基磷灰石.结论:使用3倍模拟体液可以快速诱导Ti-6Al-4V合金表面类羟基磷灰石的沉积,显著缩短涂层形成的时间.
关键词： Ti-6Al-4V合金 高浓度模拟体液 仿生法 类羟基磷灰石
