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4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚诱导K562细胞凋亡
目的:鬼臼毒素具有抗炎作用,为限制其对机体产生不良反应,探讨经过结构改造的4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚对K562细胞生长抑制及诱导凋亡情况.方法:实验于2004-03/2005-01在兰州医学院完成.①实验材料:4-间氨基酚-4去甲表鬼臼酯由兰州大学应用有机化学国家重点实验室田暄教授惠赠,纯度98%.依托铂甙(连云港恒瑞药业产品,批号04060121,20 g/L)临用前以5%二甲亚砜稀释至5 g/L.K562细胞由兰州大学中药新药临窗前研究重点实验室传代保种.②细胞生长抑制率检测:取K562细胞,离心后调整浓度为1×108L-1,以100μL等量接种于96孔培养板.4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚组分别加入0.313,0.625,1.25,2.5,5,10.20,40 mg/L的4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚药液10μL;依托铂甙组分别加入以上8种终浓度的依托铂甙药液10 μL;正常对照组加入等量的溶媒;空白对照组不加细胞和任何药物,只加入等量的完全培养液.采用噻唑蓝法检测药物与细胞作用24,48,72 h时K562细胞的生长抑制率.③细胞超微结构观察:取K562细胞,离心后调整浓度为1×109 L-1,以2 mL等量接种于24孔培养板.4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚组加入2.5 mg/L的4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚药液200μL,正常对照组加入等量的溶媒.制作超薄切片,用醋酸双氧铀、柠檬酸铅染色,透射电镜观察细胞形态及细胞质、细胞核的变化.④细胞周期及凋亡检测:取K562细胞,离心后调整浓度为1×108L-1,以2 mL.等量接种于24孔培养板.4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚组分别加入1.25,2.5,5,10,20 mg/L的4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚药液200μL,正常对照组加入等量的溶媒.在流式细胞仪上检测细胞周期,用Multicycle软件计算凋亡细胞百分率.结果:①4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚抑制K562细胞生长情况:在0.313～20 mg/L范围内,其对K562细胞的抑制作用随浓度升高而增强,具有量效关系,同时抑制率随着作用时间的延长而升高,具有时效关系;超过20 mg/L.时抑制作用逐渐下降.依托铂甙对K562细胞的抑制情况与4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚类似.②细胞超微结构:正常对照组K562细胞核形状规则,核膜清晰可见,内质网丰富,内含大量线粒体,细胞表面微绒毛多,染色体分布于核中央.4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚组K562细胞出现明显的凋亡特征,微绒毛消失,细胞浆固缩,染色体凝集为团块状分布于核膜边缘,细胞内出现大量空泡,线粒体和内质网减少,细胞周围出现凋亡小体.③细胞周期及凋亡情况:1.25,2.5,5,10,20 mg/L 4-1间氨基酚-4去甲表鬼臼醚作用24 h,分别有19.4%,34.8%,34.0%,6.9%,4.5%的K562细胞发生凋亡,G0/G1期和S期K562细胞减少,于G2/M期明显增多.正常对照组凋亡率仅为0.3%.结论:①4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚能够抑制K562细胞的生长,呈时效、量效关系.②4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚可诱导K562细胞凋亡.
关键词： 4-间氨基酚-4去甲表鬼臼醚 K562细胞 流式细胞术 细胞凋亡
