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  • 荧光报告系统验证 miR-142-5p 的靶基因 Becn1

    作者:阮杰;黄池荣;刘桂平;梁国辉;张健;刘新光

    目的:验证 miR-142-5p 的靶基因———自噬相关基因 Becn1。方法生物信息学预测 miR-142-5p 与 Becn1的结合位点,构建含有结合位点的 Becn1基因3'UTR 野生型和突变型质粒,将重组质粒与 miR-142-5p-mimics 或 miR-NC 共转染 C2C12细胞,检测荧光素酶活性。结果miR-142-5p 与 Becn1的3'UTR存在一个结合位点(123~129);成功构建野生型重组质粒 pGL3-Becn1-3'UTR 和靶位点含3个碱基突变的重组质粒 Mut-3'UTR;与共转染 pGL3-Becn1-3'UTR 和 miR-NC 组相比,共转染 pGL3-Becn1-3'UTR 和 miR-142-5p-mimics 组荧光素酶活性显著下降,约为41.2%( P<0.01);而与对照组相比,共转染 Mut-3'UTR 和 miR-142-5p-mimics 组的荧光素酶活性下降不明显(P>0.05)。结论初步验证自噬相关基因 Becn1是miR-142-5p 的靶基因。