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miR-133b在前列腺癌中的表达及其对肿瘤细胞增殖的影响
目的 检测miR-133b在前列腺癌患者癌组织中的表达水平及其对前列腺癌细胞增殖的影响.方法 提取30例手术切除的前列腺组织癌和配对癌旁组织中的总RNA,并逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR检测癌组织及癌旁组织中miR-133b的表达水平,并分析其与患者临床病理参数之间的相关性;用脂质载体将miR-133b模拟物转染入PC-3细胞中,检测PR结构域结合因子16(PRDM16)表达情况;CCK8实验检测转染miR-133b模拟物后PC-3细胞增殖变化情况.结果 前列腺癌组织中miR-133b的表达水平(16.85±0.939)×10-4低于癌旁组织(22.95±1.567)×10-4,差异有统计学意义(t=3.335,P＜0.01).PC-3细胞转染miR-133b模拟物后,模拟物转染组中PRDM16表达水平较对照组明显降低,差异有统计学意义(0.371±0.031vs 1.000±0.022,t=12.53,P＜0.01);转染miR-133b模拟物72 h后,模拟物转染组的PC-3细胞增殖能力低于阴性对照组,差异有统计学意义(t=6.811,P＜0.01);而PRDM16抑制剂转染PC-3细胞72 h后的细胞增殖能力也低于阴性对照组(t=9.048,P＜0.01).结论 miR-133b在前列腺癌组织中的表达下调,其可能通过PRDM16控制前列腺肿瘤细胞增殖.
关键词： 前列腺癌 微小RNA-133b PR结构域结合因子16 增殖 -
骨肉瘤组织miR-133b表达变化及意义
目的 探讨微小RNA-133b(miR-133b)在骨肉瘤发生、发展中的作用.方法 收集32例行骨肉瘤切除术患者的骨肉瘤组织及肉瘤旁正常骨组织(简称正常骨组织),采用荧光定量PCR法检测其miR-133b、miR-451、miR-15a、miR-646、miR-218、miR-449a相对表达量,Western blotting法检测细胞增殖相关蛋白(p21、p27、PCNA、Ki67)和Xrppel样因子4(KLF-4)蛋白相对表达量.采用Spearman相关分析法分析骨肉瘤组织中miR-133b与KLF4表达之间的关系.结果 骨肉瘤组织miR-133b相对表达量低于正常骨组织(P＜0,01);两种组织miR-451、miR-15a、miR-646、miR-218、miR-49a相对表达量比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).骨肉瘤组织p21、p27蛋白相对表达量均低于正常骨组织,PCNA、Ki67、KLF-4蛋白相对表达量均高于正常骨组织(P均＜0.01).Spearman相关分析结果显示,骨肉瘤组织中miR-133b与KLF-4表达呈负相关(r=-0.344,P＜0.01).结论 骨肉瘤组织miR-133b表达降低;miR-133b可能通过下调KLF-4表达而参与骨肉瘤的发生、发展.
关键词： 骨肉瘤 微小RNA-133b Krüppel样因子4 细胞增殖 -
微小RNA-133b对紫外线诱导的晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用及其调控机制
背景 研究证实紫外线B照射是白内障发生的主要原因之一,其机制与晶状体上皮细胞(LECs)凋亡有关.微小RNA-133b(miR-133b)参与氧化应激诱导的LECs凋亡的调控过程,但其是否参与紫外线诱导白内障的发病过程及其机制尚未阐明. 目的 观察miR-133b对紫外线诱导白内障LECs凋亡的抑制作用及其调控机制.方法 将20只8周龄SPF级C57 BL/6小鼠采用随机数字表法分为白内障模型组和正常对照组,其中白内障模型组小鼠用波长302 nm的紫外线直接照射眼部5 min,照射强度为300 W/cm2,每天照射1次,共照射1周;正常对照组小鼠不给于任何干预.于末次照射后24 h处死各组小鼠并摘出10只眼球以制备全眼球切片.取人LECs细胞系(SRA01/04)紫外线照射25 min,并继续培养4h作为紫外线照射组,正常对照组细胞不作任何干预.取紫外线照射模型组细胞接种于96孔板并分为miR-133b模拟物组、模拟物阴性对照组、miR-133b抑制物组和抑制物对照组,分别用lipofectamine2000联合50 nmol/L miR-133b模拟物、miR-133b模拟物对照剂、100 nmol/L miR-133b抑制物或miR-133b抑制物对照剂瞬时转染细胞.采用实时荧光定量PCR法检测小鼠晶状体组织和不同转染组入LECs中miR-133b mRNA及其预测靶基因BCL2L2mRNA的表达以评估转染效率;采用TUNEL凋亡检测试剂盒检测小鼠晶状体组织中LECs和不同转染组人LECs的凋亡情况.结果 正常对照组小鼠晶状体前囊膜LECs排列规则,未发现TUNEL染色阳性细胞,白内障模型组小鼠LECs排列稀疏,可见凋亡细胞呈红色荧光.紫外线照射组细胞凋亡率为(43.90±9.30)％,明显高于正常对照组的(1.08±0.49)％,差异有统计学意义(t=-7.963,P=0.015).白内障模型组小鼠晶状体组织和紫外线照射组细胞中miR-133b mRNA的相对表达量分别低于正常对照组小鼠和正常人LECs,差异均有统计学意义(t=-2.958,P=0.042;t=-6.195,P=0.003).白内障模型组小鼠晶状体组织和紫外线照射组细胞中BCL2L2 mRNA的相对表达量分别高于正常对照组小鼠和正常人LECs,差异均有统计学意义(t=3.761,P=0.020;t 12.437,P=0.000).miR-133b模拟物组人LECs中miR-133b mRNA的相对表达量明显高于miR-133b模拟物对照组,而BCL2L2 mRNA的相对表达量明显低于miR-133b模拟物对照组,差异均有统计学意义(t=10.883、-5 927.617,均P＜0.01);miR-133b抑制物组人LECs中miR-133b mRNA的相对表达量明显低于miR-133b抑制物对照组,而BCL2L2 mRNA的相对表达量明显高于miR-133b抑制物对照组,差异均有统计学意义(t=-1 606.622、17.556,均P＜0.01).miR-133b模拟物组LECs凋亡率明显低于miR-133b模拟物对照组[(17.55±4.24)％与(43.62±9.19)％],miR-133b抑制物组LECs凋亡率为(78.23±12.42)％,明显高于miR-133h抑制物对照组的(48.01±9.68)％,差异均有统计学意义(t=-4.462,P=0.011;t=3.324,P=0.029).结论 miR-133b可防止紫外线照射所致的白内障的形成,其机制可能与靶向负性调控BCL2L2基因从而调控LECs的凋亡过程有关.
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微小RNA-133b靶向基质金属蛋白酶-9抑制结直肠癌细胞增殖
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-133b靶向基质金属蛋白酶-9(MMP-9)抑制结直肠癌细胞增殖的分子机制.方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测结直肠癌组织中MMP-9的表达水平;利用RNA干扰及重组质粒过表达技术在结直肠癌细胞株HCT116中调节MMP-9的表达水平,并用噻唑蓝(MTT)比色法及克隆形成实验检测细胞的增殖能力;借助生物信息学预测MMP-9的上游miRNA,并用FQ-PCR及双荧光素酶实验进行验证;通过转染技术在HCT116细胞中过表达miR-133b和MMP-9,并用MTT及克隆形成实验检测细胞的增殖能力.结果 MMP-9在癌组织中表达高于癌旁组织(3.17 ±0.79比1.00±0.25,P ＜0.01);MMP-9干扰组细胞增殖活力低于对照组(MTT:1.54±0.06比1.89±0.03,P＜0.01;克隆形成:6.33±1.53比13.33±0.58,P＜0.01);MMP-9过表达组细胞增殖活力高于对照组(MTT:2.10±0.12比1.82 ±0.04,P＜0.05;克隆形成:23.33-2.08比13.67±1.53,P＜0.01).miR-133b过表达组MMP-9表达低于对照组(0.42±0.06比1.00 ±0.12,P＜0.01);野生型MMP-9 3'端非编码区(3'UTR)质粒miR-133b过表达组荧光素酶活力低于对照组(0.49±0.08比0.97 ±0.08,P＜0.01),突变型MMP-9 3'UTR质粒miR-133b过表达组与对照组比较荧光素酶活力差异无统计学意义(0.95 ±0.11比1.02 ±0.15,P＞0.05).miR-133b过表达组细胞增殖活力低于对照组(MTT:1.34 ±0.04比1.54±0.06,P＜0.01;克隆形成:8.67±3.06比17.67±2.52,P＜0.05);miR-133b/MMP-9同时过表达组细胞增殖活力高于miR-133b过表达组(MTT:1.66±0.05比1.34±0.04,P＜0.01;克隆形成:22.00±4.00比8.67±3.05,P＜0.05).结论 miR-133b可以靶向下调MMP-9的表达并抑制结直肠癌细胞增殖.
关键词： 结直肠癌 微小RNA-133b 基质金属蛋白酶-9 增殖 -
微小RNA-133b在胃癌中的表达及意义
目的 研究miR-133b在胃癌细胞、正常胃黏膜上皮永生化细胞、胃癌组织及相应癌旁组织中的表达,探讨miRNA对胃癌发生发展的调控作用.方法 培养7种胃癌细胞株及正常胃黏膜上皮细胞,并收集56例胃癌患者癌组织及相应癌旁组织,提取细胞及组织中总的Small RNA,采用real-timePCR法检测miR-133b在胃癌细胞及组织中的表达,分析miR-133b的表达与细胞分化程度、临床病理特征的关系.结果 miR-133b在胃癌细胞及组织中均表达下调,差异具有统计学意义.miR-133b的低表达与细胞分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移显著相关.结论 miR-133b在胃癌细胞及胃癌组织中的表达明显下调,可能作为抑癌基因参与胃癌的发生、发展.
关键词： 胃癌 微小RNA-133b 实时荧光定量PCR
