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TaqMan-ARMS法文献资料
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TaqMan-ARMS法快速检测人MTHFR基因多态性
目的 利用PCR引物的错配扩增和荧光定量PCR技术,建立一种针对人亚甲基四氢叶酸还原酶(methylene tetrahydrofo-late reductase,MTHFR)基因多态性的快速荧光扩增检测方法.方法 收集已经测序验证的MTHFR基因C677T,A1298C位点的野生型、杂合型和突变型样本,并据此构建野生型和突变型质粒;根据野生型MTHFR基因序列设计ARMS(扩增阻碍突变系统)引物和TaqMan探针并筛选出合适的突变检测体系,与已知突变信息的214例样本进行比较,以验证该检测体系的可行性.结果 建立的TaqMan-ARMS法性能评估优异,样本的低检测限为10 copies/μL,样本间交叉检测无核酸扩增,体系检测阴性对照无核酸扩增;重复性及实验室内精密度结果良好,MTHFR-667位点和1298位点重复性检测的标准差介于0.11～0.44,纯合和杂合样本的变异系数(CV)均<4.52％.214例临床样本用该法检测结果与测序法的一致性为100％.结论 基于TaqMan-ARMS法检测MTHFR的基因多态性方法简单,快捷,精确,适合用于临床样本快速诊断.
