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酶解效率文献资料
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液相色谱串联质谱法检测血清载脂蛋白C的酶解效率
目的 分析液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)检测载脂蛋白(apo)C-Ⅰ、C-Ⅱ和C-Ⅲ的酶解效率,为其准确定量检测提供依据.方法 对不同apo C含量的混合人血清样品进行变性、还原、烷基化等前处理,经胰蛋白酶酶解,用LC-MS/MS定量检测目标肽段;分析多肽释放图谱和样品间多肽释放的相关性.结果 肽段TP(apo C-Ⅰ)、TY(apo C-Ⅱ)和GW(apo C-Ⅲ)的响应值较高.酶解1 h时,肽段ES和DA即达释放峰值;3 h时,TY释放充分;而TP、GW和EF的释放速率相对较慢,在8 h达高值.TP、TY和GW达峰值后,峰面积随酶解时间延长而逐步下降.apo C-Ⅰ释放出的2条肽段EF和TP在5份样品之间一致,相关系数(r)=0.9939(3 h)和0.9929(20 h);apo C-Ⅱ(ES和TY肽段)和apo C-Ⅲ(DA和GW肽段)的r值介于0.9761～0.9973.结论 apo C-Ⅰ、apo C-Ⅱ和apo C-Ⅲ肽段的酶解效率受肽段自身特性和酶解环境影响,合适地选择代表性肽段和酶解条件将有助于其准确定量检测.
