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前脑啡肽原基因转染对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响
目的 观察采用非病毒、非质粒微量免疫原定义的基因表达(minimalistic immunological defined gene expression,MIDGE)方法构建前脑啡肽原(preproenkephalin,PPENK)-MIDGE-核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)基因载体在缺血心肌的表达及对心肌的保护作用.方法 48只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为4组(每组12只):假手术组(C组)、缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组(I/R组)、载体组(P组)、拮抗剂组(D组).C组仅进行开胸手术,冠状动脉左前降支(left anterior descending,LAD)挂线不结扎;I/R组开胸结扎LAD 30 min再灌注24 h;P组尾静脉注射PPENK-MIDGE-NLS基因载体24 h后建立心肌I/R模型;D组实验前24 h尾静脉注射PPENK-MIDGE-NLS基因载体,实验前30 min给予纳曲吲哚(1 g/kg).记录缺血前(T0)和缺血30 min(T1)、再灌注30 min时(T2)的MAP、HR;按Lambeth会议标准记录T1和T2心律失常情况并评分;于I/R后24 h用ELISA检测大鼠血清肌钙蛋白I(carciac troponin I,cTnI)、 氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色测量心肌梗死面积、H-E染色观察心肌形态学改变、Western blot检测心肌组织内前脑啡肽(proenkephalin,PENK)的表达.结果 PPENK-MIDGE-NLS基因载体静脉注射后可减轻心肌I/R诱导的MAP、HR下降程度,P组的cTnI低于I/R组和D组(P<0.05),P组大鼠心律失常评分[(2.0±0.9)分]分别低于I/R组[(4.1±0.6)分]和D组[(4.0±1.0)分](P<0.05),P组的心肌梗死面积较I/R组明显减少(P<0.05),H-E染色示P组大鼠心肌损伤程度明显减轻,心肌PENK蛋白表达量明显高于其他组(P<0.05).结论 PPENK-MIDGE-NLS提高心肌缺血区PENK含量,具有心肌保护作用.
