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腹膜透析流出液中人腹膜间皮细胞的培养
目的 建立从腹膜透析(PD)流出液中培养人腹膜间皮细胞(HPMC)方法.方法 从10例PD患者PD流出液标本中收集HPMC并在体外进行原代培养,采用相差倒置显微镜、扫描电镜和免疫组化染色对培养的细胞进行鉴定.结果 8例PD患者流出液中HPMC在体外原代培养成活,经相差倒置显微镜观察原代培养的HPMC呈典型的铺路石样外观;免疫组化显示培养的HPMC胞浆角蛋白、波形蛋白表达均阳性,白细胞CD45抗原阴性;扫描电镜见培养细胞表面有许多长短不一呈丝状的微绒毛.结论 成功建立了从PD流出液中HPMC原代培养方法,该方法将对进一步PD的研究提供实验基础.
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川芎嗪对TNF-α诱导的人腹膜间皮细胞t-PA和PAI-1表达的影响
【目的】探讨川芎嗪对体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMCs）在肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）诱导后组织型纤溶酶原激活物（t‐PA）和纤溶酶原激活物抑制因子‐1（PAI‐1）表达的影响。【方法】应用胰蛋白酶消化法分离HPMCs进行原代培养并传代，分为5组（每组设3个样本）：正常对照组（完全培养液）、单纯TNF‐α（1μg／L）诱导组和TNF‐α诱导加低、中、高剂量川芎嗪（10、20和40 mg／L）组。采用半定量反转录聚合酶链反应（RT‐PCR）法检测细胞内t‐PA和PAI‐1 mRNA表达；酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中t‐PA和PAI‐1的蛋白质水平。【结果】与正常组比较，TNF‐α诱导组上清液中 t‐PA的含量减少和PAI‐1含量显著升高，且两组相比较差异有显著性（ P ＜0．01）；与TNF‐α诱导组比较，低、中、高剂量川芎嗪组上清液中t‐PA的含量增加，PA I‐1的含量显著降低，且两组相比较差异有显著性（ P ＜0．05或 P ＜0．01）。与正常组比较，单纯TNF‐α诱导组 HPMCs t‐PA／β‐actin mRNA 下降（87±5）％和 PAI‐1／β‐actin mRNA 上升（3．63±0．12）倍（ P ＜0．01）；与TNF‐α诱导组相比，低、中、高剂量川芎嗪组t‐PA／β‐actin mRNA表达明显增加（ P＜0．05或 P ＜0．01）和PAI‐1／β‐actin mR‐NA表达明显减少（ P＜0．05，P＜0．01），两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。【结论】川芎嗪干预后能促进 HPMCs在炎症状态下t‐PA生成增加并抑制PAI‐1的表达，从而减少纤维化的发生。
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辛伐他汀对高糖诱导下人腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF表达的影响
[目的]探讨辛伐他汀对在高糖诱导下体外培养的人腹膜间皮细胞转化细胞因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.[方法]胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代;采用半定量反转录多聚酶链反应法(Semi-Quantitative RT-PCR)检测细胞内TGF-β1和CTGF mRNA表达;酶联免疫双抗夹心法(ELISA)检测细胞上清液中TGF-β1和CTGF蛋白质水平,细胞沉淀用BCA蛋白检测方法测定细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果.[结果]辛伐他汀能显著降低高糖所致的腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF蛋白质水平(TGF-β1,P<0.05;CTGF,P<0.01),并下调其mRNA表达(TGF-β1,P<0.01;CTGF,P<0.05),两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系. [结论]辛伐他汀能抑制高糖诱导下腹膜间皮细胞致纤维化细胞生长因子TGF-β1和CTGF的过度表达.
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葛根素对腹膜透析液诱导的体外培养人腹膜间皮细胞损伤的保护作用
[目的]了解葛根素对腹膜透析液干预下的体外培养的人腹膜间皮细胞增殖活性及转化生长因子β1(TGF-β1)分泌的影响.[方法]体外培养的人腹膜间皮细胞,分对照组、PDS组、A组(葛根素终浓度为50 μg/mL)、B组(葛根素终浓度为100 μg/mL)、C组(葛根素终浓度为200 μg/mL)五组观察.检测各组上清液中TGF-β1的含量以及间皮细胞的增殖活性并比较.[结果]腹膜间皮细胞在PDS干预下,TGF-β1分泌显著增加,添加葛根素再干预的A、B、C组TGF-β1分泌与PDS组比较有显著下降.与PDS组比较,A、B、C组间皮细胞增殖活性显著升高.[结论]葛根素可以抑制腹膜间皮细胞TGF-β1分泌,拮抗腹膜透析液对腹膜间皮细胞增殖活性的抑制作用.
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脂多糖通过NF-κB信号途径上调大鼠腹膜间皮细胞表达IP-10
目的 观察脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞表达干扰素诱导蛋白(IP)-10的情况及核因子(NF) κB信号通路在其中的作用.方法 分离及培养大鼠腹膜间皮细胞.于脂多糖不同浓度(0、10、100、1 000、10 000 ng/ml)作用3h及脂多糖(100 ng/ml)作用不同时间点(0、1、3、6、12、24、48 h)收集细胞;脂多糖(100 ng/ml)或BAY 11-7085(一种IκBα的磷酸化抑制剂)不同浓度(5μmol/L)预处理2h加脂多糖,作用3h后收集细胞;采用RT-PCR方法检测IP-10 mRNA表达.采用蛋白印迹检测NF-κB p65 (p65)蛋白表达,采用ELISA方法测定IP-10蛋白的表达.结果 与常规培养基对照组相比,10 ng/ml脂多糖组IP-10 mRNA表达显著升高(P＜0.05),1 000 ng/ml脂多糖组高,但与10 ng/ml脂多糖组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).脂多糖(100 ng/ml)作用下,IP-10 mRNA表达从1h开始升高,3h达到高峰,之后逐渐降低.常规培养的大鼠腹膜间皮细胞结构性表达p-p65蛋白;加入脂多糖后,p-p65蛋白表达显著增加,其中30 min至1h表达强,之后逐渐降低,至2h仍显著高于常规培养组(P＜0.05).加入5μmol/L BAY11-7085后,脂多糖诱导的IP-10基因和蛋白表达显著降低(P＜0.05).结论 脂多糖以时间依赖和浓度依赖模式上调IP-10的表达.NF-κB信号途径参与调节脂多糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞IP-10的表达.
