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短发卡结构状核糖核酸文献资料
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短发卡结构状RNA体外抑制呼吸道合胞病毒M2基因 mRNA水平和病毒蛋白表达的研究
目的 观察针对人类呼吸道合胞病毒(RSV)M2基因Mrna构建的短发卡结构状RNA重组质粒在细胞水平对RSV复制的影响,为利用RNA干扰技术抑制RSV感染的研究奠定基础.方法 将已成功构建的重组质粒pshRNA7816/8330转染Hep-2细胞,通过显微镜观察pshRNA7816/8330对RSV感染细胞病变(CPE)的抑制效率,利用四甲基偶氮唑盐比色实验检测pshRNA7816/8330的细胞毒性,经RT-PCR方法检测pshRNA7816对RSVM2 Mrna表达的影响,免疫细胞化学染色法检测pshRNA7816对细胞内RSV蛋白的影响.结果 pshRNA7816/8330对Hep-2细胞的正常生长没有明显的细胞毒性作用,2个重组质粒均能抑制RSV所致的CPE,但pshRNA7816对CPE抑制作用较pshRNA8330要强,RT-PCR和免疫细胞化学染色法结果显示pshRNA7816能明显降低RSVM2基因Mrna和RSV蛋白表达水平.结论 针对RSVM2-1基因所构建的短发卡结构状RNA重组质粒pshRNA7816在细胞水平能有效抑制RSV的CPE形成降低RSVM2 mRNA和病毒蛋白表达水平,从而干扰RSV的复制.
关键词： 短发卡结构状核糖核酸 呼吸道合胞病毒 基因 病毒复制
