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差速脱壁法文献资料
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酶差速脱壁法联合差速贴壁法分离人颊黏膜上皮干细胞
目的 培养人颊黏膜上皮细胞和分离上皮干细胞,在角膜缘干细胞微环境下诱导颊黏膜上皮干细胞转分化,为前者获取足够的种子细胞.方法 应用Epilife培养基培养颊黏膜上皮细胞,使用CFSE标记,观察CFSE标记率及标记细胞与未标记细胞的生物学特性.采用免疫荧光检测第2代细胞P63、CK12、CK13的表达.应用酶差速脱壁法联合差速贴壁法分离培养颊黏膜上皮干细胞,观察体外培养生物学特性.采用免疫荧光检测第2代纯化细胞P63、CK12、CK13的表达.结果 颊黏膜上皮细胞在Epilife培养基中生长良好.CFSE标记率可达100％,标记细胞与未标记细胞生物学特性相似.经联合分离法获得的第2代细胞免疫荧光P63、K13阳性,K12阴性,而未经联合分离法获得的第2代细胞免疫荧光CK13阳性,P63、CK12阴性.结论 人颊黏膜上皮细胞在Epilife培养基中生长良好.CFSE是理想的颊黏膜上皮细胞荧光标记物.酶差速脱壁法联合差速贴壁法纯化了颊黏膜上皮干细胞,为转分化为角膜上皮干细胞获取了足够的种子细胞.
