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FN3结构域文献资料
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人源Fank1蛋白质FN3结构域多肽的原核表达,纯化及晶体筛选
目的 纯化人源Fank 1(fibronectin typeⅢ and ankyrin repeat domain 1)蛋白质N端FN3(fibronectin typeⅢ,Ⅲ型纤黏连蛋白)结构域蛋白,用于晶体生长的三维结构分析.方法 将FN3结构域基因片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株.该菌株经IPTG诱导高效表达出带有GST标签的可溶性的融合蛋白,经过Glutathione SepharoseTM4B亲和层析、Hiload 16/60 superdex200分子筛层析纯化后,蛋白纯度达到95 %以上.结果 纯化蛋白采用悬滴气相扩散法得到棒状晶体.结论 成功制备了高纯度FN3蛋白,获得FN3蛋白质晶体,为进一步的三维结构解析及Fank 1功能研究奠定了基础.
