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RSPO4和乳腺癌细胞经典Wnt信号通路相关性研究
目的:探讨R-spondin4 (RSPO4)对乳腺癌经典Wnt信号通路影响.方法:以0,10,50,250 ng·mL-1不同质量浓度RSPO4处理乳腺癌细胞株MDA-MB-231和HS578T 24 h,运用荧光素酶报告基因技术分析其对β-连环蛋白(β-catenin)/TCF转录活性影响;同时运用谷胱甘肽转移酶-E-钙黏蛋白(GST-E-cadherin)结合法提取胞浆游离β-catenin,Western blot法测定总β-catenin、胞浆游离β-catenin、低密度脂蛋白相关受体-6 (LRP6)及磷酸化LRP6 (p-LRP6)及Axin2蛋白水平.结果:RSPO4可明显增强乳腺癌细胞株MDA-MB-231和HS578T的TOP flash活性,升高p-LRP6、胞浆游离β-catenin、Axin2蛋白水平,并呈现剂量依赖性.结论:RSPO4可激活乳腺癌细胞经典Wnt信号通路.
关键词： RSPO4 低密度脂蛋白相关受体-6 经典Wnt信号通路 乳腺癌 -
LRP6受体胞内区赖氨酸位点突变和经典Wnt信号通路相关性分析
目的:探讨LRP6受体胞内区赖氨酸位点突变对经典Wnt信号通路影响.方法:构建胞内区3个赖氨酸位点(K8R、K48R及K82R)同时突变的突变型LRP6受体,瞬时转染HEK293细胞,运用荧光素酶报告基因技术分析其对β-catenin/TCF转录活性影响;同时运用谷胱甘肽转移酶-E-钙粘蛋白(GST-E-cadherin)结合法提取胞浆游离β-连环蛋白(β-catenin),Western blot法测定总β-连环蛋白、胞浆游离β-连环蛋白、低密度脂蛋白相关受体-6(LRP6)及磷酸化LRP6(p-LRP6)蛋白水平.结果:和转染空白质粒PcDNA3比较,转染LRP6增强TOPflash活性593倍(P＜0.05),提高胞浆游离β-catenin水平126.3％;而转染赖氨酸突变的LRP6将进一步增强TOPflash活性,达2 989倍(P＜0.05),胞浆游离β-catenin水平提高580.5％;和转染未突变LRP6相比,转染胞内区赖氨酸突变LRP6受体激活Wnt信号通路作用更强.结论:LRP6胞内区赖氨酸位点在LRP6参与Wnt信号通路活化过程中可能具有重要作用.
关键词： 赖氨酸残基 低密度脂蛋白相关受体-6 经典Wnt信号通路 突变 -
粗糠柴毒素对前列腺癌细胞经典Wnt信号通路影响
目的:探讨粗糠柴毒素(Rottlerin)对前列腺癌细胞PC-3经典Wnt信号通路作用.方法:以不同浓度Rottlerin处理PG-3细胞24 h,谷胱甘肽转移酶E-钙粘蛋白(GST-E-cadherin)结合法提取胞浆游离β-连环蛋白(β-catenin),Western blot法测定总β-连环蛋白、胞浆游离β-连环蛋白、低密度脂蛋白相关受体-6(LRP6)及磷酸化LRP6(p-LRP6)蛋白水平.结果:Rot-tlerin可明显降低PC-3胞浆游离β-连环蛋白水平、LRP6及p-LRP6蛋白水平,并成剂量依赖性,和对照组比较,Rottlerin0.25、0.5、1.0和2.0μmol· L-1组胞浆游离β-连环蛋白水平分别下降54.0％,78.6％,79.7％和79.6％,LRP6表达分别下降17.9％,38.8％,63.2％和85.0％,p-LRP6水平分别下降29.4％,67.1％,96.3％和97.4％.结论:Rottlerin可通过LRP6受体抑制PC-3细胞经典Wnt信号通路.
关键词： 粗糠柴毒素 低密度脂蛋白相关受体-6 经典Wnt信号通路
