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LDTI抑制肥大细胞类胰蛋白酶活性并阻断其抑制胆固醇流出能力的研究
目的:肥大细胞(MCs)类胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,目前未发现其体内内生的抑制剂.本研究用水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂(LDTI)研究MCs颗粒释放液抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的机制.方法:用Compound 48/80刺激大鼠腹腔MCs活化,制备颗粒释放液.荧光分光光度仪检测MCs组胺释放率.采用丙酮抽提LDTI并用反相高效液相纯化.酶法检测MCs颗粒释放液中类胰蛋白酶的活性.用15%非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳检测HDL3的改变.用高效液相色谱检测细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)含量,液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出.结果:MCs颗粒释放液使泡沫细胞内胆固醇流出减少,总、游离胆固醇蓄积增加,HDL3的载脂蛋白A-I降解;而用LDTI抑制MCs颗粒释放液中类胰蛋白酶的活性后,可取消MCs颗粒释放液的这些作用.结论:LDTI能抑制MCs颗粒释放液的作用,表明类胰蛋白酶可以抑制胆固醇外流,而且与HDL3的apoA-I的降解有关.
关键词： 肥大细胞 类胰蛋白酶 水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂 高密度脂蛋白3 胆固醇流出 -
高密度脂蛋白及其亚类对ECV304细胞产生组织因子的调控作用
目的 研究高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)及其亚类对ECV304细胞产生组织因子的调控作用.方法 实验分对照组(未加任何刺激因素)、刺激因素组(分别加组胺、凝血酶和氧化型高密度脂蛋白)和刺激因素加高密度脂蛋白及其亚类组.用TRIZOL法抽提RNA,普通PCR、实时定量PCR检测组织因子表达情况.结果 未加任何刺激因素的ECV304细胞不表达组织因子.刺激因素组:(1)组胺、凝血酶和氧化型高密度脂蛋白(oxidized high density lipoprotein)均能刺激ECV304细胞产生组织因子(P＜0.05).(2)刺激因素加高密度脂蛋白及其亚类组分别跟加相同刺激因素组相比,均能使组织因子的表达下降.其中HDL对组胺诱导的组织因子表达与对照组相比降低近50%(P＜0.05).HDL2对组胺诱导的组织因子表达下调12%(P＜0.05).HDL、HDL2和HDL3对凝血酶诱导的组织因子的表达分别下调6%、16%和14%(P＜0.05).结论 凝血酶、组胺和氧化型高密度脂蛋白均能刺激ECV304细胞产生组织因子,高密度脂蛋白及其亚类可抑制这些因素刺激的组织因子表达上调.
