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人大肠癌SW620细胞文献资料
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非编码基因MALAT1功能性序列真核表达载体的构建及其在SW620细胞中的表达
目的 构建人肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)功能性序列重组真核荧光表达载体,并在人大肠癌SW620细胞株中表达.方法 采用RT-touchdown PCR方法 ,从人正常大肠黏膜组织中提取总RNA,扩增MALAT1功能性序列,将扩增产物克隆至pTA2载体,测序证实后,克隆至pEGFP-C1质粒中,构建重组真核荧光表达载体;阳离子脂质体介导下转染人大肠癌SW620细胞,荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达.通过Real-time PCR检测质粒转染前后MALAT1/fgf mRNA表达水平的变化.结果 经pTA2载体和pEGFP-C1载体克隆、酶切鉴定及序列分析后,证实人MALAT1功能性序列重组真核荧光表达载体构建成功.在荧光显微下观察到带绿色荧光的SW620细胞.pEGFP-C1-MALAT1/fgf转染前后SW620细胞MALATI/fgf mRNA表达水平倍比关系为2.376±0.573,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建了人MALAT1功能性序列真核荧光表达载体pEGFP-C1-MALAT1/fgf,转染SW620细胞后可引起MALAT1/fgf mRNA表达上调,为进一步研究MALAT1的结构、功能及其与人大肠癌的关联奠定了基础.
