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Cel-miR-39-3p文献资料
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三种方法提取血清miRNA效果的比较
目的：比较Trizol法、蛋白酶K消化＋ Trizol法及沉淀裂解法提取血清miRNA的效果。方法分别选取2例健康人、2例肺炎患者和2例肺癌患者血清，以Let‐7a‐5p作为目标mRNA ，线虫Cel‐miR‐39‐3p作为内参，分别采用Trizol法、蛋白酶K消化＋ Trizol法及沉淀裂解法提取血清miRNA ，以Let‐7a‐5p及Cel‐miR‐39‐3p特异性引物进行反转录PCR ，以反转录PCR产物为模板运用SYBGreen Ⅰ法进行荧光定量PCR检测。结果 T rizol法与蛋白酶K消化＋ Trizol法均能有效提取到血清miRNA ，而沉淀裂解法由于没有对血浆中的RNA进行富集故提取效果不佳。T rizol法提取较蛋白酶K消化＋ T rizol法相比，可以减少蛋白酶K的消化时间且提取效果更好，并且血清与Trizol试剂的体积比为200∶600时效果相对较好。三种方法检测Cel‐miR‐39‐3p的Ct值基本一致。Tr‐izol法和蛋白酶K消化＋ Trizol法在提取过程中加入的内参丢失较少。结论 Trizol法作为总RNA提取的手段适用于血清miRNA提取，通过调整血清与Trizol试剂的用量可使提取到的血清miRNA能够满足试验需要。
关键词： miRNA let-7a-5p Cel-miR-39-3p 提取
