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AFP顺式作用元件文献资料
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肝癌特异性超抗原SEA(D227A)基因表达载体的构建与表达
目的: 构建受AFP顺式作用元件调控的超抗原表达载体, 将SEA(D227A)特异性的表达于AFP 阳性肝癌细胞膜表面.方法: PCR扩增AFP基因启动子、增强子、linker-CD80tm和SEA(D227A).将上述片断插入逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点, 构建AFP基因顺式作用元件调控的肝癌特异性减毒超抗原表达载体(pLXSN SEA(D227A)-linker-CD80 tm).通过脂质体介导, 以表达载体转染表达或不表达AFP的肿瘤细胞系, 用RT-PCR和间接免疫荧光染色, 检测SEA的表达.结果: 成功地将AFP基因的启动子、增强子、linker-CD80tm和SEA(D227A)克隆到逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点, 酶切鉴定和DNA序列分析无误, RT-PCR和间接免疫荧光法检测证实, SEA(D227A)能在AFP阳性的肝癌细胞膜特异性表达.结论: AFP顺式作用元件修饰的超抗原表达载体的构建, 为下一步用其强化肝癌的免疫治疗奠定了基础.
