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大鼠骨髓间充质干细胞诱导血管内皮细胞的实验研究
目的 探讨诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向血管内皮细胞(VEC)分化的方法和VEC的生物学特性.方法 采用贴壁筛选法收集SD大鼠股骨及胫骨骨髓细胞中的BMSCs,孵育至第三代细胞汇合90%后分为2组:实验组在含10%胎牛血清(FBS)的M199培养液中添加诱导剂血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF);对照组加入含10%FBS的M199培养液,继续培养、孵育.观察2组细胞生长形态特征,应用CCK8试剂盒检测细胞增殖,绘制细胞生长曲线.采用流式细胞仪检测2组细胞表面特异性标记物CD29、CD44、CD90、CD31、CD34和血管性假血友病因子(vWF),免疫组织荧光法检测2组vWF.结果 P3代细胞表达CD29、CD44、CD90的阳性率分别为74.8%、84.4%、95.5%,提示在P3代时已可以得到相对较纯的MSCs.实验组细胞表面特异性标记物CD31、CD34、vWF 分别为0.1%、0.4%、6.8%,对照组细胞表面特异性标记物CD31、CD34、vWF分别为3.3%、0.1%、5.5%.实验组免疫荧光染色vWF阴性.结论 在无菌环境下SD大鼠全骨髓细胞通过换液、传代培养得到相对较纯的P3代细胞,方法简单易行,但大鼠BMSCs添加VEGF和bFGF诱导后未能分化为VEC.
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大鼠骨髓单个核细胞诱导内皮细胞的实验研究
目的：探讨诱导大鼠骨髓单个核细胞向血管内皮细胞分化的方法和诱导的血管内皮细胞的生物学特性。方法采用Ficoll密度梯度离心法收集SD大鼠股骨及胫骨骨髓细胞中的单个核细胞，孵育至细胞汇合40％后分为两组：实验组在含10％胎牛血清（FBS）的M199培养液中添加诱导剂血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）；对照组加入含10％ FBS的M199培养液，继续培养、孵育。观察细胞生长形态特征，应用CCK8试剂盒检测细胞增殖，绘制细胞生长曲线，并计算细胞群体倍增时间。采用流式细胞仪检测细胞表面特异性标记物CD31、CD34和血管性假血友病因子（vWF），免疫组织荧光法检测vWF。结果实验组细胞培养6 d后贴壁细胞呈线性排列，10～12 d后细胞增大，周边为毛刺状，单个核位于中央，类铺路石状排列；对照组细胞呈梭形生长，4 d后细胞呈梭形、纺锤形或三角形。实验组细胞生长曲线呈M型，群体倍增时间为8 d （192 h ）；对照组细胞生长曲线呈S 型，群体倍增时间为5 d （120 h ）。实验组细胞表面特异性标记物 CD31、CD34、vWF 分别为296．％、502．％、982．％，对照组细胞表面特异性标记物CD31、CD34、vWF分别为06．％、19．％、53．％。实验组免疫荧光染色vWF阳性，对照组免疫荧光染色vWF阴性。结论 SD大鼠骨髓单个核细胞内添加诱导剂后能在体外向血管内皮细胞分化，并具有一定的生物学特性。
