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刺五加鲨烯环氧酶基因cDNA的克隆及序列分析
目的:对刺五加鲨烯环氧酶基因的cDNA进行克隆及序列分析.方法:采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,逆转录为cDNA,根据已报道的人参SE基因cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法克隆刺五加SE基因的cDNA序列.结果:克隆了2个序列不同的cDNA(SE1和SE2),开放阅读框分别长1 665,1 629 bp,分别编码554,542个氨基酸.SE1,SE2间的核苷酸和氨基酸一致性分别为91.49％,92.55％,两者与三七SE1的氨基酸序列相似性高,分别为93.45％,94.87％.SE1,SE2均含有1个FAD结合区域,SE1,SE2推测的氨基酸分别存在2个和4个跨膜螺旋.结论:首次分离并报道了刺五加的2个SE基因cDNA序列,为刺五加的次生代谢工程研究奠定了基础.
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刺五加鲨烯环氧酶基因家族2成员表达特性的分析
刺五加的鲨烯环氧酶(SE)基因家族存在2个成员.为了探明其表达特性,利用实时荧光定量PCR技术,分析刺五加SE1,SE2在不同生长发育时期、器官和茉莉酸甲酯(MeJA)处理对其表达及皂苷含量的影响.结果表明,刺五加SE2在各时期、器官中表达量均显著高于SE1.在整个生长期中SE1表现为低-高-低的特点,SE2则表现出随着生长的进行而显著降低的变化趋势,两者均在根中的表达量低,MeJA处理对SE1的提升水平显著高于SE2.刺五加的皂苷含量与SE1表达量间的相关系数为0.858,呈显著的正相关关系(P＜0.05),而SE2未达显著水平.说明SE1是催化刺五加三萜皂苷生物合成的关键酶.
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刺五加鲨烯环氧酶基因的表达及其与刺五加皂苷含量的相关性分析
目的:应用实时定量PCR技术对刺五加鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)基因进行表达分析,探讨其与刺五加皂苷含量的关系.方法:以3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因为内参照基因,通过实时定量PCR检测SE基因的相对表达量,分光光度法测定刺五加皂苷含量.结果:不同产地、器官中的SE表达量存在显著差异(P＜0.05),其中,雾灵山产地的表达量大,达小值(伊通产地)的4.81倍,各器官中,叶的表达量大,为根的1.92倍.从叶片萌芽期到衰老期,SE的表达呈先升后降趋势,各发育期之间差异显著(P＜0.05),其中盛花期的表达量高,达萌芽期的3.71倍;茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)可提高SE的表达量,但未达显著水平.刺五加叶的皂苷含量与SE的表达量之间存在显著的正相关关系(P＜0.05).结论:不同产地、器官及生长发育时期刺五加SE的表达量间差异显著,且SE的表达与刺五加的皂苷含量显著相关.
