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  • 含HIV-1 gag、gagV3基因的重组腺病毒伴随病毒的构建及其免疫原性的研究

    作者:刘雁征;吴小兵;周玲;伍志坚;侯云德;曾毅

    将HIV-1中国株42(B亚型)的gag基因及gag与gp120 V3区的嵌合基因gag V3插入腺病毒伴随病毒(AAV)表达载体pSNAV质粒中,构建重组质粒pSNAV-gag及pSNAV-gagV3;采用脂质体转染的方法分别将重组质粒转入BHK细胞,G418筛选得到转入重组质粒并能表达外源基因的细胞系,命名为BHK-gag及BHK-gagV3.用具有重组腺病毒伴随病毒(rAAV)包装功能的一种重组单纯疱疹病毒(rHSV)分别感染这两株细胞系,纯化后得到rAAV,电镜观察可见到大量实心病毒颗粒,核酸杂交检测重组病毒滴度达到1012病毒颗粒/ml,重组病毒感染293细胞,ELISA检测有gag及gagV3基因的表达.用重组病毒免疫Balb/C小鼠,检测抗体及细胞免疫水平,证明重组病毒可以在小鼠体内诱导产生细胞及体液免疫.