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K亚群禽白血病病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立及初步应用
根据GenBank数据库K亚群禽白血病病毒(Subgroup K avian leukosis virus,ALV-K)特异性抗原gp85的基因序列,设计一组ALV K特异性的引物和探针,并构建阳性重组质粒.在对反应体系进行优化的基础上,建立了ALV-K的实时荧光RT-PCR检测方法并进行了特异性试验、敏感性试验和重复性试验.结果显示,本方法能对ALV-K进行特异性扩增,而对A亚群、B亚群、J亚群、E亚群禽白血病毒和新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、禽网状内皮组织增生病病毒(REV)、禽流感病毒(AIV)等禽病病原未见扩增.该方法低能够检测到3.4×101拷贝数/μL的阳性质粒,灵敏度是RT-PCR的100倍.应用本方法对人工攻毒ALV-K的SPF鸡各脏器进行病毒定量分析,结果显示,在攻毒鸡体内心、肝、脾、肺、肾等脏器中均能检测到ALV-K,且肝、肾和脾中的病毒含量显著高于心和肺(P＜0.01).
关键词： 禽白血病病毒(ALV-K) K亚群 实时荧光RT-PCR 检测方法 应用
