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大鼠面神经核小GTP结合蛋白TC10的表达和真核表达载体的构建
目的分析大鼠小GTP结合蛋白TC10基因在大鼠面神经损伤早期的表达和作用,构建大鼠TC10的真核表达载体. 方法由大鼠损伤的面神经核中提取组织总RNA,利用逆转录聚合酶链反应技术观察面神经损伤后面神经核团TC10的表达变化,将获得的基因片段酶切后插入pcDNA3真核表达载体中,利用酶切电泳和核苷酸序列分析鉴定. 结果逆转录聚合酶链反应显示在正常情况下,面神经核团有TC10的表达,切断后6h即出现增加,24h达到大值.TC10真核表达质粒酶切电泳及序列测定证明,所获得的基因片段为大鼠TC10全长基因cDNA序列. 结论面神经切断后,TC10在面神经核团出现急剧增加,可能参与了神经元早期损伤反应的信号转录.本实验首次从大鼠面神经核团中获得大鼠TC10的cDNA,并构建了TC10真核表达质粒.为研究TC10的表达及作用提供了必要条件.
关键词: 小GTP结合蛋白 逆转录聚合酶链式反应 基因克隆 大鼠 -
神经生长因子在鼠原代培养脑干神经元中对TC10的调控及生物学作用研究
目的:观察神经生长因子NGF对脑干神经元的调控及小GTP结合蛋白TC10在此过程中的信号转导作用.方法:采用神经细胞培养技术,加入NGF,观察了NGF在脑干神经元的存活和生长的影响.原位杂交检测NGF对小GTP结合蛋白TC10mRNA表达的促进作用.结果:加入NGF后,脑干神经元的存活数目和神经突起的数目都明显高于对照组,NGF对脑干神经元TC10 mRNA具有激活作用.结论:NGF能增强TC10 mRNA的表达,减少脑干神经元的死亡,促进神经突起的伸长.提示该作用可能与TC10的激活有关.