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pET22b栽体文献资料
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斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因pET22b载体的构建及表达
目的构建含斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的pET22b(+)表达载体,利用SDS-PAGE和免疫印迹分析阳性克隆菌株的诱导表达及其表达产物的免疫原性.方法提取斯氏狸殖吸虫成虫总RNA,经RT-PCR扩增及T/A克隆后测定其核苷酸序列并进行序列查询与比对.根据已获得的序列和pET22b(+)载体的内切酶位点信息设计引物并再次进行T/A克隆,阳性克隆质粒经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段与pET22b(+)载体连接并转化至BL21(DE3)菌株,收集经IPTG诱导表达后的菌液进行SDS-PAGE和免疫印迹分析.结果 SDS-PAGE显示,经诱导表达的阳性克隆菌株、未经诱导菌株与空载体菌株之间的蛋白带型未见明显差异,但经诱导表达的阳性克隆菌株的22 ku蛋白条带比另两菌株明显,免疫印迹证实,该蛋白条带可与斯氏狸殖吸虫成虫ES抗原免疫豚鼠血清发生强阳性反应.结论成功构建了含斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因的pET22b(+)载体,经诱导表达的融合蛋白能与斯氏狸殖吸虫成虫ES抗原免疫豚鼠血清发生较强的免疫反应.
