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分化抑制蛋白1在小鼠树突状细胞肉瘤细胞分化中的作用
目的 研究降低分化抑制蛋白1(Id.1)的表达在树突状细胞肉瘤(DCS)细胞分化中的作用.方法 通过RNA干扰技术来降低DCS细胞株中Id-l蛋白的表达,Western blot和real.timePCR分别检测该蛋白在蛋白水平和mRNA水平L的变化;倒置显微镜下观察降低Id.1蛋白表达后DCS细胞形态的变化;Casy细胞计数分析仪检测细胞大小的分布情况;流式细胞仪检测细胞周期的变化.通过Western blot和免疫组织化学检测树突状细胞的分化标志如Id-2、CD86、CDllc、MHC II的变化.生长曲线及四甲基偶氮唑盐(MTY)法检测DCS细胞的增殖情况的变化;通过TransweH和克隆形成率测定分别观察降低Id-1蛋白前后细胞侵袭、成瘤能力的变化.以不加siRNA的空白组和无关 对照siRNA作阴性对照,以诱导分化剂丁酸钠作为阳性对照.结果 降低Id-1蛋白表达后DCS细胞分枝增多,细胞体积明显增大,核质比下降,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.01),树突状细胞分化标志Id-2、CD86等表达上调,细胞增殖受到抑制,侵袭、成瘤能力减弱(P<0.01).结论 通过RNA干扰技术降低Id-1基因的表达,可以促进恶性实体肿瘤细胞的分化,降低恶性程度.
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FHL2抑制乳腺癌MCT-7细胞增殖与侵袭生长的机制探讨
目的探讨FHL2对分化抑制蛋白1(Id1)的转录调控活性及Id1促乳腺癌细胞侵袭生长效应的影响.方法采用共转染双荧光素酶相对活性检测方法检测乳腺癌MCF-7细胞中FHL2对Id1介导的转录抑制功能的影响,MTT方法检测细胞的增殖能力,Transwell方法观察细胞的侵袭能力.结果 Id1对碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子E47介导的转录激活功能具有显著抑制作用,而FHL2明显削弱了该效应,并呈现出对FHL2转染剂量的依赖性;与空载体转染组比较.Id1明显促进了MCF-7细胞的增殖速率与侵袭能力,而该效应可被FHL2显著削弱(P<0.05).结论 FHL2可通过抑制Id1的功能活性来抑制乳腺癌细胞的增殖及侵袭生长,为深入研究FHL2-Id1信号途径在乳腺癌发生发展中的功能效应奠定了基础.
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下调DNA结合分化抑制蛋白1基因对人结肠癌SW480细胞株体外转移和侵袭能力的影响研究
背景 既往研究已经证实DNA结合分化抑制蛋白1(Id-1)表达升高在结直肠癌的发生、发展中发挥重要作用,但Id-1对结肠癌细胞侵袭行为影响及机制的研究较少.目的 探讨下调Id-1基因对人结肠癌SW480细胞株增殖、转移、侵袭能力的影响及作用机制.方法2016年1-6月,人结肠癌SW480细胞株分为3组:空白组,未进行转染;空载体组,用空载体进行转染;抑制组,采用Id-1特异小干扰RNA (siRNA)进行转染,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blotting法检测各组细胞Id-1和Ki-67基因及蛋白的表达情况,采用MTT法检测细胞增殖能力,采用细胞划痕实验、Transwell小室和Matrigel侵袭实验评价Id-1对细胞转移和侵袭能力的影响.结果 3组细胞Id-1、Ki-67 mRNA及其相应蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);抑制组细胞Id-1、Ki-67 mRNA及其相应蛋白表达水平较空白组、空载体组降低(P＜0.05).培养第1、2天,3组细胞增殖吸光度(OD值)比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).培养第3～7天,3组细胞增殖OD值比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);其中抑制组细胞增殖OD值较空白组及空载体组降低(P＜0.05).细胞划痕实验结果显示,抑制组细胞缓慢向中央迁移,缺损处修复较缓慢,空白组和空载体组细胞向划痕处的迁移速度明显加快,而空白组与空载体组间的迁移速度差异不明显.Transwell小室和Matrigel侵袭实验表明,3组迁移细胞数量和侵袭细胞数量比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);抑制组迁移细胞数量和侵袭细胞数量较空白组、空载体组减少(P＜0.05).结论 下调Id-1基因能抑制人结肠癌SW480细胞株的增殖、转移和侵袭能力,其机制可能与抑制Ki-67的表达有关.
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Id-1在结直肠癌中的表达及其与bFGF、Bcl-2和PCNA的关系
目的 研究DNA结合/分化抑制蛋白-1(Id-1)在结直肠癌(CRC)中的表达,并通过分析其与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2的关系,探讨其在CRC发生发展过程中的意义.方法 收集CRC手术切除标本103例,癌旁结直肠组织20例(离癌灶＜3 cm),并以20例正常结直肠组织为对照,免疫组织化学方法检测其Id-1、bFGF、Bcl-2和PCNA的表达.结果 CRC中Id-1、bFGF、Bcl-2和PCNA的阳性表达率分别为80.6%(83/103)、78.6%(81/103)、70.9%(73/103)、81.6%(84/103),其阳性表达率和表达强度均明显高于正常结直肠组织.Id-1及bFGF的表达与结直肠癌的分化程度呈正相关.Id-1在≥5 cm的CRC中的表达高于＜5 cm的CRC.Id-1的表达与CRC的淋巴结转移无相关性.Id-1的表达与bFGF、Bcl-2及PCNA呈正相关性(分别为r=0.372,P<0.001;r=0.274,P=0.005;r=0.303,P=0.002).结论 Id-1在CRC中可能参与了肿瘤血管形成、抑制细胞凋亡的调控及细胞增殖调控,但可能不直接参与CRC的转移.
关键词： 结直肠肿瘤 分化抑制蛋白1 成纤维细胞生长因子2 增殖细胞核抗原 免疫组织化学 -
龟板提取物调控骨髓间充质干细胞中Id1表达的研究
目的 观察龟板提取物在不同的时间点对骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1的影响.方法 将构建成功的PGL3-Id1启动子用磷酸钙共沉淀法转染大鼠骨髓间充质干细胞,龟板提取物分别作用于转染后的骨髓间充质干细胞36小时、3天、7天,每个时间点分别加入0,1,3,30,100μg/ml的龟板提取物,药物作用一定时间后收集细胞分别应用萤光素酶报告基因系统、RT-PCR检测Id1蛋白的表达.结果 36小时和3天时,小剂量的龟板提取物对分化抑制蛋白1的影响不大,随着时间和剂量的增加,龟板提取物量效依赖性地促进了Id1的表达;7天时,龟板提取物对Id1的促进作用逐渐减弱.结论 龟板提取物促进了骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1的表达,且其促进作用呈现增高-强-减弱的特点.
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人分化抑制蛋白1慢病毒干扰载体的构建、筛选及其沉默效应的鉴定
目的 探索以小干扰RNA (siRNA)慢病毒干扰载体组建的慢病毒对人HepG2细胞分化抑制蛋白1(Id1)基因的沉默效应.方法 构建4种针对Id1基因不同干扰靶点的Id1-siRNA慢病毒干扰载体(pCGSIL-GFP-Id1-1、pCGSIL-GFP-Id1-2、pCGSIL-GFP-Id1-3及pCGSIL-GFP-Id1-4),将其转染至293T细胞,以筛选出针对Id1基因的有效的RNA干扰(RNAi)靶序列.再以沉默效果优的干扰载体进一步构建慢病毒(Id1-RNAi-LV),感染人HepG2细胞后,采用实时定量PCR法和Western blot法分别检测其Id1 mRNA及其蛋白的表达水平.结果 与pCGSIL-GFP-Id1-1组、pCGSIL-GFP-Id1-2组及pCGSIL-GFP-Id 1-3组比较,pCGSIL-GFP-Id1-4组的Id1蛋白表达水平低(P＜0.05),沉默效果优.以pCGSIL-GFP-Id1-4干扰载体组建慢病毒后,测得慢病毒的病毒滴度为2.0×109 TU/mL.与空白对照组和阴性对照组比较,以组建的慢病毒感染人HepG2细胞后,人HepG2细胞中Id1mRNA及其蛋白的表达水平均降低(P＜0.05).结论 本实验构建的特异性慢病毒可稳定地介导Id1基因的沉默.
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龟板提取物对骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1表达的影响
目的 观察不同剂量的龟板提取物对骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1(inhibitor of differentiation 1,Id1)的作用.方法 将构建成功的PGL3-Id1启动子用磷酸钙共沉淀法转染大鼠骨髓间充质干细胞,龟板提取物分别作用于转染后的骨髓间充质干细胞12、24、36h,选取作用为明显的36h,每组分别加入0、1、3、30、100 μg/mL龟板提取物,药物作用36h后收集细胞分别应用萤光素酶报告基因系统、RT-PCR和Western blotting检测Id1的表达.结果 早期、小剂量龟板提取物对Id1的影响不大；随着时间和剂量的增加,Id1的表达水平也逐渐升高.结论 龟板提取物促进了骨髓间充质干细胞中Id1的表达,剂量越大,作用时间越长,促进作用越明显.
