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河南某农村艾滋病患者劣势耐药毒株的进化及原发耐药研究
目的 了解河南省部分艾滋病患者抗病毒治疗效果及耐药发生情况,分析劣势耐药毒株在该人群本底存在情况.方法 以河南某农村149名初始接受抗病毒治疗的艾滋病患者为研究埘象,采用自建(In-house)基因型耐药检测方法分析抗病毒治疗失败患者HIV-1耐药发生情况,对抗病毒治疗后产生耐药的病例采用等位基因特异性实时定量PCR(allele-specific real-time PCR,ASPCR)方法检测其抗病毒治疗前样本劣势耐药毒株存在情况.结果 抗病毒治疗后患者的HIV-1病毒载量显著下降(t=275,P=0.0001),但CD4+T淋巴细胞绝对数无明显变化(t=1.765 168,P=0.0852).抗病毒治疗失败患者中耐药的发生率为4.88%,ASPCR检测发现,在调查基线时,7例耐药患者伞部存在劣势M184V突变,5例存在劣势K103N突变.结论 河南省部分未治疗的艾滋病患者存在HIV-1原发性耐药毒株,劣势耐药突变可能发展为优势耐药毒株并影响抗病毒治疗的效果.
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两种早期诊断婴儿HIV-1感染方法的一致性评价
目的 评价In-house方法与商品化雅培RealTime艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)定性检测试剂盒(简称雅培试剂盒),检测婴儿足底血干血斑(DBS)早期诊断的一致性.方法 收集217份来自四川、重庆、江苏、新疆等地寄送的HIV阳性母亲所生婴儿的待检DBS样本,用In-house方法检测HIV-1前病毒脱氧核糖核酸(DNA),用雅培试剂盒进行定性检测,并用SPSS 19.0进行统计学分析,从而评价两种方法检测结果的一致性.结果 217份婴儿DBS样本,用In-house方法检测结果为10例阳性和207例阴性,用雅培试剂盒检测结果为9例阳性和208例阴性,两种方法检测不一致的有3例,分析得一致率为98.6%(214/217),Kappa值为0.835,95%可信区间(CI):0.652~1.000,P<0.05.结论 用DBS进行In-house与雅培试剂盒检测,对婴儿早期诊断具有较好的一致性,二者均可用于中国婴儿的早期诊断,为中国HIV婴儿早期诊断(EID)检测方法的选择提供了科学依据.
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一种HIV-1耐药基因型检测方法的一致性分析
目的 评价一种实验室自建(in-house)HIV-1耐药基因型检测方法的可重复性.方法 从2008-2010年已进行HIV-1耐药基因型检测(in-house法)的样品中抽取204份再次进行基因型检测,包括核酸的提取、扩增、测序和序列分析,对两次的耐药结果进行比较.结果 204份样品中,对群体耐药发生的判断上一致性很高,可达98.5%(201/204),在每种抗病毒药物是否发生耐药的判断上[92.2 %(188/204)]具有一致性,对每种抗病毒药物的耐药程度判断一致性为81.9%(167/204),84份样品中共有159个位点在两次检测中出现耐药突变位点上不一致的情况,其中不完全一致的位点有149个,蛋白酶区第71位(13/204,6.4%)和逆转录酶区第103位分别出现多(12/204,5.9 %),完全不一致的位点有10个,出现在蛋白酶区第71位,核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)耐药相关突变位点第67、69、70、215、219位,以及与非核苷类逆转录酶抑制剂(NNR-TI)耐药相关突变位点第90、181、221位.结论 in-house方法双重检测对耐药发生及耐药程度的判断上总体具有良好的一致性.但在方法学尤其是混合碱基的判读上需进一步标化以达到更好的可重复性.由于混合碱基的判读会影响耐药突变位点的确定,加强对检测人员的培训,使他们更加严格地执行混合碱基的判断标准和控制序列的质量是非常重要的.
关键词: 人类免疫缺陷病毒1型 In-house 基因型耐药检测 耐药