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胆汁泡蛋白在胆石症人群的含量分布及其临床意义
目的探讨胆汁泡蛋白在胆石症人群的含量分布,并观察利胆药物对其活性的影响.方法将纯化的泡蛋白免疫新西兰大白兔获得高效价抗体,建立ELISA标准曲线;并应用ELISA法测定正常人、胆石症病人胆汁和血清中泡蛋白含量同时观察不同溶石防石药物如利胆冲剂、胆酸钠等对泡蛋白的影响.结果建立了ELISA标准曲线,其曲线方程为Y=0.035X(r=0.99);正常人胆汁和血清中Mr 33500泡蛋白含量都明显较胆固醇结石病人低[(0.007±0.003) g/L vs(0.050±0.011) g/L,(0.015±0.010) g/L vs(0.045±0.021) g/L,P<0.05];利胆冲剂治疗2周后,胆汁和血清泡蛋白含量显著降低,而对照组和胆酸钠治疗组未见明显变化.结论在不同人群胆汁泡蛋白的含量差异显著;利胆冲剂等溶石防石药物能降低胆汁和血清Mr 33500泡蛋白含量.
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胆汁泡蛋白促成核作用及其主体活性成分的分析
目的分析33.5×103泡蛋白促成核活性以及多肽、糖链改变对其活性的影响. 方法制备人工模拟胆汁,在偏光显微镜下观察结晶成核生长过程,计算成核活性;酶法水解蛋白多肽与糖链结构,通过结晶生长试验检测33.5 ×103泡蛋白促结晶生长作用以及糖链水解、多肽降解产物的活性改变. 结果 33.5 ×103泡蛋白具有强促成核活性,成核活性强达0.310,在不同模拟胆汁体系中,成核活性基本相同;其结晶生长试验活性指数It、Ig、Ic分别为0.57、1.52及1.63(P<0.05).糖苷酶切、肽链酶解后其成核活性均几乎丧失. 结论 33.5×103泡蛋白可能参与成石过程,其中多肽、糖链调节其成核活性.
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胆汁泡蛋白酶联免疫吸附检测法的建立与初步临床应用
目的建立胆汁泡蛋白快速检测法,作为防治胆石症临床研究的指标.方法提取33.5kd胆汁泡蛋白,建立酶联免疫吸附检测法(ELISA)标准曲线,并应用ELISA药盒测定正常人、胆石症患者胆汁和血清中泡蛋白含量,同时观察利胆冲剂、胆通胶囊等对泡蛋白的影响.结果 ELISA曲线方程为Y=0.035X(r=0.99);胆固醇性结石组胆囊胆汁和血清33.5kd泡蛋白含量分别为(213.4±70.1)mg/L、(179.8±97.9)mg/L,明显高于胆色素性结石症、非胆石症胆道疾病组以及正常人组(P＜0.05),而后三者之间没有显著差异(P＞0.05);利胆冲剂治疗两周后,胆汁和血清泡蛋白含量显著降低,而对照组和胆通胶囊治疗组未见明显变化.结论胆汁泡蛋白的含量在不同人群差异显著;利胆冲剂等药物能降低胆汁和血清33.5kd泡蛋白含量,改变胆汁致石性.
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基于胆汁泡相糖蛋白特征而研制诊断胆结石ELISA药盒的可行性分析
目的:分析胆汁泡相糖蛋白的特征并评估其ELISA药盒临床应用的可行性.方法:应用凝集素探针介导的点印迹法分析泡蛋白糖链的组成与结构,利用酶解方法测定泡蛋白各组分的构成,并分析其氨基酸组成.利用Westem blot法分析胆汁与血清泡蛋白的同源性,根据ELISA kit测定泡蛋白的含量分布,并以ROC曲线判别ELISA kit的临床应用价值.结果:化学分析泡蛋白由多肽和寡糖组成,其中多肽分子量约为21 u,糖链约占总蛋白含量的37.3%,为核心岩藻糖丰富的多天线复杂型聚糖.泡蛋白具胆汁与血清分布两相性,胆固醇性结石组胆囊胆汁和血清33.5 u泡蛋白含量分别为(213.4±70.1)μg/ml、(179.8±97.9)μg/ml,明显高于胆色素性结石症组和正常对照组(P<0.05),而后两者间差异无显著性(P>0.05).ELISA kit判断胆固醇性结石的胆汁相敏感度和特异度分别为85%和90%,而血清相为61.7%和93.3%.结论:胆汁泡蛋白是一种新认识的胆结石促成核因子,其在不同人群中具有表达谱的异质性,ELISA kit辅助诊断胆石症具有一定的临床应用价值,但尚需更多病例的积累和验证.
关键词： 糖蛋白 泡蛋白 酶联免疫吸附测定(ELISA) ROC曲线 -
胆石症患者与正常人胆汁33500泡蛋白成核活性的比较
目的 比较胆石症患者与正常人的胆汁33 500泡蛋白成核活性.方法 利用超速离心法从正常人及胆石症患者胆汁中纯化33 500泡蛋白,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其纯化效果.通过Holan法测定成核时间,计算成核活性.结果 胆石症患者的33 500泡蛋白平均成核时间为(3.8±0.7)d,成核活性中位数达0.303,具有强促成核作用,能显著缩短成核时间,促进胆固醇结晶形成.而正常人促成核作用较弱,平均成核时间为(8.4±0.9)d,成核活性中位数仅为0.667.胆石症患者与正常人胆汁33 500泡蛋白平均成核时间及促成核活性的差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 与正常人相比,胆石症患者的胆汁33 500泡蛋白促成核活性明显增强.
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胆宁片对胆汁33.5 kDa泡蛋白糖链结构的影响
目的 探讨胆宁片对胆汁33.5kDa泡蛋白糖链结构的影响.方法 按随机序贯原则将胆石症患者分成治疗组(10例)和对照组(10例),治疗组术后第3天口服胆宁片治疗,对照组术后则不服用.取手术当天(外参对照组)及术后第3、10天的T管胆汁,通过蔓陀螺凝集素探针(DSA)介导的Western印迹法分析两组患者胆汁中33.5kDa泡蛋白糖链天线数目的变化情况.结果 治疗组术后3d的胆汁33.5kDa泡蛋白糖链Western印迹染色条带亮度降低;治疗组术后10 d与外参对照组的33.5kDa泡蛋白糖链条带DSA结合率糖链显著下降(P＜0.05).结论 33.5kDa泡蛋白糖链天线数目变化的时间(用药后7 d)要早于文献报道的变化时间(14 d),进一步证实了33.5kDa泡蛋白糖链数目的增加导致泡蛋白含量及促成核活性改变的推测.
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肺泡蛋白沉积症一例
病例资料:患者,男,49岁,反复咳嗽、气促1年余入院,查体:口唇发绀,双肺闻及中等量水泡音.胸片示两肺纹理增多,纹理间示片状高密度影,以双肺下野为著,肺门影增大、增浓.CT示双肺实质及间质弥漫性斑片装高密度影,边缘模糊,密度欠均.诊断:两肺间质性肺炎.行支气管、肺泡灌洗术见肺灌洗液呈乳白色,PAS染色阳性.诊断为肺泡蛋白沉积.
