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hClock-(35-47)文献资料
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hClock-(35-47)的表达、纯化及其功能的检验
目的 构建hClock-(35-47)的表达质粒,进行诱导表达,纯化,在体外初步鉴定其跨膜功能.方法 合成hClock-(35-47)全长DNA序列,重组入pET-32a表达载体中,测序鉴定后转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,构建好重组体的表达菌株.IPTG诱导并优化表达后,以NTA-Ni亲合层析进行分离纯化,及SDS-PAGE和Western bloting鉴定.纯化鉴定后的hClock-(35-47)用FITC标记,以一定的浓度孵育体外培养的血管内皮细胞(ECV-304),荧光显微镜下观察其穿膜活性.结果 成功构建了hClock-(35-47)的表达载体,插入片断为51 bp,表达产物相对分子质量约为21 kD,经Western bloting 鉴定,与抗His-Tag抗体有特异性反应, 与培养的ECV-304孵化,显示具有穿膜功能.结论 原核表达的hClock-(35-47)仍然保留其穿膜功能,为进一步研究提供基础.
关键词： hClock-(35-47) 纯化 内皮细胞 穿膜功能
