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第1批重组人促卵泡素生物测定用国家标准品的制备与标定
目的:制备并标定第1批重组人促卵泡素(recombinant human follicle-stimulating hormone,Follitropin,rhFSH)国家标准品(生物测定用).方法:以WHO第2批重组人促卵泡素国际标准品08/282作为标准,采用《中华人民共和国药典》2015年版四部1216卵泡刺激素生物测定法,联合4个实验室参加协作标定.蛋白含量及纯度测定采用SE-HPLC法,解离亚基与聚合体测定采用SDS-PAGE电泳法,RP-HPLC法测定氧化α亚基等主要理化指标,参照国家食品药品监督管理总局颁发的生物制品标准YBS00172015进行;采用N端测序、肽图等方法对标准品制备用原液进行了结构确认,并对待标品进行稳定性考察.结果:重组人促卵泡素待标品经协作标定,终定值其生物效价为每瓶174 IU;每瓶重组人促卵泡素含量11.5 μg,纯度96.46％,测定聚合体、解离亚基、氧化α亚基等相关物质理化指标,均符合规定;稳定性考察合格,N端测序和肽图结果均符合理论要求.结论:本批待标品确认为重组人促卵泡素,可作为第1批重组人促卵泡素(rhF-SH)国家标准品,以供重组人促卵泡素及相关制剂的生物效价测定用,本批标准品生物效价为每瓶174 IU.
关键词： 重组人促卵泡素(rhFSH) 国家标准品 体内生物测定 生物效价 -
促卵泡激素体内生物活性测定及其各国药典方法比较
目的:基于长期大量实验数据,对各国药典促卵泡激素(FSH)生物活性测定方法进行梳理、比较.方法:对中国药典2010年版(ChP 2010) FSH生物测定法优化,测定国内外多批重组人促卵泡激素(rhFSH)、尿源FSH及复方rhFSH-rhLH产品的体内生物活性,并就动物数、大鼠体重、溶媒中HCG含量、给药剂量、反应值等与EP7.0和USP 35-NF 30的FSH的生物测定方法进行对比,梳理其异同.结果:ChP 2010每组8只动物与EP7.0和USP 35-NF 30每组5只动物,计算效价结果总平均偏差率为2.3％,总平均可信限率由21.2％升至28.7％,都在生物测定误差允许范围内.ChP 2010规定雌大鼠出生19～23 d,体重36～50g,体重偏小,实验灵敏度差,体重36 ～40 g的大鼠卵巢增重明显小于40 ～50 g的空白组卵巢增重(p＜0.05);溶媒中HCG含量也偏低;给药剂量与EP7.0和USP 35-NF 30相近;卵巢重作为反应值与EP7.0和USP 35-NF 30器官系数作为反应值不同,两者测定结果间差异无显著性意义.结论:每组5只大鼠即可满足实验要求,减少实验动物用量(3R原则).大鼠出生21 ～23 d,体重应为40～60 g(大相差10 g内),溶媒中HCG含量适当增加至25～30 IU·mL-1为佳FSH生物测定实验条件,优化ChP2010的FSH生物测定法.
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重组人促卵泡激素质量控制中理化测定代替生物测定简介
本文综述重组人促卵泡激素(rhFSH)质量控制中的生物测定的作用与局限性.对长期批次间一致的rhFSH产品,理化测定将代替生物效价的测定,但在研发阶段仍需选择生物测定.
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第5批人黄体生成素国际标准品的协作标定
目的:以第4批国际标准品人尿卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)(IS 98/704)作标准,标定国际待标品的效价,为WHO评估该品作为第5批国际标准品发放的适用性和稳定性提供数据.方法:采用幼龄大鼠精囊增重法(SVW)对不同保存条件下的待标品D和待标品F进行效价测定.通过log10(器官重)和log10(器官重/体重)2种数据类型进行效价计算.结果:以第4批国际标准品人尿FSH和LH(IS 98/704)作标准,进行2次独立实验.以器官重作为统计指标,待标品D测得人LH的生物效价分别为192 IU·安瓿-1(95％的置信区间165～223 IU)和173 IU·安瓿-1(95％的置信区间129 ～227 IU);待标品F测得效价为170 IU·安瓿-1(95％置信区间137 ～208 IU)和178 IU·安瓿-1(95％的置信区间136 ～231IU);以器官重/体重作为统计指标,待标品D测得LH的生物效价分别为183 IU·安瓿-1(95％的置信区间为154 ～ 215 IU)和171IU·安瓿-1(95％的置信区间130～222 IU),待标品F测得效价为161IU·安瓿-1(95％的置信区间124 ～204IU)和186 IU·安瓿-1(95％的置信区间144～238 IU).结论:全球9个国家11个实验室提供的有效数据共计26个,合并计算后log10(器官重)和log10(器官重/体重)的几何均值无统计差异.为了确保所有的数据均被采用,WHO统计小组采用log10(器官重)进行数据合并计算.待标品(10/286)由WHO生物标准专家委员会审核通过,作为第5批国际标准品人尿FSH和LH使用,其中LH的生物效价为177 IU·安瓿-1(95％的置信区间159 ～197 IU).
