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SAV文献资料
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稳定表达SAV细胞的建立及其相互作用蛋白的筛选
目的 建立能稳定表达SAV(Salrador Homolog)的人胚胎肾细胞HEK293细胞池并从中纯化出SAV相互作用蛋白复合物.方法 从人胚胎肾细胞HEK293中提取RNA,RT-PCR扩增得到SAV基因片断,构建表达质粒pBabe-SBP-FLAG-SAV.将pBabe-SBP-FLAG-SAV质粒和病毒包装质粒共同转染HEK293T细胞来产生病毒,收获病毒后感染HEK293细胞.通过嘌呤霉素筛选直至没有细胞死亡并用Western-blot验证表达情况.用链酶亲和素beads从该稳定细胞池中纯化SAV相互作用蛋白并通过银染检测.结果 pBabe-SBP-FLAG-SAV真核表达载体构建成功,包装病毒感染HEK293后通过Western-blot检测可见SAV蛋白的表达,FLAG beads和链酶亲和素beads免疫沉淀进一步证明了该融合蛋白表达的正确性.链酶亲和素纯化出的SAV相互作用蛋白复合物在银染时可见.结论 成功构建了pBabe-SBP-FLAG-SAV真核表达载体及稳定表达细胞池,纯化得到SAV相互作用蛋白复合物.为阐明这些蛋白复合体在Hippo信号通路中的作用提供了可靠信息.
