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注射用重组人血清白蛋白与干扰素α2b融合蛋白稳定性研究
目的 考察制品注射用重组人血清白蛋白与干扰素α2b融合蛋白的稳定性.方法 按照《中国药典》2015年三部的方法进行检测,影响因素试验[(42±2)℃高温试验、(4 500±500)Lx强光照射试验、90％高湿试验]、加速试验(37℃加速试验与25℃加速试验)及长期稳定性试验,方法均按照《生物制品稳定性研究技术指导原则》进行.结果 影响因素试验、加速试验及长期试验结果显示,温度对于本制品的纯度有一定的影响,随着试验温度越高,制品纯度变化越快,保存时间越短;湿度对制品的水分也有影响,其他指标相对稳定;通过长期稳定性考察发现,制品的试验样品在2～8℃密闭储存条件下保存24个月是相对稳定的,且各项考察指标均符合质量检定标准.结论 本制品注射用重组人血清蛋白与干扰素α2b融合蛋白在2～8℃密闭储存条件下保存24个月,各项考察指标保持稳定,且均符合质量检定标准.
关键词： 重组人血清白蛋白 干扰素α2b融合蛋白 温度 湿度 稳定性 -
人血清白蛋白的制备与应用研究进展
目的 综述近年来人血清白蛋白的制备方法及其在药物研究中的应用.方法 根据国内外相关文献,对人血清白蛋白的制备方法及应用进行整理与总结.结果与结论 目前,国内的人血清白蛋白主要是通过从血浆中分离而得到,而国外已有重组人血清白蛋白的产品上市.人血清白蛋白在药物研究中的应用主要包括作为基因载体、诊断试剂、手性物质分离剂、细胞培养添加剂等.
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重组人血清白蛋白在结构生物学方面的研究进展
人血清白蛋白（human serum albumin，HSA）是由585个氨基酸组成的无糖基化单链多肽，相对分子质量为665000，等电点为4.7~4.9。HSA是人血浆中含量丰富的蛋白质之一，占血浆蛋白总量的60％。HSA主要由肝细胞合成，分泌进入血液循环系统，在人体代谢物和药物的转运、分布、代谢中发挥重要作用。同时，HSA对维持人正常血浆胶体渗透压和血浆pH起着至关重要的作用［1-3］。
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发酵液中重组人血清白蛋白的纯化
采用摇瓶培养重组毕赤氏酵母(Pichia pastoris)表达并分泌重组人血清白蛋白(recombinant human serum albumin,rHSA)至胞外,发酵液经(NH4)2SO4沉淀、离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤分离纯化rHSA,纯化样品经SDS-PAGE检测为单一条带.
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重组人血清白蛋白的研究进展
人血清白蛋白(Human serum albumin, HSA)是现代医学中一种重要的临床生物制品,主要用于维持血浆胶体渗透压及作为血浆容量扩充剂,广泛应用于出血性休克、烧伤、癌症、白细胞增多症、白蛋白过少症等.HSA主要靠收集人的血液分级过滤获得,有可能被病毒、致病蛋白粒子等污染.目前人们利用生物工程技术表达重组人血清白蛋白(Recombinant HSA, rHSA),其结构和功能与血浆来源的血清白蛋白(Plasma derived HSA, pdHSA)相似.预临床和临床试验已证明rHSA可安全地应用于多种疾病治疗.
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重组人血清白蛋白体外诱导干细胞向心肌细胞的分化
目的 探讨植物源重组人血清白蛋白能否替代传统B27细胞培养添加剂作为基础培养基分化人多潜能干细胞为心肌细胞.方法 人多潜能干细胞以1.2×l04个/cm2的细胞密度接种,汇合度达至75％后采用含有0、50、100、200 g/L不同浓度植物源重组人血清白蛋白的分化培养基对其进行诱导分化,在光学显微镜和荧光显微镜下记录干细胞向心肌分化的全过程.用流式细胞仪检测不同浓度植物源人血清重组白蛋白心肌细胞的分化效率.用免疫荧光染色检测心肌细胞特异性标志物α-辅肌动蛋白(α-actinin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT);用电镜观察人多潜能于细胞来源心肌细胞的超显微结构以及心肌细胞对药物的反应.结果 大量的自发跳动心肌细胞在诱导分化第9d左右出现,浓度为200 g/L的重组人血清白蛋白配成的心肌分化液的分化效率达60.4％;跳动心肌细胞α-actinin和cTnT染色阳性,超显微结构有肌丝的存在,且对异丙肾上腺素和维拉帕米呈剂量依赖性.结论 利用成分明确的、无动物源性的方法在体外诱导人多潜能干细胞分化为心肌细胞,分化效率达60.4％,分化方法简单且低成本,可作为临床级别使用.
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重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白质控方法与质量标准的建立
目的:建立重组人血清白蛋白-干扰素a2a融合蛋白(rHSA - IFNα2a)的质控方法和质量标准.方法:分别使用抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体、采用免疫印迹法对成品进行鉴别试验,采用WISH细胞病变抑制法测定成品和原液的生物学活性,原液以胰蛋白酶酶切后,用HPLC分析肽图,其余项目按2010年版中国药典(三部)的规定进行检测.结果:样品与抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体均呈阳性反应,比活性＞1.5 ×105 IU· mg-1,其肽图与参考品的一致,其余项目均符合2010年版中国药典(三部)的规定,根据检测结果建立了rHSA - IFNα2a的质量标准.结论:建立的质控方法和质量标准可以保证rHSA - IFNα2a的安全、有效和质量可控,可以用于rHSA - IFNα2a的常规检定.
