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中药材DNA分子标记研究的技术问题Ⅱ.RAPD实验技术和方法学论述
主要根据作者的经验,对RAPD实验技术中的扩增仪及扩增程度、DNA模板浓度及纯度、引物的种类与浓度、Taq酶、缓冲系统、Mg2+、dNTP的浓度、设立空白对照、扩增产物鉴定、条带统计和同源性认定、RAPD反应程序标准化等问题进行了论述,其中降解了的DNA模板在不同的浓度时会产生不同的扩增式样,国产Taq酶的不同批次间会产生较大的扩增差异为首次报道,并提供了获得清晰条带的电泳策略.概述了RAPD的主要特点和适用范围.
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Taq酶浓度对HLA基因分型结果的影响
目的探讨Taq酶浓度对HLA基因分型结果的影响.方法对1例血液病患者血样用不同量的Taq酶进行HLA分型.结果加入Taq酶的量为4.5 μl、10.5 μl时,未出现特异性的结果,加入7.5 μl时出现了特异性结果.结论不同量的酶结果差异很大,所以在酶的用量上,应当引起重视.不同实验室应根据自身条件,摸索佳反应条件和Taq酶浓度.
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不同DNA提取方法及Taq酶浓度对人白细胞抗原-B27基因分型结果的影响
目的 探讨两种DNA提取方法(加热法、盐酸胍法)及不同浓度Taq酶对人白细胞抗原(HLA)-B27基因分型结果的影响.方法 经柠檬酸右旋糖液抗凝的全血7人份,对比用加热法和盐酸胍法提取的DNA进行HLA-B27基因分型效果的差别;选取上述阴、阳性标本各1份,以Taq酶作浓度梯度试验,用浓度分别为每50微升0.3、0.6、1.2、2.4、4.8、7.2 U 6个梯度进行对比试验,摸索出HLA-B27基因分型试验中所需的佳Taq酶浓度.结果 用盐酸胍法所提取的DNA在HLA-B27基因分型实验中能达到很好的效果,而加热法的内对照不清晰.Taq酶浓度在0.3 U/50 μL时条带不清晰,在7.2 U/50 μL时阴性标本易产生非特异性条带.结论 盐酸胍法提取DNA优于加热法.不同实验室应根据自身条件确定佳反应条件及Taq酶浓度.
关键词： DNA/分离和提供 Taq酶 人白细胞抗原-B27 基因型 浓度梯度试验
