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成纤维细胞生长因子2不同作用时长对软骨细胞的影响
目的 比较成纤维细胞生长因子2(FGF2)体外不同作用时长对兔关节软骨细胞增殖及基因表达变化的影响.方法 分离、培养兔膝关节软骨细胞.取第3代软骨细胞分为3组进行研究:短时间(1 d)作用组细胞经FGF2处理1d后转移至无FGF2的培养基中继续培养7d;长时间(7 d)作用组细胞用含FGF2的培养基连续培养7d;对照组细胞用无FGF2的培养基连续培养7d.分别于培养过程中的第1、3、7天,收集软骨细胞进行细胞增殖情况检测;提取软骨细胞mRNA,并通过实时荧光定量PCR检测骨形态发生蛋白2(BMP2)、骨形态发生蛋白4(BMP4)、Ⅱ型胶原α1(COL2A1)和性别决定区Y框蛋白9(SOX9)的表达情况;采用免疫荧光染色测定软骨细胞Ⅱ型胶原的含量.结果 与对照组相比,不同时长的FGF2处理均能促进软骨细胞的增殖,且短时间作用组和长时间作用组间差异无统计学意义(P＞0.05).实时荧光定量结果显示,不同的处理方式引起了不同的基因表达变化,在连续培养7d后,与对照组和长时间作用组比较,短时间作用组的BMP2、BMP4、COL2A1和SOX9基因表达均上调,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).免疫荧光染色结果表明,连续培养7d后,短时间作用组的Ⅱ型胶原含量明显高于对照组和长时间作用组.结论 FGF2短时间作用于软骨细胞较长时间作用更有利于软骨细胞表型的维持和细胞外基质的合成.
关键词： 成纤维细胞生长因子2 软骨细胞 长时间作用 短时间作用
