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大鼠小胶质细胞文献资料
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NaHS对ATP诱导大鼠小胶质细胞P2X受体表达的影响
目的:观察硫化氢(H2S)供体硫氢化钠(NaHS)对ATP致伤的大鼠小胶质细胞细胞活力、细胞膜通透性及P2X7受体表达的影响.方法:实验取对数期形态结构及生长分化良好的大鼠小胶质细胞,随机分4组,每组设3个复孔.①正常对照组:常规培养,不进行ATP处理.②ATP组:接种细胞24h后ATP处理.③NaHS+ ATP组:NaHS预先孵育30 min后再用ATP处理,并且NaHS始终存在于反应体系中.④KN-62(P2X7受体阻断剂)+ATP组:KN-62预先孵育30 min,其余同NaHS+ ATP组.MTT检测各组细胞活力,荧光染料YO-PRO-1检测各组相对荧光单位(RFU)反映膜的通透性,Western blot检测各组P2X7受体表达水平.结果:①与对照组相比,不同浓度的ATP(1、3、5、10 mmol/L)作用3h均可明显降低大鼠小胶质细胞活力,NaHS(200 μmol/L)干预后大鼠小胶质细胞活力较ATP组明显增加(P＜0.01),但NaHS达400 μmol/L浓度时,其保护作用未进一步增加.②随着ATP浓度的增加,大鼠小胶质细胞内YO-PRO-1的荧光强度显著增加,NaHS预处理可明显减少细胞对YO-PRO-1的摄取(P＜0.01).③ATP(3 mmol/L)能上调P2X7受体蛋白表达水平,而NaHS(200 μmol/L)预孵育则可明显抑制ATP引起的P2X7受体蛋白表达的上调(P＜0.01).结论:NaHS可减少ATP致伤的大鼠小胶质细胞的P2X7受体表达、降低通透性、增加细胞活力,提示调控P2X7受体的表达和功能可能是H2S神经保护作用的重要环节.
