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重组蓖麻毒素与相思子毒素B链嵌合体蛋白的制备与分析

王俊虹;杨帆;魏茂提;徐忠伟

摘要: [目的]观察蓖麻毒素(ricin toxin,RT)、相思子毒素(abrin toxin,AT)B链的嵌合体蛋白原核表达并分析其抗原性和毒性.[方法]利用柔性linker-(G4S)3连接两个毒素B链基因(RTB和ATB),优化嵌合体基因RTB-ATB后构建表达质粒pQE80L-RTB/ATB,转化至E.coli M 15获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化;通过Western印迹检测RTB-ATB的抗原性;采用人正常肺上皮细胞Beas-2B和胃黏膜细胞GES-1进行嵌合体蛋白的细胞毒性实验.[结果]RTB-ATB全长1 647bp,编码549个氨基酸残基;E.coli M15在诱导条件为30℃、1 mmol/L IPTG,3h后获得包涵体形式表达的目的蛋白,相对分子量约为60×103 Da,经Ni柱纯化后纯度达98.9%;Western blotting印迹结果表明嵌合体蛋白保持RTB和ATB原有各自的抗原性;MTS实验结果表明目的蛋白无毒性.[结论]嵌合体蛋白RTB-ATB实现高表达,具有良好的抗原性,为研制针对RT和AT的双价疫苗奠定基础.

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