实时荧光RT-PCR技术在黄热病快速检测中的应用
摘要： [目的]建立黄热病病毒的实时荧光RT-PCR检测方法并用于口岸黄热病的快速检测. [方法]体外转录黄热病病毒5-UTR的部分序列核酸作为阳性对照模板,设计实时荧光RT-PCR不同的反应程序和引物/探针浓度的组合,摸索佳反应体系条件并用于黄热病疫苗和入境发热患者标本的检测.[结果]建立的黄热病病毒的实时荧光RT-PCR检测方法佳反应体系为:2xRT-PCR缓冲液10 μl,正向引物5UTR-FP终浓度750 nM,反向引物5UTR-RP终浓度750 nM,探针5UTR-Probe终浓度500 nM,25xRT-PCR Enzyme Mix 0.8μl,RNA 5μl,用DEPC H2O补足到反应总体积20μl;Roche lightcycler仪器适用的扩增程序为:45℃10 min,95℃10 min;95℃5 s,56℃10 s(single),72℃15 s,45次循环.该方法低检测限约为20copies病毒/反应,与登革病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、基孔肯雅病毒等蚊媒病毒无交叉反应.应用该方法对黄热病疫苗、媒介蚊虫和入境发热患者的血清标本进行检测,结果为黄热病疫苗核酸阳性,其他标本为阴性.[结论]该实时荧光RT-PER方法灵敏度高,特异性强,适用于黄热病病毒的快速检验,防止该病在国境口岸的传入.
-
二恶英类化合物的环境污染、毒性及分析方法
1999年1月,比利时、荷兰、法国及德国相继发生严重的畜禽类产品及乳制品二恶英污染事件,随后在一些猪肉和牛肉中也发现了二恶英.除牛肉外,我国从以上四国进口畜禽类及乳制品,包括奶粉、鲜奶、奶酪等.事件发生后,引起世界广泛关注,包括我国在内的各进口国纷纷采取紧急措施,停止进口四国该类产品.因二恶英的毒性大,已成为近年世界发达国家研究多的化合物之一,有的国家不仅建立了专门的网站,随时发布新研究成果,还通过各种媒体对公众宣传二恶英对健康的影响.笔者根据近年世界各国对二恶英的研究成果,从二恶英的环境污染、对人体健康的影响及其分析方法等几方面作一综述.
-
O139霍乱弧菌的毒素和耐药性
O139霍乱弧菌(VCO139)是引起O139霍乱的病原菌,1992年10月19日起源于印度南部城市马德拉斯,几周之内传播到印度其他地区,同年12月孟加拉国出现O139霍乱流行[1].到1993年3月两国报告10多万病人,一千多人死亡,同年泰国、中国、巴基斯坦等国家报告了O139霍乱,在美国等国家和地区出现了输入性O139霍乱病例[2].由于O139霍乱在临床上与EL Tor霍乱无法区分,有些专家甚至担心由于人群缺乏对O139的免疫力,极易发生爆发与流行,甚至有可能引发第八次世界霍乱大流行[3,4].霍乱弧菌产生多种毒素,在构成霍乱弧菌的毒力中起到关键作用,那么,VCO139能产生哪些毒素呢?它的耐药性怎样呢?现将目前有关研究简要总结如下:
-
砷的毒性与生物学功能
关键词： 毒性 -
山东省1997年HIV血清学监测分析
1997年山东省对HIV/AIDS高危人群、重点人群进行HIV血清学检测,共检测57372人份血清标本,检出HIV抗体阳性者4例.其中检测国家级哨点的高危人群血清标本737人份,结果全部阴性.对本省HIV监测网络的高危人群、重点人群检测血清标本56635人份,阳性4份.其中工人1份,女性,为HIV感染者配偶;农民3例(2男,1女),均为有偿供血者.
-
37例梅毒血清学抗体阳性者调查分析
目的:为进一步加强监测,控制梅毒.方法:针对1997年至1999年8月东莞口岸,梅毒血清学检测中发现的梅毒血清抗体阳性37例进行流行病学调查分析.结果:男性35例,女性2例;隐生梅毒者35例,二期梅毒者2例.(30-49)岁26例,50岁以上6例,30岁以下5例.外籍人员3人,中国台湾省籍人员11人,国内出国人员5人,中国国际船员18人.建议:加强入出境人员梅毒监测,加强健康教育,对梅毒患者做好早发现,早诊断,早治疗.
-
女性性乱者淋球菌、人乳头瘤病毒、沙眼衣原体、解脲支原体感染状况的研究
本文采用PCR技术检测了166例女性性乱者宫颈分泌物中淋球菌(NG)、人乳头瘤病毒(HPV)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)四种病原体的感染状况.结果表明:女性性乱者中HPV-DNA的阳性率高,为33.1%,NG-DNA、CT-DNA、UU-DNA的阳性率分别为27.1%、27.1%和14.5%.各种病原体之间存在交叉感染,该人群的混合感染率为24.1%,以NG与HPV混合感染多占25.0%.经流行病学分析,性病感染可能的危险因素为:性生活初始年龄早(＜20岁),性伴数多(≥3)以及流产史等.
-
四川省部分城市性传播疾病流行因素及防制对策初探
-
某职业中专学校乙型肝炎病毒感染情况调查报告
本文以1995年11月库尔勒市职业中专学校289名住校学生为对象,进行HBsAg阳性检测.结果表明:阳性率为13.15%,明显高于新疆地区学生平均水平.经进一步HBV血清标记物检测,发现具有传染性的HBV感染者占15.79%;具有弱传染性的HBV感染者占42.11%.本调查认为:体检部门和单位应严格体检制度,学校应及时复查.
-
恶性疟原虫丝氨酸重复抗原基因在大肠杆菌中的表达
采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫云南株(PFD-3/YN)丝氨酸重复抗原基因片段,经基因序列测定后克隆于pGEX-4T-1融合蛋白表达载体,并转化大肠杆菌TG1.SERA基因与pGEX-4T-1重组后能在大肠杆菌TG1中表达一45KDa的融合蛋白,当工程菌OD590为0.8～1.0时,加入终浓度1mmol/L IPTG进行诱导,表达量较高.采用dot-ELISA对表达产物进行鉴定.结果表明SERA融合蛋白能被抗SERA单克隆抗体所识别.
-
谈救灾防病--兴化市1998年大灾之后无大疫的启示
兴化市地处江淮之间的苏北里下河腹部,全境地势低洼,河荡密布,为典型的水网地区.全市总面积2393平方公里,总人口153万,1998年由于降雨强度大,上游客水压境,形成全境内涝.
