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IL-15与IL-21细胞因子组合优化临床级人NK细胞培养体系

陈伟；杨冀；蔺迪；刘军德；欧阳明玥；薛峰；孔伟圣；于卉影

关键词：自然杀伤细胞免疫治疗白细胞介素-15 白细胞介素-21 抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体细胞培养

摘要： 目的：探讨IL-15、IL-21细胞因子组合建立的临床级人NK细胞培养体系对NK细胞增殖、免疫细胞表型和细胞毒作用的影响。方法分离9例健康志愿者外周血单个核细胞(PBMCs),根据以下3组进行扩增培养：(1)对照组(我科临床级人NK细胞培养体系),(2)IL-15组(对照组+IL-15),(3)IL-15/IL-21组(对照组+IL-15+IL-21)。台盼蓝拒染法计数细胞总数和活力；流式细胞术分析免疫细胞表型和NK细胞活化受体表达；乳酸脱氢酶释放法检测细胞毒活性。结果培养至14 d,IL-15/L-21组细胞总数明显升高,NK细胞增殖倍数达到(761．68±449．30)倍,明显高于IL-15组,差异有统计学意义(P<0．05)；IL-15/IL-21组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0．01)。3组培养物中CD3-/CD56+细胞百分率比较,IL-15/IL-21组和IL-15组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0．05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0．05)；3组中CD3+/CD4+细胞百分率均呈下降趋势,且IL-15/IL-21组和IL-15组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0．05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0．05)；3组中总CD3+细胞百分率比较,IL-15组明显低于对照组(P<0．05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0．05)。 IL-15/IL-21组NKG2D活化受体表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0．05),但与IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0．05)。3组中CD3+/CD56+细胞百分率、CD3+/CD8+细胞百分率以及NKp46活化受体的表达水平比较,差异均无统计学意义( P>0．05)。相同的效靶比,3组细胞的细胞毒作用比较,差异均无统计学意义( P>0．05)。结论采用IL-15/IL-21组合优化人NK细胞培养体系,可以选择性地扩增NK细胞,提高培养物中NK细胞数量和细胞总数,以及活化受体NKG2D的表达水平,这将为优化临床级人NK细胞制备体系提供科学依据。

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